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    公开号:WO1991011510A1
    申请号:PCT/JP1991/000108
    申请日:1991-01-30
    公开日:1991-08-08
    发明作者:Tomotari Mitsuoka；Kazumasa Suzuki；Mitsugu Hayashi；Umeyuki Doi；Tsuneo Hadeishi
    申请人:San-Ei Sucrochemical Co., Ltd.；
    IPC主号:C12R1-00
    专利说明:
    [0001] 明 柳 . 発明 の 名 称
    [0002] ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F - 1 3 3 そ れを 用 い た 乳酸菌製剤及び そ の 製造方法 ， 技術分野
    [0003] 本発明 は 、 ラ ク ト バ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F
    [0004] 1 3 3 、 そ れを 用 い た 乳酸菌製剤及び そ の製造方 法 に 閬す る . 背景技術
    [0005] 乳酸菌 は、 人や動物 の 腸管や腔内 に 常在菌叢 と し て 分布 し 、 健 慮維持 に 役立つ こ と が従来 よ り 知 ら れて い た が、 最近、 特 に 腸内菌叢 の 研究が飛躍 的 に 進む に つ れて 、 乳酸菌 の 役割が次第 に 明 ら か に さ れて き た
    [0006] そ の た め 、 発酵乳， 乳酸菌飲料 な ど の 乳酸菌を 舍む食品 や 乳酸菌製剤 の 効菜か注 目 さ れて い る 。
    [0007] と こ ろ で 、 かか る 腸内菌霰は、 大別す る と 、 乳 酸菌群、 嫌気性群、 纾気性群 の 細菌か ら な る 。
    [0008] ま た 、 こ れ ら の 腸内菌叢 に は、 乳酸菌等 の よ う に人や動物 に と っ て 有用 な有用 菌 と 、 逆に害に な る 有害菌 と が あ り 、 こ れ ら の 有用 菌 と 有害菌 と が 一定 の バ ラ ン ス で 腸内 に 棲息 し て い る 。
    [0009] こ こ で 、 有用 菌 と は、 ビ タ ミ ン や蛋 白 質 の 合成 消化吸収 の 補助、 外来菌 の増殖抑制、 免疫機能 の 刺激等、 宿主 の 健康維持 に役立つ菌を い い 、 れ に 対 し て有害菌 と は、 腸内 で宿主 に と っ て有害な 種 々 の 物質を 生成 し 、 急性や慢性 の 疾病、 老化、 発がん に 関与 し て い る と 考え ら れて い る 菌を い う 。
    [0010] 従 っ て 、 腸内 の有害菌 を 抑制 し た り 、 反対に有 用菌を 増す よ う に す れ ば、 人間 の 病気 や老化、 発 がん を 抑え 、 健康が維持で き る と 考え ら れ る 。
    [0011] ま た 、 家畜 に つ い て も 、 有用 菌で あ る 乳酸菌な ど の 細菌 ま た は そ の 発酵産物 の 投与が、 発育を促 進 し 、 下痢な ど の 病気を 予防ま た は治癒す る た め に 効果的で あ る こ と が従来 よ り 知 ら れて お り 、 特 に最近そ の 応用 が盛 ん に な っ て き た 。
    [0012] こ れ ら の 製剤 は プ 口 ノ ィ ォ テ ッ ク （ P r 0 b i 0 t i c s ) と 呼 ばれ、 世界的' 使用 さ れ る よ う に な っ て き た と こ ろ で 、 生 ま れ た 直後 の'幼動物 は 、 本質的 に は無菌 で あ る が、 出生後直 ち に外界か ら 細菌が侵 入 し始 め る
    [0013] そ し て 、 幼動物 の 腸内菌叢 に お け る 有用 菌 と 有 害菌 と の ノ ラ ン ス は、 生後の- 日 令 に し た が っ て 次 第 に安定 し た も の と な る が、 外界や飼料 な ど の 変 化 に よ っ て 影響を 受け易 い。
    [0014] す な わ ち 、 幼動物で は、 有用 菌 は容易 に 減少 し 易 く 、 日 和見的 な 大腸菌が速やか に増殖 し 易 い 。
    [0015] こ の よ う に 、 日 和見的 な大腸菌が増殖す る と 、 腸内菌叢 の バ ラ ン ス が乱れ、 発病 の 原因 と な り 易 い
    [0016] こ の よ う な 場合 に は、 幼動物 に 乳酸菌等 の 生菌 剤を 予防的 に 投与 し て お く と 、 腸内 を 酸性 に 保つ こ と で 大腸菌 の 増 ^を 抑制で き 、 腸内 菌叢 の 乱 れ に よ る 発病予 防 に効杲が あ る 。
    [0017] こ の よ う な 生菌剤 の 投与 は、 一般的 に 幼動物 に' お て 顕著 な 効果が認 め ら れ る が、 健康 な 成動物 に お い て も か な り の 効果が認 め ら れ る 成動物 の 腸内菌叢 は、 .常 に 一定な も の では な く 、 微妙 な ノ ラ ン ス を 保 っ て い る た め 、 ス ト レ ス な ど 外界 の 刺激 に よ っ て そ の バ ラ ン ス は容易 に壌れ る 。
    [0018] す な わ ち 、 腸内菌叢 の ノ ラ ン ス は腸内 の p Hに 強 く 依存 し て い る 。
    [0019] 従 っ て 、 乳酸菌が優勢で 乳酸を十分生成 し て い れば、 腸内 を 酸性 に 保つ こ と がで き 、 大腸菌 の 增 殖 は抑制 さ れて い る 。
    [0020] 逆に 、 乳酸菌 の 活性が低下 し 乳酸 な ど の 有機酸 が滅少す る と 、 大腸菌 は容易 に 増殖 し 、 下痢な ど の病気 の 原因 と な る 。
    [0021] 生菌剤 に 用 い ら れ る 細菌 は、 腸内細菌 に 由来す る も の と 腸内常在菌で な い も の と が あ る が、 投与 し た動物 の 腸 内 で 増殖す る 性質を 有す る 腸内铂菌 に 由来す る も の が理想で あ る 。
    [0022] し か し な 力く ら 、 腸内細菌 に は、 動物種が異な る と 種特異性 の た め 腸内 で 定着で き な い も の も あ る 。
    [0023] すな わ ち 、 例え そ の腸内細菌が動物固有 の も の で あ っ て も 、 外か ら 投与 し た 場合 は先住菌 に よ つ て排除 さ れ る 傾 向 が強 く 、 腸内 で の 定着増殖 は必 ず し も 期待で き な い
    [0024] そ の た め 、 菌 の 投与 を 中 止す る と 、 既 に 投与 し た 菌が比較的短時間 の う ち に 腸 内 か ら 消失す る の が普通 で あ る 。 '
    [0025] こ の よ う な 場合 で も 、 生菌剂を 一定量以上連続 投与す れ ば定着 と は関係 な し に 下痢 の 予 防治癒や 発育促進 に 有効で あ る と の 報告が あ る が、 そ れ は 投与 し た 細菌が 自 ら 腸 内 で 作用 す る か、 も と も と 腸内 に い た 有用 細菌を 維持増殖 さ せ た も の と 考え り れ る
    [0026] 一般 に 、 生菌剤が有効 に 作,用 す る た め に は、 必 要量 の 生 き た 菌が胃 を 通 じ て 腸 に 到達す る 必要が あ る
    [0027] そ の た め 、 細菌 に求 め ら れ る 条件 は、 製剤 中 で 安定で あ る こ と 、 混合す る 飼料中 ま た は飲水 中 で 安定で あ る こ と の 他 に も 、 特 に 、 消化管 の 中 で も 強 い 酸性 を 示す 胃 の 中 で こ れ に 耐え る 耐酸性が あ る こ と 、 更 に 、 小腸内で は胆 汁 の 殺菌力 に 抵抗性 があ る こ と 等 が掲 げ られ る 。
    [0028] ま た 、 現在、 生菌剤 と し て 強 く 望 ま れて い る の は、 生菌 の 活性が強 く 腸内 で の 作用 が高 い こ どで あ る
    [0029] さ ら に 、 生菌 は、 腸内 で 旺盛 に 増殖 し て 定着す る こ と が望 ま し く 、 少 な く と も 存住乳酸菌 の増殖 を 促す効果が高 い こ と が必要で あ る 。
    [0030] かか る 生菌剤 は、 製剤 と し た 場合 の 菌 の生存安 定性が高 く な く て ば な ら な い し 、 そ の上、 特 に 、 消化管 内 で の 過酷な条件 に も 耐え て 、 腸内 に ま で 充分達す る も の で な け れば な ら な い 。
    [0031] し か し 、 現在多数 の生菌剤が市販 さ れて い る が、 こ れ ら の 条件を十分満 た す も の は、 残念 な が ら 存 在 し な い 。
    [0032] 本発明 の 解決 し ょ う と す る 課題 は、 生菌剤 に 求 め ら れ る 条件 に適合 し た 乳酸菌株を見 い 出 し 、 十 分 な 生存安定性があ り 諸条件 に 適合す る 乳酸菌製 剤 と 、 該製剤 の 製造法を 提供す る こ と に あ る . 発 明 の 開示
    [0033] 本発 明者 ら は、 上述 の 諸条件に 適合 し た 乳酸菌 を求め 、 各種動物、 即 ち、 牛、 豚、 鶏 な ど の 腸 内 か ら多 数 の..乳酸菌株 を 分離 し 、 培養 し て 菌 の 特性 を 調べ た 結果、 牛 の 腸内 か ら 常法 に 従 っ て 純粋分 離す る こ と で 、 本発明 の 目 的 に 合致す る 優秀 な 乳 酸菌株を 取得 す る こ と に 成功 し た 。
    [0034] 即 ち 、 本発明 は、 新規 な ラ ク ト バ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ レ ス Lactobaci l lus acidophi lus F — 1 3 3 〔 微ェ研条寄第 2 6 8 0 号 〕 と 、 こ の ラ ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ト ' ィ ル ス （ Lactobaci l lus acidophi lus ) F — 1-' 3 3 〔 微ェ研条寄第 2 6 8 0 号 〕 を 用 い た 乳酸菌製剤 と 、 該 ラ ク ト バ チ ル ス • ァ シ ド フ ィ ゾレ ス ( Lactobaci l lus acidophi lus) F - 1 3 3 〔 微ェ研条寄第 2 6 8 0 号 〕 を 、 発酵 性糖類を 主炭素源 と し た 培地 に 接種 し て 、 通性嫌 気性菌 に 適 し た 培養条件 で 培養 し て 増殖 さ せ た 後 菌体を 分離 し 、 乳酸菌製剤 と す る 、 乳酸菌製剤 の 製造方法 と で あ る 。
    [0035] 本発 明 に 係 る ラ ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ イ ノレ ス ( Lactobaci l lus acidophi lus ) F 一 1 3 3 は、 日 本国茨城県 に あ る 通商産業省工業技術院微生物 工業技術研究所 に 、 平成元年 （ 1 9 8 9 年 ） 1 0 月 2 0 日 付で 微ェ研菌寄第 P — 1 1 0 6 4 号 （ FE RM P- 11064) と し て寄託 さ れた が、. そ の 後平成元 年 （ 1 9 8 9 年 ） 1 2 月 1 3 日 付で 同所 の 国際寄 託 に 移管 さ れ、 受託番号が微ェ研条寄第 2 6 8 0 号 ( FERM BP— 2680 ) と 変更 さ れ た 。
    [0036] こ の 新規 な ラ ク ト ノ、 'チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F 一 1 3 3 は、 次 の菌学的性質を有す る 。
    [0037] (a) グ ラ ム 陽性、 無芽胞形成性、 通性嫌気性捍菌。
    [0038] ( ) グ ル コ ー ス を 発酵 し 、 乳酸 （ D L ) を産生す る 。 グ ル コ ー ス か ら ガ ス を産生せず、 1 5 て で 発 育お よ び運動性 は陰性で あ る 。 グ ル コ ー ス 、 マ ン ノ ー ス 、 フ ラ ク ト ー ス 、 ガ ラ ク ト ー ス 、 シ ユ ー ク ロ ー ス 、 マ ル ト 一 ス 、 セ ロ ビ オ ー ス 、 ラ ク ト ー ス 、 ト レ ノヽ ロ ー ス 、 デ キ ス ト リ ン 、 ス タ ー チ 、 エ ス ク リ ン 、 サ リ シ ン お よ び ア ミ グダ リ ン よ り 酸を 産生 し 、 逆 に 、 ァ ラ ビ ノ ー ス 、 キ シ ロ ー ス 、 ラ ム ノ ー ス 、 リ ボ ー ス 、 メ リ ビ オ ー ス 、 ラ フ イ ノ ー ス 、 メ レ チ ト ー ス 、 ソ ル ビ ト ー ル 、 お よ び マ ン ニ ト ー ル よ り の酸の産生 は認 め ら れな い。 B L 寒天培地、 L B S 寒天培地、 M R S 寒天培地、 ブ リ ッ グ ス . リ ノ、'一 · .ブ ロ ス （ B r i g gs Liver Broth ) で の 発育 性 は良好 で あ る 。
    [0039] (c) 本菌 の 表現型 （ 上記 に 示 し た 性状 ） で は、 本 菌 は ラ ク ト ノ、 ' チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス
    [0040] ^ Lactobaci l lus acidophi lus ) と 同定さ れ る 。 し 力、 し 、 D N A ホ モ ロ ジ 一 （ homology ) の 性状 で は ラ ク ト ノ チ ル ' ァ シ ド フ ィ ル ス
    [0041] ( Lactobaci l lus acidophi lus ) で は な く 、 ラ ク ト バ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス （ Lactobaci l lus acidophi lus ) に近 い ラ ク ト ノ チ ノレ ス · ァ シ ド フ ィ ル ス グ ノレ一プ ( L a c t 0 b a c i 11 us acidop i lus group ) の 菌 で あ る こ と が示 さ れ た 。
    [0042] 以上 の 菌学的性質.か ら 、 本還 は、 ラ ク ト バ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス グ ノレ一ブ （ Lactobaci l lus acidophi lus group ) に 属す る 新規 な 微生物 で あ る と 判断 さ れ 、 ラ ク ト バ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス
    [0043] ( Lactobaci l lus acidophi lus ) F — 1 3 3 と 命 名 さ れ た 。
    [0044] 次 に 、 上記 の ラ ク ト パ チ ル ス ♦ ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 を 用 い た 乳酸菌製剤 の 製造法 に つ い て 説明 す る 。 .
    [0045] 該乳酸菌製剤 は 、 ラ ク ト バ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 を 、 グ ル コ ー ス 、 フ ラ ク ト ー ス 、 シ ユ ー ク ロ ー ス 等 の 発酵性糖類を 主炭素源 と し 、 更 に、 微生物 に 利用 可能 な 窒素化合物、 例え ば、 ペ プ ト ン 、 麦芽 エ キ ス 、 コ ー ン ス テ ィ ー ブ リ カ ー 酵母 エ キ ス 等 の 窒素源や、 硫酸第 1 鉄、 硫酸 マ ン ガ ン 、 酢酸 ナ ト リ ウ ム 、 遴酸 1 水素 カ リ ウ ム 等 の 無機塩類や、 ツ イ ー ン 8 0 ( T w e e n 8 0 ) 等 を 添加 し た培地 に 接種 し て 、 通性嫌気性菌 に 適 し た 培養 条件で 培養 し て 増殖せ し め 、 菌体を 洗浄、 分離 し た 後、 保護剤を 加え て乾燥 し 、 更 に 使用 目 的 に 応 じ て菌濃度を 調整す る た め の増量剤 を 加え 製剤 と す る こ と で製造す る 。
    [0046] ラ ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 の 培養 は、 通常、 液体培地 を 用 い て 、 嫌気的条件で 培養す る の が好 ま し い が、 該菌 は通性嫌気性 で あ る た め 、 完全 な 嫌気条件で な く て も よ い 。
    [0047] 当 該液体培地 の 主炭素源 と し て は 、 グ ル コ ー ス フ ラ ク ト ー ス 、 シ ュ 一 ク ロ ー ス な ど の 糖質が使用 さ れ る が、 こ れ ら 糖質 の 培地 中 の 量的割合 は 1 〜 2 0 % ( W/V ) 、 特 に 好 ま し く は 4 〜 8 % ( W/V) の 範囲 で 添加、 使用 さ れ る こ と が好 ま し い 。
    [0048] 培養温度 は、 微生物が生育 し う る 範囲、 即 ち 、
    [0049] 2 0 〜 4 5 て で 行な われ る が、 特 に 好 ま し く は
    [0050] 3 0 て 〜 4 0 て の 範囲 と す る 。
    [0051] 培養 の 際 の P Hは 3 〜 8 、 好 ま し く は 5 〜 7 の 範 囲 に 調節す る 。
    [0052] 培養時間 は 、 使用 す る 培地 の 種類及 び主炭素源 で あ る 糖質 の 濃度 に よ り 異な る が、 通常、 1 0 〜 2 4 時間程 ¾で あ る 。
    [0053] 該培養時間 に つ い て は、 本堯明 に お け る 培養.は 微生物 の 菌数 が最大 と な っ た時点で 培養 を 終了 さ せ る こ と が望 ま し く 、 そ れ以上培養 を 続 け る と 微 生物が減少 し 始 め る と と も に 製剤化 し た 時、 そ の 微生物 の 生残性 （ 生 き 残 る 率 ） が低下す る 原因 と な る β
    [0054] なお 、 培養 は、 液体培地 に 、 ラ ク ト パ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 を 直接接種す る 他 に 、 別 に培養 し た 種培養液を 接種 し て 行 な う こ と も で き る
    [0055] こ の よ う に し て 得 ら れ た 培養液 中 の 微生物 は、 常法 に 従 っ て 分離す る 。
    [0056] 即 ち 、 こ の よ う な 場合 に 当 該分野 に お い て 通常 使用 さ れ る 周 知 の 手段、 例え ば膜濾過、 遠心分離 な ど の 操作 に よ っ て 、 微生物 の 分離を 行 な う 。
    [0057] 例え ば、 得 ら れ た 微生物を舍む培養液を有機膜 を 用 い て 濾過 し 、 微生物 の濃度を 1 0 倍 に 濃縮 し た後、 洗浄液 を 微生物濃縮液 と 同量加え 、 1 / 2 量に な る ま で 有機膜を 用 い て 濾過洗浄す る 。 こ れ を 3 回 操 り 返す。
    [0058] こ こ で 、 洗浄液 は 、 コ ー ン ス テ ィ ー プ リ カ 一 ( 濃度 7 ° Bx ) に グ ル コ ー ス 2 % ( W/V ) 添加 し た液を 、 濃度 3 。 B Xに 希釈後、 苛性 ソ ー ダ で 中和 し、 生 じ た 沈殺を 除去す る こ と で調製す る 。
    [0059] そ し て 、 洗浄 を終え た 微生物濃縮液 に 保護剤を 加え た 後、 苛性 ソ ー ダ等 に よ っ て pHを 調整 し 、 真 空凍結乾燥機等 を 使用 し て 水分 4 %以下 に 乾燥 し 乳酸菌製剤 を 得 る 。
    [0060] こ こ で 、 使用 目 的 に 応 じ て 、 ス キ ム ミ ノレ ク 、 ラ ク ト ー ス 、 殺粉等を単独 ま た は混合 し た 増量剤 を 加 え る こ と に よ り 、 微生物濃度 を 調整 し て 乳酸菌 製剤を 製造す る こ と も で き る 。
    [0061] 該乳酸菌製剤 は、 粉状 の 他 に も 、 顆粒状、 ペ レ ッ ト 状、 タ ブ レ ツ ト 状 に す る こ と が で き る 。
    [0062] な お、 上記保護剤 の 成分 と 洗浄微生物濃縮液 に 対す る 添加量 の 一例を 、 下記 に 示す 。
    [0063] ス キ ム ミ ル ク 1 0 % ( W/V )
    [0064] グ ル タ ミ ン 酸 ソ ー ダ 1 % ( W/V )
    [0065] L — ァ ス コ ル ビ ン 酸 0. 5 % ( W/V )
    [0066] L シ ス テ ィ ン 0. 0 5 % ( W/V ) . 発明 を 実施す る だ め の最良 の 形態
    [0067] 〔 実施例 〕
    [0068] 以下、 本発 明 の 実施例 を 示す。
    [0069] 実施例 1
    [0070] コ ー ン ス テ ィ ー プ リ カ 一 （ 濃度 5 。 B X ) に ダ ル ' コ ー ス 6 % ( W/V ) , Tween80 0. 2 % ( W/V ) を 加 え 、 .0. 1 μ 111 除 ¾ フ ィ ル タ ー 〔 旭化成工業㈱製 Ρ
    [0071] S V 3 0 3 〕 で 濾過 し た も の を 、 培地 と し て 使用 し た。
    [0072] 3 0 0 £ タ ン ク 培養装置 〔 小松川 化工機㈱製 〕 に 、 上記培地 2 0 0 £ を 0. 1 m孔径 を 有す る 有 機膜 〔 旭化成工業㈱製 P S V 3 0 3 〕 を 着装 し た 除菌 フ ィ ル タ ー を用 い て 除菌 し な が ら 投入 し 、 1 2 N 苛性 ソ ー ダ で p Hを 5. 5 に調整 し た 。
    [0073] 次 に 、 温度を 3 7 'C に調整 し 、 予 め 上記 と 同様 な 培地 で 1 6 時間培養を 行な っ た ラ ク ト バチ ル ス • ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 菌株 の 種菌 （ 1 0 9 ケ ノ i ) 2 £ を 培地 に 接種 し 、 更 に 、 温度 3 7 'C 、 PH 5. 5 に 保 ち な が ら 1 6 時間撹拌培養 し た 。
    [0074] こ の 際、 PH の 調整 は、 自 動調節装置で 1 2 N 苛 性 ソ ー ダ を 添加す る こ と で行 っ た 。
    [0075] 培養終了時 の 培養液中 の 菌数 は、 3 X 1 0 9 ケ / "^ で あ っ た β
    [0076] 培養液 は、 0. 1 m孔柽を有す る 有機膜 〔 旭化 成工業㈱製 P S V 3 1 3 〕 を装着 し た 精密 フ ィ ノレ タ ー で 濾過 し 、 2 0 £ ま で 濃縮 し た 。
    [0077] 次い で、 該濃縮液 に 予 め 用意 し た 洗浄液 2 0 Si を 加え 、 同様 に し て 濾過 し 、 2 0 £ に な る ま で濃 縮 し た
    [0078] れ を 3 回 操 り 返 し た
    [0079] 洗浄液 は 、 .濃度 7 。 Bxの コ ー ン ス テ ィ 一プ リ 力 一 2 5 を 、 1 2 N 苛性 ソ ー ダ で 中和 し 、 沈殺を 沈降 さ せ た 後、 上澄液 2 0 £ を と り 、 こ れ に ダ ル コ ー ス 2 % を 添加 し、 6 0 £ に 希釈 し て 調製 し た 洗浄 を 終 え た 菌体濃縮液 2 0 に 、 ス キ ム ミ ル ク 2 kg , グ ル タ ミ ン酸 ソ ー ダ 2 0 0 g , L — ァ ス コ ル ビ ン 酸 1 0 0 g , L — シ ス テ ィ ン 1 0 g を 加 え て 溶解 し た 後、 4 N 苛性 ソ ー ダ で pH 7 に 調整 し た
    [0080] 該菌体液 を — 4 0 て で 凍結 し 、 R L E — 3 0 8 型真空凍結乾燥機 〔 共和真空技術睐製 〕 を 用 い 、 5 0 て で 6 0 分間 予備乾燥、 7 0 て で 1 5 0 分間 一次乾燥、 更 に 3 0 て で 1 4 時間二次乾燥 を 行 な つ た 。 乾燥物 の 水分は': 3. 5 % で あ り 、 生菌数 は 5
    [0081] X 1 0 1。 ケ ノ g で あ っ た 実施例 2
    [0082] コ ー ン ス テ ィ ー プ リ カ 一 （ 濃度 7 。 Bx ) に 、 グ ル コ ー ス 2 % ( W/V ) , Τ ween 80 0. 2 % ( /V ) を 加え 、 0. 1 m除菌 フ ィ ル タ ー 〔 旭化成工業铢製 P S V 3 0 3 〕 で除菌 し なが ら 、 乳酸菌連続培養 装置 〔 関西化学機械製作睐製 〕 の 培地供給タ ン ク に送 り 込ん だ 。
    [0083] 培.地供給 タ ン ク に 供辁 さ れ た 培地 は 、 リ ア ク タ —部へ 1 4 ^ Ζ Η で 送液 さ れ、 リ ア ク タ ー 系 を 循 環 さ せ る 。
    [0084] リ ア ク タ ー循環系 に、 予 め 培養 し た ラ ク ト バチ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 菌株 の種菌 5 ϋ を注入接種 し 、 1 2 N苛性 ソ ー ダ で p H 5. 5 に 調整 し 、 温度 を 3 7 て に 保持 し て培養を 開始 し た。
    [0085] リ ア ク タ ー系 に は、 0. l m の 孔径を有す る 有 機膜 （ 旭化成工業㈱製 P S V 3 1 3 〕 が装着 さ れ て お り 、 連続的 に 発酵培地が濾過 さ れ る と 同時に 新 し い 培地 が供給 さ れた 。
    [0086] 培養液 の 菌濃度を O D 6 6 Ο ηηιで 測定 し 、 そ の 1 0 0 倍希釈液が 1. 0 に 達 し た ら 菌体液を 7 5 0 ノ h で抜 き だ し た 。
    [0087] そ の 時 の 生菌数 は、 2 X 1 0 1 。 ケ Ζ ίώで あ っ た β 抜 き だ し た 菌体液 は 、 実施洌 1 に 準 じ て 洗浄 乾燥 を 行 な つ †c
    [0088] 乾燥物 の 水分 は 3. 7 % で あ り 、 生菌数 は 3 X
    [0089] 1 0 1 0 ケ ノ g で あ つ た
    [0090] 実施例 3
    [0091] 培養 を 実施例 2 に 準 じ て 行 い 、 菌体 の 洗浄を 高 速遠心分離機 を用 い て 行 な つ た 。
    [0092] す な わ ち 、 乳酸菌連続培養装置か ら 連続的 に 抜 き 出 し た 菌体.液 を 、 6 0 ひ O rpm , 1 O minで遠心 分離 し 、 上澄液 を 除 き 、 沈降菌体を 実施例 1 に 示 し た 洗浄液 を 用 い て懸濁 し 、 遠心分離前 の 量 に ま で 戻 し 、 再度遠心分難 し た 。
    [0093] の よ う な 洗浄を も う 一度操 り 返 し た 後、 実施 例 1 に 準 じ て 乾燥 を 行な つ /
    [0094] 乾燥物 の 水分 は、 3. 1 % で あ り 、 生菌数 は 4 X 1 0 1 0 ケ g で あ っ た 。
    [0095] ( 試験例 〕
    [0096] 次 に 、 本発 明 に 係 る ラ ク ト バ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ルス F —. 1 3 3 の 、 胃酸 に 対す る 抵抗試験 ( 試 験例 1 ) 、 胆汁酸 に 対す る 抵抗試験 （ 試験例 2 ) 、 病原菌 に 対す る 生育抑制試験 （ 試験例 3 ) に つ い て説明 す る 。
    [0097] な お、 何れ の 試験例 も 、 本発明株 と し て は、 ラ ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス （ Lactobaci l lus acidophi lus ) F — 1 3 3 〔 微工研条寄第 2 6 8 0 号 〕 を 用 い 、 対照株 1 〜対照株 6 と し て は、 下 記 に示す菌株 を そ れぞ れ用 い、 合計 7 種 の 乳酸菌 に つ い て 、 各 々 の 試験 を行な っ た 。
    [0098] • 対照株 1 ( ゥ シ 由来株 ）
    [0099] Lactobaci l lus amylovorus F — 8 1
    [0100] • 対照株 2 ( ブ タ 由来株 ）
    [0101] Lactobaci l lus amylovorus F 一 1 0 0
    [0102] - 対照株 3 ( ブ タ 由来株 ）
    [0103] Lactobaci l lus amylovorus I 一 8 0
    [0104] • 対照株 4 ( ニ ヮ ト リ 由来株 ）
    [0105] Lactobaci l lus crispapus F — 3
    [0106] ' 対照株 5 . ( 市販品 ）
    [0107] Baci l lus coagulans 対照株 6 ( 市販品 ）
    [0108] Lac toba c i l l us ac i d oph i l us M — 1 3
    [0109] 試験例 1
    [0110] 胃酸 に 対す る 抵抗試験 は、 PH I , pH 2 , ρΗ 3 の 各塩酸溶液 に 各供試菌株を各 々 別 に 添加 し 、 3 7 て の 恒温水槽中 で 作用 さ せ、 そ れぞ れ 0 時間 （ 添 加直後 ） ， 0. 5 時間， 1 時間， 3 時藺及び 5 時間 後 に 、 各塩酸溶液 中 の 生残乳酸菌数 を 測定す る こ と で 行 っ た 。
    [0111] H 1 , pH 2 , Ρ Η 3 の塩酸溶液 l rae中 に お け る 各 供試菌株 の生菌数 の 経時変化を 表 1 に 示す。
    [0112] な お、 試験例 1 は、 次 の 条件で 行 な っ た 。
    [0113] (a)前培養培地
    [0114] M R S 寒天培地 （ 0X0 I D )
    [0115] ()菌数測定用 培地
    [0116] M R S 寒天培地 （ 0X0 I D )
    [0117] (c)菌液 の 調製
    [0118] 各菌株を 前培養培地で 3 5 , 2 日 間嫌気培養 し た後、 菌体 を 滅菌生理食塩水 に 浮遊 さ せ て 菌液 と し た 。 ' ..'
    [0119] (d)試験液
    [0120] .pH 1 , ρΗ 2 , pH 3 の 各塩酸溶液 を 、 そ れぞれォ — ト ク レ ー ブ で 1 2 1 て ， 1 5 分間殺菌処理後冷 却 し て 供試 し た 。
    [0121] (e)作用
    [0122] 1 当 り の 生菌数 力、' 1 0 5〜 1 0 6 と な る よ う に 、 Ι Ο Ο δώ に 対 し て 1 の割合で 試験液 に菌液を 添加 し 、 3 7 て の 恒温水槽中で そ れぞ れ 0 時間 （ 添加直後 ） ， 0. 5 時間， 1 時間， 3 時間及び 5 時 間作用 さ せ た 。
    [0123] (f )培養
    [0124] 各作用 後 に 試験液 中で 生残す る 供試菌株数を 、 測定用 培地 を 使用 し た重層 平板培養法 （ 3 5 , 2 日 間好気培養 ） に よ り 測定 し た 。
    [0125] ( 以 下 余 白 ）
    [0126]
    [0127] 試験例 2
    [0128] 胆汁酸 に 対す る 抵抗試験 は、 平板培地 の P Hが 5 6 及び 7 の 場合につ い て 、 胆汁末 の最小発育阻止 濃度を そ れぞ れ測定す る こ と で 行 っ た。
    [0129] す な わ ち 、 任意段階濃度に な る よ う に 胆汁末 を 添加 し た 各平板培地 （ M R S 寒天培地 ） に 、 供試 菌株 （ 乳酸菌 ） を 塗抹培養後、 発育が胆止 さ れ る ゥ シ胆汁末 の 最低濃度を も っ て 供試菌 に 対す る 胆 汁末の 最小発育阻止濃度 と し た 。 そ の 結果を表 2 に 示す。
    [0130] な お 、 試験例 2 は 、 次 の 条件で 行 な っ た 。
    [0131] (a)增菌用 培地
    [0132] M R S ブ イ ヨ ン （ 0X0ID )
    [0133] (b)感受性測定用 培地
    [0134] M R S 寒天培地 （ 0X0ID )
    [0135] (c)胆汁末
    [0136] ゥ シ 胆 汁末 〔 和光純薬工業㈱製 〕
    [0137] (d)感受製測定用 平板培地 の 作製
    [0138] 滅菌精製水 で 胆汁末 の 20000ppm懸濁液を調製 し さ ら に 、 2 倍希积 を 行い 、 10000 , 5000 , 2500 , 1250 , 625 , 313 , 156 , 78 及び 39ppm 懸濁液を 調製 し た 。
    [0139] 次 に 、 加熱溶解 し た 感受性測定用 培地 に 上記 の 各供試品希釈段階懸濁液を 培地 の 1 Z 量加 え、 さ ら に P H 5 , pH 6 及び pH 7 に 調整 し 、 充分 に混合 後 シ ャ ー レ に 分注 ， 固化 さ せて 、 感受性測定用 平 板培地 と し た 。
    [0140] 以上 の よ う に 、 pH 5 , P H 6 及び pH 7 の 三種類 の 感受性測定用 平板系列 を 作製 し た 。
    [0141] (e)接種用 菌液 の 調製
    [0142] 増菌用 培地 で 継代培養 し た 試験菌株を 、 接種， 培養後， 菌数が 1 0 6 ケ ノ に な る よ う に 同 培地 で 希釈 し て 供試 し た
    [0143] (f )培養
    [0144] 感受性測定用 平板培地 （ P H 5 , pH 6 及 び pH 7 の 各 々 の 系列 ） に 接種用 菌液 を ニ ク ロ ム 線 （ 内径約 1 mm ) で 2 cm程度面':線塗抹 し 、 3 5 で で 1 8 〜 2 0 時間嫌気培養 し た 。 2k
    [0145] ^判定
    [0146] 所定 の 時間培養後、 発育が阻止 さ れ た 最低濃度 を も っ て 供試菌株 に 対す る 胆汁末 の 最小発育阻止 濃度 と し た 。
    [0147] ( 以 下 余 白 ）
    [0148] 2 s诏 row raw ίi
    [0149] メ 3.■=-
    [0150] •一」 m b.， >c 平 板 培 地 の P H
    [0151] 供試菌株
    [0152] pH 5 pH 6 pH 7 本発明株 2， 000ρρηι以上 2， 000ppm以上 2， 000ppm以
    [0153] 1 2 , 000ppm以上 2 , OOOppm以上 2， 000ppm以 2 2 , 0G0ppm以上 2 , OOOppm以上 2 , O OO ppm 3 2 , 000ppm以上 2， O OOppm以上 2， 000ppm以 .4 2 , 000 ppm以上 2 , 000ppm以上 2 , OOO ppm以 5 125 p p ra 2 , 000ppm以上 2 , OOOppm 6 2， 000ppm以上 2， 000ppm以上 2， OOOppm以
    [0154] 病原菌 に 対す る 生育抑制試験 は、 腸内 の 病原菌 と し て大腸菌、 サ ル モ ネ ラ 、 緑膿菌を 選択 し、 各 々 の供試菌株 （ い ずれ も 乳酸菌 ） に よ る 病原菌 に 対す る 生育抑制効果を測定す る こ と で行 な っ た 。
    [0155] す な わ ち 、 病原菌 （ 大腸菌、 サ ル モ ネ ラ 、 緑膿 菌 ） の 各菌株 と 供試菌株 （ 乳酸菌 ） と を 単独 に ま た は組み合わせ て 液体培地 に添加 し て 振 と う 培養 し 、 そ れぞ れ 0 時間 （ 理論添加菌数 ） の 他 に、 3 時間， 6 時間， 9 時間及 び 2 4 時間後 に つ い て 、 液体培地 1 中 に お け る 各生菌数 と 、 各 々 の 液体 培地 の P Hと を 測定 し た 。
    [0156] 供試菌株 と し て 本発明 株、 対照株 1 〜 6 を 用 い た 場合 の 結果を 、 表 3 — 1 、 表 3 — 2 〜表 3 — 7 に 、 そ れぞ れ示す。
    [0157] な お、 試験例 3 は 、 次 の 条件で行 な っ た 。
    [0158] (a)試験病原菌
    [0159] Escherichia col i IFO 3301 ( 大腸菌 ）
    [0160] .Salmonel la t y p h i in u r i u in 実験室保存株 ( サ
    [0161] ル モ ネ ラ ） Pseud omonas a e ί u g i n o s a I I D P - 1 ( 緑膽菌 ） (b)前培養培地
    [0162] 試験病原菌 ： 普通寒天斜面培地
    [0163] 供試菌株（ 乳酸菌 ） ： M R S 培地
    [0164] (c)接種用 菌液 の 調製
    [0165] 試験病原菌 は、 3 5 で一夜培養 し た 後 の 前培 養培地 を 、 生菌数が 1 当 り 1 0 3〜 1 0 5 と な る よ う に 、 M R S 培地 に浮遊 し て菌液 と し た 。
    [0166] 乳酸菌 は 、 3 5 'C 一夜培養 し た 後 の 前培養培 地を 、 生菌数が 1 ^ 当 り 1 0 3〜 1 0 5 と な る よ う に 、 同培地 を 用 い て希釈 し た ^
    [0167] (d)試験用 培地
    [0168] M R S 培地 を 、 水酸化 ナ ト リ ウ ム 溶液 を 使用 し て 、 p H 7. 0 に 調整 し て 供試 し た 。
    [0169] (e)菌数測定用 培地
    [0170] 大腸菌， サ ル モ ネ ラ ： D H L奪天培地
    [0171] 緑膿菌 ： 1 / 2 セ ト リ マ イ ド培地
    [0172] 乳酸菌 ： l ppm硫酸 コ .リ ス チ ン 添加 M R S 寒天 培地
    [0173] (f)培養 試験用 培地 1 当 り の 菌数が各菌株 と も Γ 0 〜 1 0 3 と な る よ う に 、 試験用培地 1 0 に対 し て、 1 sz2 の 割合で 接種用菌液を 添加 し て 充分 に 混 合後、 そ れぞれ 0 時間 （ 理論添加菌数 ） ， 3 時間， 6 時間， 9 時間及び 2 4 時間， 3 7 て の 恒温水槽 中 で 振 と う 培養を 行 な っ た 。
    [0174] 試験 は、 試験病原菌 と 供試菌株 （ 乳酸菌 ） と を 同一の 試験用 培地 に 接種 し た も の 及び試験病原菌 と 供試菌株 と を各 々 単独 で試験用 培地 に 接種 し た も の に つ い て 実施 し た 。
    [0175] 生菌数 の 測定
    [0176] 上記 の よ う に 培養を 行 な っ た 試験用 培地中 の 生 菌数を 、 各 々 菌数測定用 培地 を 使用 し て 測定 し た 。
    [0177] な お、 乳酸菌数測定 の た め の 培養 は重層 平板培 養法 （ 3 5 て ， 2 日 間培養 ） で 、 一方試験病原菌 ( 大腸菌， サ ル モ ネ ラ ， 緑膿菌 ） 数測定 の た め の 培養 は混釈平板培養法 （ 3 5 'C , 2 日 間培養 ） で 、 そ れぞ れ行 な っ た 。 衷 3 — 1 振 と う 時 間 （hr)
    [0178] 添加菌 測定菌
    [0179] 0(理 ½添加菌数） 3 6 g 24 本発明株 本発明株 75 6. 8 X103 4. 5 X104 4. 8 X 10*
    [0180] (6.5) (6.4) (5.9) (6 4) (3.9) 大腸菌 大腸菌 1.5 X104 Z 2 XIO4 2. 3 X10*
    [0181] (6.5) (6,4) (R A) (A ft) u . q x 1 1 n u¾ 2.0 X 10* 2. I X 10s 0 大腸菌 (6,5) (6,5) (6 3) (6 4) (3 1)
    [0182] +
    [0183] 本発明株 本発明株 75 8. 1 X103 2. 4 X 10" 1. 8 X10'
    [0184] (6.5) (6.5) (6.3) (6 4) (3 1) サルモ サルモ 1. 5 10* 3. 4 10* 2. 3 X104 3, 9 X105 3, 1 X 10· ネ ラ ±ラ (6.5) (6.5) サルモ サクレモ' 1. 5 X10* 3. 2 X10* 1.4 XIO4 2: 9 10s 0 ネ ラ ネラ (6.5) (6.5) (6.3) (6.4) (3.1)
    [0185] +
    [0186] 本発明株 本発明株 75 3. 8 X 10* 7. 6 X103 3. 2 X 104 8. 6 10·
    [0187] (6.5) (6.6) (6.0) (6.2) (3.1) 綠膿菌 綠膿菌 72 1. 8 X 10* 1. 6 X10 4. 8 X102 6. 4 X 10*
    [0188] (6.5) (6.9) (6.3) (6.4) (6.4) 綠膿菌 72 1. 6 X 10* 2. 5 X10¾ 6. 4 X10¾ 0 綠膿菌 (6.5) (6.5) (6.4) (6.3) (3.3) 十
    [0189] 本発明株 本発明株 75 4. 0 X10* 7. 9 X103 5. 6 X 104 1. 1 X 10s
    [0190] (6.5) (6.5) (6.3) (6.3) (3.3)
    [0191] 表 3 — 2 振 と う 時 間 (hr)
    [0192] 添加菌 測定菌
    [0193] 0(理^添加菌数） 3 6 9 24 対 i株 1 対照株 1 6. 8 X101 1. 6 XIO3 1.7 XIO4 7. 2 XIO 6. 9 XIO7
    [0194] (6.7) (6.7) (6.7) (6.5) (5.2) 大腸菌 大腸菌 58 87 1.3 XIO4 2. 0 X10s 2. 0 XIO*
    [0195] (6.7) (6.7) (6.7) (6.6) (5.5) 大腸菌 58 95 4.2 XIO3 1. 3 X10a 9. 2 XIO4 大腸菌 (6.7) (6.6) (6.7) (6.7) (4.7) +
    [0196] 対照株 1 対照株 1 6. 8 X 102 1. 3 X101 8. 0 XIO4 4. 6 XIO4 4. 3 X 10'
    [0197] (6.7) (6.6) (6.7) (6.7) (4.7) サルモ サルモ 5. 1 X10Z 1. 1 XIO3 6. 7 10' 1. 8 XIO6 4. 1 X10， ネラ ネラ (6.7) (6.7) (6.7) (6.7) (5.4) サルモ サルモ 5. 1 X10Z 1. 1 XIO1 3. 3 IO^ 8. 8 XIO5 4. 5 107 ネラ ネラ (6.7) (6.7) (6.6) (6.7) (4.7)
    [0198] +
    [0199] 対照株 1 対照株 1 6. 8 X 10* 1. 3 XIO3 1. 4 XIO^ 4. 3 XIO4 1. 0 XIO9
    [0200] (6.7) (6.7) (6.6) (6.7) (4.7) 綠鼸菌 綠膿菌 1. 2 X10X 1. 8 X 10l 2. 4 XIO2 3. 0 102 1. 2 XIO"
    [0201] (6.7) (6.7) (6.7) (6.6) (7.0) 綠膿菌 1. 2 X 102 72 1. 2 X10z 2. 1 XIO2 1. 5 X 104
    [0202] (6.7) (6.7) (6.7) (6.7) (4.9) 十
    [0203] 対照株 1 対照株 1 6. 8 10z 1. 4 X 103 1. 1 XIO4 4. 5 XIO4 1. 8 XIO'
    [0204] (6.7) (6.7) (6.7) (6.7) (4.9)
    [0205] ( ) 内の数字は培地の Η ·
    [0206] 表 3 — 3
    [0207]
    [0208] ( ) 内の数字は培地の PH
    [0209] 表 3 — 4 振 と う 時 間 （hr)
    [0210] 添加菌 測定菌
    [0211] 0(理 ίί¾添加菌数） 3 6 g 24 対照株 3 対照祙 3 40 1.6 XIO* 3. 5 XIO3 4.7 X 104 1.0 X 10*
    [0212] (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (5.1) 大臈菌 大腸菌 34 66 2.2 XIO3 1.0 X 103 6. 4 10*
    [0213] (6.8) (6.8) (6.7) (6.8) (5.7) 大 Ϊ 菌 52 7.0 X 10* 9.6 10* 大腸菌 ： ！ (6.8) . (6.8) (4.8) +
    [0214] 対照株 3 対照株 3 1.6 XIO* 3.0 X 103 5.0 X 104 1.2 XIO"
    [0215] (6.8) (6.8) (6.8) (4.8) サ レモ サ レモ 1.8 XIO2 1.6 X10z 1.3 XIO3 6.0 X 10s 2, 4 X 10* ネ ラ ネ ラ (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (5.6) サルモ サ レモ 1.8 XIO* 1.2 i X o IO* 1.5 XIO' 2.8 X 10s 3 ネ ラ ネ ラ (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (4.8) 対照株 3 対照株 3 1.6 XIO2 [： 3.0 XIO3 7.0 IO4 4.8 X 10，
    [0216] (6.8) (6.8) (6.8) (4.8)
    [0217] ！！
    [0218] 綠膿菌 綠腱菌 1.4 ； XIO* 1.8 XIO2 7, 2 XIO6
    [0219] (6.8) (6.8) (6.8)
    [0220] ！：
    [0221] 綠膿菌 90 86 1.0 10z 5 綠躔菌 (6.8) (6.8) (6.7) (4.9) +
    [0222] 一対照株 3 対照株 3 40 I.5 XIO* 7.6 XIO4 2.4 X 10»
    [0223] (6.8) (6.8) (6.8) (5.4)
    [0224] ( ) 内の数字は培地の PH
    [0225] 表 3 — 5 振 と う 時 閗 (hr)
    [0226] 添加菌 測定菌
    [0227] 0(¾½添加菌数） 3 6 9 24 対照株 4 対照株 4 57 2. 1 X10* 1.5 X10S 1. 2 XIO^ 9. 0 X10"
    [0228] (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (4.7) 大腸菌 大腸菌 16 1 8. 3 X10Z 2. 8 X104 1. 1 10*
    [0229] (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (5.6) 大蘭 16 18 7. 4 X 10* 8. 4 103 1..4 X 10* 大臈菌 (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (5.1) +
    [0230] 対照株 4 対照株 4 57 2. 0 X 102 1.3 X10s 1. 0 X104 6. 2 X10"
    [0231] (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (5.1) サルモ サルモ 91 29 1.6 X103 6. 3 X103 1. 2 X10* ネラ ネラ (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (5.8) サルモ サルモ 91 8 6. 3 X102 2. 4 X104 1. 2 X10» ネラ ネラ (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (4.9) 十
    [0232] 対照株 4 対照株 4 57 2. 9 X10* 1. 2 103 1. 4 XIO4 8. 2 X 10"
    [0233] (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (4.9) 綠膿菌 玆膿菌 88 35 33 44 1.7 XIO'
    [0234] (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (6.9) 綠騮菌 88 21 29 31 0 綠膿菌 (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (4.7) 十
    [0235] 対照株 4 対照株 4 57 2. 0 X 10z 2. 4 X103 1. 1 X104 3.4 X10'
    [0236] (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (4.7)
    [0237] ( ) 内の数字は培地の pH
    [0238] 表 3 — 6 振 と う 時 間 (hr)
    [0239] 添加菌 測定菌
    [0240] 0(理¾添加菌数） 3 6 9 24 対照株 5 対照株 5 1. 2 X 103 7 7. 8 XIO3 4. 1 X 10Z 9. 0 XIO*
    [0241] (6.8) (6.1) (6,7) (6.4) (4.6) 大腸菌 大腸菌 3. 2 X 10Z 3.2 XIO* 2.7 XIO4 2.7 X 10S 4.9 XIO'
    [0242] (6.8) (6.2) (6.1) (6.7) (5.2) 大腸菌 3. 2 X 10Z 4. 0 XIO* 4. 2 IO^ 8. 2 X 104 3. 6 XIO" 大腸菌 (6.8) (6.8) (6.8) (6.8) (4.9) 十
    [0243] 対照株 5 対照株 5 1. 2 X 10S 10 72 3. 8 XIO4 2. 5 XIO4
    [0244] (6.8) (6.1) (6.3) (6.5) (4.9) サルモ サルモ 1. 2 X 10A 5. 2 X 10S 1. 8 10S 2. 8 10* 4. 5 XIO' ネラ ネラ (6.8) (6.6) (6.6) (6.3) (5.2) サ レモ サルモ 1. 2 ΧΙΟ' 4. 4 XIO3 6. 6 XIO4 1. 4 XIO6 9. 2 XIO7 ネラ ネラ (6.8) (6.5) (6.7) (6.4) (5.0)
    [0245] +
    [0246] 対照株 5 対照株 5 1. 2 X 103 17 3. 3 103 3. 5 X 10 1. 9 X 10*
    [0247] (6.8) (6.5) (6.7) (6.4) (5.0) 綠躔菌 綠臈菌 46 1. 1 X 10* 1. 2 X 10Z 1.3 XIO2 6. 5 XIO*
    [0248] (6.8) (6.5) (6.6) (6.2) (6.6) 綠騮菌 46 93 1. 0 XIO2 1. 1 IO* 1. 8 XIO3 綠矚菌 (6.8) (6.2) (6.5) (6.2) (4.5) 十
    [0249] 対照株 5 対照株 5 1. 2 XIO3 13 6. 9 X 103 3. 7 X 10* 1. 8 XIO'
    [0250] (6.8) (6.2) (6.5) (6.2) (4.5)
    [0251] ( ) 内の数字は培地の PH
    [0252] 表 3 — 7
    [0253]
    [0254] ) 内の数字は培地の pll
    [0255] · . 試験結果 の 考察
    [0256] 表 1 よ り 、 本発 明 に 係 る ラ ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 は、 対照株 の い ずれ の 乳酸 菌 よ り も 胃酸 に 対す る 耐性が極 め て 強 い こ と が確 認 さ れ た 。
    [0257] ま た 、 表 2 よ り 、 本発明 に 係 る ラ ク ト ノ チ ル ス - ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 は、 対照株 の 乳酸菌 と 同等以上 に 、 胆汁酸に対 し て も 抵抗性が非常 に 高 い こ と が確認 さ れ た。
    [0258] さ ら に 、 表 3 — 1 〜表 3 — 7 よ り 、 本発 明 に 係 る ラ ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 は 、 前記病原菌 に 対 し て 、 対照株 の い ず れ の 菌 と 比較 し て も 著 し い 生育抑制効果が あ り 、 病原菌 に 対す る 抵抗性が強 い こ と が確認 さ れ た 。
    [0259] 〔 使用 例 〕
    [0260] 本発 明 に 係 る 蓖株を 、 ：.幼動.物 に給飼す る 代用 乳 へ添加す る 場合 に つ い て 説明 す る 。
    [0261] 例え ば仔牛 の 場合、 牛乳を 採取す る た め 、 早 い 時期 に母乳か ら 代用 乳 に 切 り 替え ら れ る し か し.、 一般 に 幼動物 の 腸内菌叢 は 外界や飼料 な ど の 変化 に 極 め て影響 を 受 け易 、 有用 菌が容 易 に 減少 し て 大腸菌 な ど の 有害菌が速や か に 増殖 し 易 い た め 、 幼動物 は下痢を起 こ し て 死亡す る 例 が多 い
    [0262] 現在 は 、 こ の よ う な 事態 を 防 ぐ た め 、 代用 乳 に 抗生物質 を 添加 し て い る が、 こ の 場合、 抗生物質 の 残留 に よ る 害-が 題 と な り 、 そ の た め 抗生物質 に 代わ る 予 防策が必要 と さ れて い る 。
    [0263] そ こ で 、 生後 5 日 百 の 仔牛 1 5 頭 を 3 群 に 分 け、 A 群 は無添加代用乳、 B 群 は本発明 に 係 る 乳酸菌 製剤添加 の 代用 乳 （ 1 0 9ケ ノ代用 乳 · 2 7 0 g ) 、 C 群 は抗生物質 （ バ ー ジ ニ ア マ イ シ ン 1 0 0 p p m舍有 ） を 添加 し た 代用 乳 を 、 そ れぞ れ 9 % の 濃度 と な る よ う に 温水 に 溶解 し 、 1 日 3 £ 給飼 し た と こ ろ 、 A群 に 比較 し て 、 B 群， C 群 は治癒 の 回数が少 な く 、 又、 体重増加が大 き い な ど、 明 か に 有意 な 差 が認 め ら れ、 本発明 係 る 乳酸菌製剤 の 投与が、 抗生物質 の 投与 と 同程度 の 効果があ る こ と が確認 さ れ 6 . 産業上 の 利用 分野
    [0264] 本発明 に 係 る ラ ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ルス F — 1 3 3 .は 胃酸や胆汁 に対 し て 抵抗性が強 い の で 、 生 き た 菌 の ま ま 胃 を通 じ て 腸 に ま で 到達す る こ と がで き 、 十分 な生存安定性があ る 。
    [0265] ま た 、 本発 明 に係 る ラ ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 は、 病原菌 に 対す る 抵抗性が強 く 、 病原菌 の 生育を抑制す る こ と がで き る 。
    [0266] 鎵 ラ ク ト ノ、 ' チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 を用 い た 乳酸菌製剤を人や動物 に経 口摂取 さ せ る こ と に よ り 、 腸内 の 有害菌を抑制 し 、 ま た 、 ラ ク ト ノ チ ル ス * ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 を 舍む有 用 菌を 增加 さ せ る こ と がで き る 。
    [0267] 従 っ て 、 ラ ク ト ノ チ ル ス ' ァ シ ド フ ィ ル ス F — 1 3 3 を用 い た 乳酸菌製剤 は、 生菌剤 に 求 め ら れ る 諸条件 に適合 し 、 下窬な ど の 病気 の 予防ま た は そ の治療効果が期待で き 、 発育促進や健康維持 に 役立つ も の で あ る 。
    权利要求:
    Claims
    1510 PCT/JP91/00108
    39 請 求 の 範 囲 ク ト ノ チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス
    、 Lac tobaci l lus acidophi lus ) F 3 3 〔 微ェ 研条寄第 2 6 8 0 号 〕 ラ ク ト ノ チ ノレ ス · ァ シ ド フ ィ ル ス
    ( Lactobaci l lus acidophi lus ) F - 1 3 3 〔 微ェ 研条寄第 2 6 8 0 号 〕 を 用 い た 乳酸菌製剤。 ラ ク ト ノ ' チ ル ス · ァ シ ド フ ィ ル ス
    ( Lactobaci l lus acidophi lus ) F - 1 3 3 〔 微ェ 研条寄第 2 6 8 0 号 〕 を 、 発酵性糖類 を 主炭素源 と し た 培地 に 接種 し て 、 通性嫌気性菌 に 適 し た 培 養条件で 培養 し て 増殖 さ せ た 後、 菌体 を 分離 し 、 乳 酸菌製剤 と す る 、 乳酸菌製剤 の 製造方法。
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    同族专利:
    公开号 | 公开日
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    JP3052208B2|2000-06-12|
    EP0465677A1|1992-01-15|
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    DE69122186D1|1996-10-24|
    EP0465677A4|1993-02-17|
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    DE69122186T2|1997-03-27|
    EP0465677B1|1996-09-18|
    引用文献:
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    JPS459209B1|1967-04-25|1970-04-03|||
    JPS49109562A|1973-03-01|1974-10-18|||
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    US4946791A|1986-10-02|1990-08-07|Bio Techniques Laboratories, Inc.|Novel strain of Lactobacillus acidophilus|RU2146454C1|1999-05-18|2000-03-20|Анисимова Таисия Ивановна|Штамм бактерий lactobacillus acidophilus n.v.ep 317/402 "наринэ" ааа, используемый при приготовлении препаратов, диетических и лечебно-профилактических продуктов для лечения дисбактериоза и его последствий|
    法律状态:
    1991-08-08| AL| Designated countries for regional patents|Kind code of ref document: A1 Designated state(s): AT BE BF BJ CF CG CH CM DE DK ES FR GA GB GR IT LU ML MR NL SE SN TD TG |
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    优先权:
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    JP2/19100||1990-01-31||DE69122186T| DE69122186T2|1990-01-31|1991-01-30|Laktobazillus acidophilus-f-133, herstellung von davon ausgehenden milchsäurebakterien und verfahren zu deren herstellung|
    JP3503456A| JP3052208B2|1990-01-31|1991-01-30|ラクトバチルス・アシドフィルスｆ―１３３、それを用いた乳酸菌製剤及びその製造方法|
    EP91903624A| EP0465677B1|1990-01-31|1991-01-30|Lactobacillus acidophilus f-133, lactic acid bacterium preparation prepared therefrom, and process for preparing the same|
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