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    公开号:WO1990012805A1
    申请号:PCT/JP1990/000491
    申请日:1990-04-13
    公开日:1990-11-01
    发明作者:Tomio Takeuchi；Takaaki Aoyagi；Masa Hamada；Hiroshi Naganawa；Yasuhiko Muraoka；Keiji Ogawa；Machiko Nagai；Makoto Tsuda
    申请人:Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai；
    IPC主号:C07C229-00
    专利说明:
    [0001] 明 細 書 ポス 卜 ス タ チン お よ びそ の類縁化合物 も し く はそ れ ら の塩 技術分野
    [0002] 本発明 は ポス 卜 ス タ チン お よびそ の類縁化合物も し く はそ れ ら の塩 に 関 する 。 更 に詳細 に は 、 本発明 はェ ン.ド ぺプチダーゼ （ 特に セ リ ン酵素ま た は S H 酵素に分類さ れる酵素 ） に対 し 阻害活性を有す るポス ト ス タ チンお よ びそ の類縁化合物も し く はそれ ら の塩 、 それら の製造法 お よ びそ れ ら を有効成分 と す る薬剤 に関す る 。 背景技術
    [0003] 神経伝達物質 と さ れて いるサブス タ ン ス P 、 甲 状腺刺 激ホルモ ン放出 ホルモ ン 、 ノ イ ロ テ ン シ ンあ る い は記億 と 関係が あ る とさ れて いるパソ プ レ シ ン に対 して 作 し て それ ら を不活化する酵素 と し て 、 エ ン ドぺプチダー ゼ の Ί つで あるプ ロ リ ルエ ン ド ぺプチダー ゼがあ る 。 プ ロ リ ルエ ン ド ぺプチダ ー ゼ に対す る阻害作用 をもつ物質 は 種々 の生理活性を示す と 考え ら れて い る 。 プ ロ リ ルェ ン ド ぺ プ チダ ーゼ阻害剤 は 、 特 に バソ プ レ シ ン の不活化を 阻害す る こ と か ら 、 抗健忘症薬 と し て期待さ れて お り 、 例 えば、 「 日本農芸化学会誌 」 —旦， 1 1 4 7 - 1 5 4 ( Ί 9 8 4 ) 、 特開昭 6 0 — Ί 7 2 9 2 9 号公報 、 特開昭 6 0 — 1 8 8 3 1 7 号公報 に はプ ロ リ ルエ ン ドぺ プ チダーゼ 阻害剤 が抗健忘症作用 を示す こ と が報告さ れ て いる 。 従 っ て 、 抗健忘症薬 と して 使用できる よ り 優れ たプ ロ リ ルエ ン ド ぺプチダー ゼ阻害剤 が望ま れて いる 。
    [0004] ま た 、 Aoyag iら は 、 全身性エ リ テマ 卜 一 デス （ S L E ) の モデル動物である S L E 腎症を ¾す る N Z B Z W F 1 マ ウ スの脾朦内酵素活性を調 べた結果、 プ ロ リ ルエ ン ド ぺプチダ ーゼ が病状の進行に と もない増加す る こ と を報 告 し て いる [ Journal of Appl ied Biochemistry 、 7 , 2 7 3 — 2 8 Ί ( Ί 9 8 5 ) ] 。 従 っ て 、 プ ロ リ ル ェ ン ド ぺプチダーゼ阻害剤 は全身性エ リ テマ 卜一デスの治療 へ の応用 が期待さ れる 。
    [0005] 一方、 エ ン ドぺプチダーゼ を阻害す る低分子のぺプチ ド と し て は 、 ロ イ ぺプチ ン 、 エ ラ ス タ チ ナ ールな ど の天 然物 ペプチ ド アルデ ヒ ド が知 ら れて お り 、 さ ら に こ れ ら を参考 に し て 、 多数のペ プチ ド アルデ ヒ ド が エ ン ド ぺプ チダーゼ阻害剤 と し て 合成さ れて いる 。 こ れ ら の ぺプチ ド アルデ ヒ ド は酵素 と結合 し 、 ペプ チ ド アルデ ヒ ド のァ ルデ ヒ ド基が 、 酵素上のペプチ ド カ ルポニル基 と の反応 部位を 占 め る こ と に よ り 阻害活性を表 す こ と が
    [0006] Thompson, R. C. に よ り 指摘さ れて い る [ Biochemistry, 1 2 巻 ， 4 7 — 5 1 頁 （ Ί 9 7 3 ) 〗 。
    [0007] ま た 、 Horiら は C 一末端 に （ R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才 キソ ー ペ ン タ ン酸ェ チルま た はべ ン ジルエステルを 持つ ペプチ ドを Dak i n-West反応に よ り 合成 し て 、 エ ン ド ぺプチダ ー ゼ の Ί つ で あ る エラ ス タ ーゼ を 阻害する こ と を報告 し て いる [ Peptides, Structure and Function. Proceed i ngs of the N i nth American Pept ide
    [0008] Symposium, pp8 Ί 9 — 8 2 2 ( Ί 9 8 5 ) ] 。
    [0009] 発明の 開示
    [0010] 本発明者 ら は 、 エ ン ド ぺプチダーゼ に対 し 阴害作甩を 有す る物質の探索を続け 、 ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス ♦ ピ リ ド ク ロ モゲネ ス （ St reptomyces v i ridochromogen e_s ) hi 5 3 4 - 3 0 F 3 株が上記酵素を強 く 蹈害す る物質を生産 す る こ と を見出 し た 。 その阻害物質を単離 ♦ 精製す る こ と に成功 し 、 ポス ト ス タ チン （ Poststat i n ) と命名 し た c ボス 卜 ス タ チ ン はそ の ペプチ ド鎖中 に ケ 卜 ン基を持ちそ の両側 に ア ミ ノ 酸残基を持つ新規な構造を有 し て いる 。 本発明者 ら はポス 卜 ス タ チ ン の構造に着 目 し 、 更 にそ の 各種の類緣化合物 を合成 しそ れ ら も周様 に エ ン ド ぺプチ ダ 一 ゼ 阻害作用 を有す る こ と を見出 し本発明 を完成 し た ， 従 っ て 、 第一の本発明 は 、 下記式 [ ェ ]
    [0011] C 0 — C 〇 一 Y [ ェ ]
    [0012] R 1
    [0013] ( 式中 、 X は官能基が保護さ れて いて も よ い ペプチ ド残 基ま た は ア ミ ノ ¾が保護 さ れて いて も よ い ア ミ ノ 酸残基 を示 し 、 R は飽和 ま た は不飽和 の炭化水素基を示 し 、 そ し て の結合す る炭素原子上に お け る置換基の立体 配置は S 又 は R S を示 し 、 Y は官能基が保護さ れて いて も よ いペプ チ ド残基ま た は 力 ルポ キシル基が保護さ れて いて も よ い ア ミ ノ 酸残基を示す ）
    [0014] で示さ れるボス 卜 スタ チンお よびそ の類縁化合物も し く はそれ ら の塩. -で■ ある 。
    [0015] 第二の本発明 は、 下記式
    [0016] H〇〇 C Nー 工 0
    [0017]
    [0018] — o ϋ 一〇
    [0019] ェ
    [0020] 〉〇- -〇 2：
    [0021] -r で示さ れる ポス ト ス タ ン ま た はそ のエステルも し く はそ れ ら の ァ ミ ノ 基が保護さ れた化合物 お よびそれ ら の塩で あ る 。
    [0022] 第三 の本発明 は 、 下記部分構造式
    [0023] - N H C H C H C O -
    [0024] R ·! 0 H
    [0025] (式中 R ·! は飽和 ま た は不飽和の炭化水素基を示す ） を 有す る 3 — ア ミ ノ ー 2— ヒ ド ロ キ シ脂肪酸の誘導体を酸 化 し 、 下記部分構造式
    [0026] 一 N H G H - C O - C O -
    [0027] R 1
    [0028] ( 式中 R は前記 と周 じ ）
    [0029] を有す る 3 — ァ ミ ノ — 2 — 才キ ソ 脂肪酸の誘導休を得 、 必要 に応 じ保護基の除去及び ま た は塩の形成を行う こ と を特徴と す る式 [ I ] で示さ れるポス ト ス タ チンお よ びそ の類縁化合物 も し く はそ れ ら の塩の製造法であ る 。
    [0030] 第四の本発明 は 、 ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス属 に 属す る ポス ト ス タ チン生産菌を培養 し 、 そ の培養物か ら ポス 卜 ス タ チ ンを採取す る こ と を特徴 と す る ポス ト ス タ チ ン の製造法 で あ る 。
    [0031] 第五の本発明 は 、 式 [ I ] で示さ れるポス ト ス タ チン ま た はそ の類縁化合物 ま た はそ れ ら の塩を有効成分 と す る エ ン ドべプチダーゼ 阻害剤であ る 図面の簡単な説明
    [0032] 第 Ί 図 は ポス ト ス タ チ ンの臭化 カ リ ウ ム錠内での赤外 線吸収ス ペ ク ト ルを示す 。 第 2 図 はボス 卜 ス タ チンの重 ジメ チルスルホキシ ド中で測定 し た 4 0 0 HH Z 水素核核 磁気共鳴スペ ク ト ルを示す 。 第 3 図 はポス 卜 ス タ チンの 重ジ メ チルスルホキ シ ド中で測定 し た Ί 0 0 HH Z 炭素核 核磁気共鳴スぺ ク 卜 ルを示す 。 発明を実施す るた め の最良の形態
    [0033] 式 [ ί ] の X ま た は Υ に お け る ア ミ ノ 酸残基も し く は ペプチ ド残基の構成ア ミ ノ 酸残基の Ί つ と し て は 、 一般 的に は ひ 一 ア ミ ノ 酸類の残基があ げ ら れる が必ず し も α 一 ア ミ ノ 酸で ある必要性 はな い 。
    [0034] α — ア ミ ノ 酸類 と し て は下記式
    [0035] R 2
    [0036] Ν Η 2 C Η - C 0 0 Η
    [0037] ( 式中 、 R 2 は水素 ； 非置換低級ア ルキル ： 又は ア ミ ノ 基、 ヒ ド ロ キ シ基 、 メ ル カ プ 卜 基、 低級 アルキルチオ 基 力 ルポ キシル基、 フ ： π 二ル基、 ヒ ド ロ キ シ フ I ニル基、 イ ミ ダゾー ル基も し く はイ ン ド リ ル基で置換さ れた置換 低級 アルキルを示す ） で示さ れる ア ミ ノ 酸 、 又は下記式
    [0038] R
    [0039] C 0 0 H
    [0040] 2
    [0041] N
    [0042] c
    [0043] ( 式中 、 R 3 は水 9 •
    [0044] 素又 は ヒ ド ロ キシ基を示す ） で示さ れる ア ミ ノ 酸が Cあ げ ら れる 。
    [0045] 〇 〇
    [0046] こ れ ら の ア ミ ノ 酸 と し てH N H は具体的 に は 、 グ リ シ ン 、 ァ
    [0047] 3
    [0048] ラ ニ ン 、 パ リ ン 、 ロ イ シン 、 イ ソ ロ イ シ ン 、 セ リ ン 、 卜
    [0049] 2
    [0050] レ 才 ニ ン 、 システ ィ ン 、 メ チ才 ニ ン 、 ァ スパラギ ン酸、 グルル タ ミ ン酸、 リ ジ ン 、 アルギニ ン 、 フ I 二ルァラ ニン チ 口 シ ン 、 ヒ ス チジ ン 、 卜 リ ブ 卜 フ ァ ン 、 プ ロ リ ン 、 才 キシプ ロ リ ンな どが あげ ら れる 。 X に おけ る ア ミ ノ 酸残 基 と し て は 、 下記 （a) — (c) の ア ミ ノ 酸残基も し く はそ れ ら の ァ ミ ノ 基が保護さ れた ア ミ ノ 酸残基が好 ま し い 。
    [0051] (a) ( V a I )
    [0052] c ) H N — C H — C O — ( P e )
    [0053] C H 〇 Yに お け る ア ミ ノ 酸残基 と し て は下記 （ a ) の ア ミ ノ 酸 残基も し く はそ れ ら の カ ルポ キ シル基が保護さ れた ア ミ ノ 酸残基が好ま し い 。
    [0054] (a) - N H G H C 0 0 H ( - L e u - 0 H )
    [0055] C H 2 C H ( C H )
    [0056] Xま た は Yに おけ る ぺプチ ド残基 と して は一般的に は 上記ア ミ ノ 酸が 2〜 3個程度結合 し た低重合ペプチ ド残 基が あ げ ら れる 。 Xに おける ぺプチ ド残基 と し て は下記 (d) - ( ) の ぺプ チ ド残基 -も し く はそ れ ら の ァ ミ ノ 基な ど の官能基が保護さ れた ぺプチ ド残基が好 ま し い 。
    [0057] (d) H 2 N C H C〇一— N H C H C 〇 - C H ( C H 3 ) 2 C H ( C H ¾ ) 2
    [0058] (Va卜 Va卜 )
    [0059] (e) H 2 N C〇 一
    [0060]
    [0061] ( Va I -Pro- )
    [0062]
    [0063] ( Lys-Va I -) (h) H o N C H C O - N H C H C O - I I
    [0064] C H 2 C O O C H ( C H 3 ) 2
    [0065] ( Asp-Val -)
    [0066] Y に おけるペプチ ド残基 と し て は下記 （b)-(c) の ぺプ チ ド残基も し く はそれ ら の 力 ルポキル基な ど の官能基が 保護さ れて いて も よ いペプチ ド残基が好ま し い 。
    [0067] (b) - N H C H C 0 N H C H C 00 H
    [0068] I I
    [0069] C H 2 C H ( C H 3 ) 2 C H ( C H )
    [0070] (-Leu-Val -OH) (c) - N H C H o C O - N H C H C O O H
    [0071] I
    [0072] C M ( C H 3 ) 2
    [0073] (-Gly-Val -OH) Xな ど に おける ア ミ ノ 酸残基ま た はペプチ ド残基の ァ ミ ノ 基の保護基 と して は 、 フ タ リ ル基お よぴスルホ ニル な ど を含め た ァ シル基 ； ウ レ タ ン型 に し て 保護す る 才キ シ カ ルポニル基な どが あ げ ら れる 。 例 えば ァ シル基 と し て は 、 非置換低級アルキル力 ルポニル、 置換低級 アルキ ル カ ルポニル （ 置換基 と して はハ ロ ゲン原子 、 二 卜 口 、 低級ァルコ キシ 、 フ I ニルな ど ） 、 ベ ンゾィ ル、 フ タ リ ル 、 ァ リ ールスルホニルな どが あ げ ら れる 。 これら の ァ シル基 に お い て フ I 二ル基を含むも の はそ の フ ェ ニル基 上に置換基 と し て 、 低級ア ルキ ル、 ハ ロ ゲン原子、 低級 アル コ キ シ 、 二 卜 口 な ど の置換基を有 し て も よ い 。 こ れ ら の ァ シル基の具体例 と して は 、 ァ セチル 、 卜 リ フ ル才 ロ ア Ιζチル、 フ 丁- 二ルァ セ チル、 フ I ニルプ タ ノ ィ ル 、 フ エ ニルプ ロ ピオ ニル、 ベ ンゾィ ルな どが あ げ ら れる 。 ウ レ タ ン型 に し て 保護す る 才 キシ カ ルポニル基 と し て は 、 非置換低級アルコ キ シ 力 ルポニル、 置換低級アルキ ル才キ シ カ ルポ ニル （ 置換基 と し て は前記の ァ シル基の と こ ろで あげた も の が同様に あ げ ら れる ） な どが あ げ ら れる 。 具体的 に は イ ソ プ ロ ピル才 キシ 力 ルポニル、 t 一 プ 卜 キ シ カ ルポニル 、 イ ソ ペ ンチルォ キシ カ ルポ ニル 、 ベ ン ジルォ キシ カ ルポ ニル、 置換ベ ン ジル才 キシ カ ルポ ニル （ 置換基 と し て は前記ァシル基の と こ ろで あ げた も の が同様 に あげ ら れる ） な ど があげ ら れる 。
    [0074] 上記ァ シル基及び 才キ シ カ ルポニル基の他に 、 保護基 と し て ベ ン ジル、 蹬換ベ ン ジル （ 置換基は前記 と阅様な も のがあ げ ら れる ） 、 o — 二 卜 口 フ エ 二ルチオ 、 卜 リ フ ェ ニルメ チルな ども場合 に よ り 使用 でき る 。
    [0075] R ！ の飽和 ま た は不飽和の炭化水素基 と して は 、 飽和 も し く は不飽和の低級脂肪族炭化水素基 、 芳香族炭化水 素基な ど が あげ ら れる 。 こ れ ら は置換基を有 し て も よ い これ ら の具体例 と し て は 、 低級アルキル基、 ベ ンジル基 フ エ ニル基な ど があ げ ら れる 。 特に 、 メ チル、 ェ チル、 プ ロ ピル 、 ベ ンジ ルな ど が好 ま し い 。
    [0076] Y な ど に おけ る ア ミ ノ 酸残基ま た はペ プ チ ド残基の 力 ルポキシル基の保護基 と し て はエ ステルが挙げ ら れる 。 エ ステル と し て は 、 低級アル コ ール、 ベ ン ジル アルコ ー ルな ど と の エ ステ ルがあ げ ら れる 。
    [0077] 本発明 に お い て は 、 上記 し たいずれの低級ア ルキルの 場合もそ の例 と し て は 、 メ チル 、 ェ チル、 プ ロ ピル 、 ブ チル、 ペ ンチルな ど の C 〜 C 5 の アルキルが あ げ ら れ る 。
    [0078] 低級'ァルコ ール と し て はメ タ ノ ー ル、 エ タ ノ ー ル 、 プ ロ バノ ール 、 プ タ ノ ールお よびペ ン チルアルコ ールな ど の C 〜 C 5 のアルコ ー ルが あ げ ら れる 。 低級 ア ルコ キ シ と し て は 、 メ 卜 キシ 、 ェ 卜 キシ 、 プ ロ ポキシ 、 ブ 卜 キ シな どの C 〜 C 5 の アル コ キ シが あ げ ら れる 。 ノ ロ ゲ ン原子 と し て は 、 フ ッ 素 、 塩素 、 臭素な どが挙げ ら れる 。
    [0079] 式 [ ェ ] のポス 卜 ス タ チン お よびそ の類縁化合物 は塩 でも よ く 、 かかる塩 と し X は 、 塩酸 、 硫酸、 硝酸な ど の 無機酸 ； P — 卜 ルエ ン スルホ ン酸 、 ク ェ ン酸、 コ ハ ク酸 な ど の有機酸等 と の酸付加塩があげ ら れる 。 ま た ナ 卜 リ ゥ ム 、 力 リ ゥ ム'な ど の アル カ リ 金属 ； カ ルシ ウ ム な ど の アル カ リ ； h 類金属等 と の塩が あ げ ら れる 。
    [0080] 式 [ I ] に お い て 、 X が し ー ノ リ ル 一 L — パ リ ル ー 、 R 1 がェ チル 、 Y が 一 [) - - π イ シルー し 一 ノ リ ンで あ る sd式
    [0081] ェ ^
    [0082] C
    [0083] I
    [0084] ― o 〇 一 〇
    [0085] c¾ェ ェ
    [0086] > O じ
    [0087] Z
    [0088] 〇 〇 へ ^ > コェ ェ ェ Ο ϋ o o 」工
    [0089] 一 Ζ
    [0090] I
    [0091] 〇
    [0092] ο
    [0093] 〇 ェ 〇 じ
    [0094] 〇一〇 ェ
    [0095] Ζ へ
    [0096] ― ο ◦ 一〇 ―
    [0097] COェ ェ
    [0098] 〉〇一〇
    [0099] エ i
    [0100] o
    [0101] 一〇
    [0102] > o
    [0103] 一 Z で示さ れる ポス 卜 ス タ チン は 、 ポス 卜 ス タ チン生産菌の 培養物か ら得る こ と がで ぎ る 。
    [0104] ボス 卜 ス タ チンの理化学的性質 は下記の通 り である 。 1) ポス 卜 ス タ チ ン の理化学的性状
    [0105] (1 ) 色及び形状 ： 白色粉末
    [0106] (2) 元素分析値
    [0107] C 5 5 . 0 %
    [0108] H 8 . 6 2 %
    [0109] N 1 2 . 2 %
    [0110] (3) 分子量 ： マ スス ぺ ク 卜 ルの ピ ー ク か ら 5 4 1 と 推定さ れる 。
    [0111] (4) 分子式 ： C 26H 7N 5 0 7 、 マススぺ ク 卜 ル 、 1 3 C - N M Rス ペ ク ト ル及び元素分析値か ら
    [0112] 4 5 07 ( 元素分析試料は 3 2の水を 含む ）
    [0113] (5) 融点 : 1 6 9 1 7 1 Ό
    [0114] (6) 比旋光度 ： [ α ] 20 + 1 3 . 9 ° ( c 0 . 5 、 酸 ）
    [0115] (7) 紫外線吸収スペ ク ト ル ： 0 . Ί * / メ タ ノ ー ル溶液中で 2 5 0 nm付近 に弱 い吸収を示 し た 。
    [0116] (8) 赤外線吸収スペ ク ト ル ： 添付図面 の第 Ί 図 に 示 す 。
    [0117] (9) 水 ¾核核磁気共鳴ス ペ ク ト ル ： 添付図面 の第 2 図 に示す 。
    [0118] (10)炭素核核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル ： 添付 図面の第 3 図 に示す 。
    [0119] 呈色反応 ： シ リ 力 ゲル薄層上でニ ン ヒ ド リ ン試 薬 、 ラ イ ド ン * ス ミ ス試薬 、 2 , 3 , 5 — 卜 リ フ ェ ニルテ 卜 ラ ゾ リ ユ ウ ム ク ロ ラ イ ド試薬 、 2 ， 4 — ジ ニ ト ロ フ エ ニル ヒ ド ラ ジ ン試薬 に 陽性。
    [0120] ( 12 )溶解性 ： 水 、 メ タ ノ ー ル 、 ジ メ チルスルホキシ ド に可溶で あ り 、 ァ セ 卜 ン 、 酢酸ェ チル、 ク ロ 口 ホルム 、 へキ ン に不溶で あ る 。
    [0121] ( 13 )薄屬 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の R f 値 ： シ リ カ ゲル [ メ ル ク 社製シ リ カ ゲル Art.5 7 "1 5 、 展開溶媒 n — ブ タ ノ ールー 齚酸 一 水 （ 4 : 1 ： 1 ) ] ΐ = 0 . 7 0 。
    [0122] 0 D S逆相シ リ カ ゲル [ メ ル ク 社製シ リ カ ゲル Art.1 5 3 8 9 、 展開溶媒 ： ァ セ 卜 二 卜 リ ル一緩 衝液 A * ( 7 : 1 3 ) ] R f = 0 . 5 4 。
    [0123] * 5 %齚酸 カ リ ウ ム 、 1 % ク ェ ン酸 ♦ Ί 水和物 を 含む水溶液で あ る 。
    [0124] ボス 卜 ス タ ヺ ン は 、 ス ト レブ 卜 ミ セ ス属 に 属す る ポス 卜 ス タ チン生産菌を培養 し 、 そ の培養液か ら ボス 卜 ス タ チ ン を採取 ¾ る こ と に よ り 得る こ と がで き る 。
    [0125] 本発明 に使用 さ れる ボ ス 卜 ス タ チ ン生産菌の一例 と し て は 、 本発明者 ら に よ り Ί 9 8 5年 2 月 、 微生物化学研 究所構内 の土壌よ り 新た に分離さ れた放線菌で あ っ て M H 5 3 4 — 3 0 F 3の菌株番号 を付 さ れた菌株があ る 。 Μ H 5 3 4 — 3 0 I-' 3株の菌学的性状は次の通 り で あ る 1. 形 態
    [0126] M H 5 3 4 — 3 0 F 3 株 は 、 顕微鏡下で分枝 した基中 菌糸 よ り よ く 伸長 し た気菌糸 を着生 し 、 ら せ んを形成す る 。 輪生枝は認め ら れな い 。 らせ ん形成は比較的長 く 、 8 回転以上のもの が多 く み ら れる 。 成熟 し た胞子 は楕円 形で 、 0 . 5 〜 0 . 7 X 0 . 9 〜 1 . 1 ミ ク ロ ン位の大 き さ を示 し 、 表面 は と げ状、 胞子の連鎖 は 2 〇 個以上で あ る 。
    [0127] 2. 各種培地に お ける生育状態
    [0128] 色の記載につ い て 以下の [ 1 内 に示す標準は、 コ ン テ ィ - J 一 ♦ コ ー ポ レ ー シ ョ ン ♦ 才ブ ♦ ァ メ リ カ の カ ラ ー · /、 ー モ ニ イ ， マ ニ ュ アル （ Contai ner Corporat ion of Americaの Color Harmony Manual ) を用 いた D
    [0129] (1) シ ュ ク ロ ー ス ♦ 硝酸塩寒天培地 （ 2 7 °C培養 ）
    [0130] 暗 い黄茶 [ 2 nl、 Covert Browm] 〜灰昧黄茶 [ 3 nし
    [0131] Dk. Brown ) の発育上 に 、 灰 白 [ 1dc , Putty ] 〜明 る い緑昧灰 [ 2 4 V 2 d c ] の気菌糸 を着生 す る 。 溶解 性色素 は茶色を呈す る 。
    [0132] (2) グルコ ー ス ♦ ァ スパラ ギ ン寒天培地 （ 2 7 °C培養 ） 発育 は う す黄茶 [ 3 ie, Camel 〜 3 3 , Adobe
    [0133] Brown ] 、 気菌系 は着生せず 、 溶解性色素はみ と め ら れ ない 。
    [0134] (3) グ リ セ リ ン ♦ ァ スパラ ギ ン寒天培地 （ I S P—培 地 5 、 2 7 V培養 ）
    [0135] 灰味黄茶 ( 2 ie, Lt. Mustard Tan 〜 2 pl， Mustard Brown ] 〜灰味才 リ ーブ [ Ί 1 2 - pi , Ol ive ] の発 育上 に 、 青色 [ 1 5 ba, Blue Tint ] 〜明 る い青味灰
    [0136] [ 1 9 dc , Aqua Gray 〜 1 9 fe， Aqua Gray 〜 2 2 ih, Hoss Gray ] の気菌糸 を着生 す る 。 発育襄面 は 、 オ リ ー ブ 様を呈 し溶解性色素はわずか に黄色〜才 リ 一ブ色を おびる程度で あ る 。 発育の色お よび溶解性色素 と も に 、 H C ^ で赤味を おびるが N a 0 Hで は変化を認めな い 。
    [0137] (4) ス タ ー チ ♦ 無機塩寒天培地 （ I S P — 培地 4 、 2 7 C培養 ）
    [0138] 無色〜 う す黄 （ 2 ec， Biscuit ) の発育上 に 、 明る い 青味灰 [ 1 9 dc , Aqua Gray 〜 Ί 9 fe, Aqua Gray ] 明 る い緑味灰 [ 2 2 i , Moss Gray ] の気菌糸 を着生す る 。 溶解性色素はみ と め ら れな い 。
    [0139] (5) チ ロ シ ン寒天培地 （ I S P —培地 7 、 2 7 °C培養 ） う す茶 （ 3 ^ 9 , Adobe Brown ] 〜暗い黄茶 [ 3 pn,
    [0140] Sep i a Brown ] の発育上に 、 青色 [ Ί 5 ba, Blue Tint] 〜明 る い緑味灰 [ 2 2 i h, Hoss Gray ] の気菌糸 を着 生寸 る 。 発育裏面 は オ リ ーブ色を おび 、 溶解性色素は 、 ご く わす か に茶色味を呈す る程度で あ る 。 発育の色お よ び溶解性色素は 、 H C ί で赤味をおぴ 、 N a 0 Ηで は変 化がみ ら れな い 。
    [0141] (6) 栄養寒天培地 （ 2 7 °C培養 ）
    [0142] う す黄 （ 2 ec, Biscuit ] の発育上 に 、 う つ す ら と 白 の気菌糸 を着生す る 。 溶解性色素は み と め ら れな い 。
    [0143] (7) イ ー ス ト ♦ 麦芽寒天培地 （ I S P —培地 2 , 2 7 で培養
    [0144] う す黄茶 [ 2 ie, Lt. Mustard Tan ] の発育上に 、 明 るい青味灰 [ 1 9 dc, Aqua Gray 〜 Ί 9 fe, Aqua Gray 〜 2 2 ie, Bay berry Gray ] の気菌糸 を着生す る 。 発育 裏面 は オ リ ー ブ色を おぴ、 溶解性色素は み と め ら れない 。
    [0145] (8) オ ー ト ミ ール寒天培地 （ I S P —培地 3 , 2 7 培養 ）
    [0146] 無色の発育上に 、 明る い青味灰 9 dc, Aqua Gray ] 〜明 る い緑味灰 [ 2 2 ih, Hoss Gray ] の気菌糸を着生 する 。 溶解性色素はみ と め ら れな い 。
    [0147] (9) グ リ セ リ ン ♦ 硝酸塩寒天培地 （ 2 7 で培養 ）
    [0148] 暗い黄茶 [ 3 PO, Ebony へ' 3 n i , Dk. Brown ] 〜 暗 い 才 リ ー ブ [ Ί 1/ 2 - Pn, Dk. Ol ive 〜 1 fflg , Dk. Ol ive Gray ] の発育上に灰白 [ 1 dc， Putty ] 〜明る い 灰 [ 1 f e, G r i e g e l 〜明 る い茶灰 [ 3 fe, Si lver Gray ] の気菌系を着生す る 。 発育裏面 は オ リ ーブ色を おび溶解 性色素 は ご く わず か に オ リ ー ブ色を ϋす る 。 発育の色、 溶解性色素 とも に H C で茶色味を おびる が 、 N a O H で は変化がみ ら れな い 。
    [0149] (10) ス タ ー チ 、 寒天培地 （ 2 7 °C )
    [0150] 無色〜 う す黄 [ 2 ec , Bi squi t ] の発育上 に 、 明 る い 青味灰 [ 1 9 fe, Aqua Gray ] 〜明 る い緑味灰 [ 2 2 i h, Hoss Gray ] の気菌糸を着生 す る 。 溶解性色素はみ と め ら れな い 。
    [0151] (11) リ ンゴ酸石灰寒天培地 （ 2 7 C培養 ） 無色の発育上に 、 青 白 〜明 る い青味灰 [ Ί 9 fe, Aqua Gray 3 の気菌糸 を着生 す る 。 溶解性色素は 、 培養後 2 0 曰 目 頃よ り わず か に茶色味を おびる程度で あ る 。
    [0152] (12) セル ロ ー ス （ 瀘紙片添加合成液、 2 7 °C培養 ） 無色の発育上 に 、 う つ す ら と 、 青白 [ 1 9 dc, Aqua Gray] 〜明る い青味灰の気菌糸 を着生す る 。 溶解性色素 はみ と め ら れな い 。
    [0153] (13) ゼ ラ チン穿刺培養
    [0154] 1 5 % 単純ゼ ラ チ ン培地 （ 2 0 培養 ） で は 、 無色の 発育上にわずか に青白 [ 2 2 dc] 〜明る い育味灰 [ Ί 9 f e, Aqua Gray ] の気菌糸 を着生 し 、 溶解性色素は ほの か に茶色味をおびる程度で あ る 。 グルコ ー ス ♦ ペプ ト ン ♦ ゼ ラ チ ン培地 （ 2 7 培養 ） で は発育 は無色 、 気菌糸 は着生 し ない 。 溶解性色素 は 、 わずかに茶色味を おぴる 程度で あ る 。
    [0155] (14) 脱脂牛乳 （ 3 7 °C培養 ）
    [0156] 発育 は 、 う す黄〜黄茶 、 気菌糸 は着生 せず 、 溶解色素 お み と め ら れない 。
    [0157] 3. 生理的性質
    [0158] (1 ) 生育温度範 1!
    [0159] グルコ ー ス · ァ スパラ ギ ン寒天 （ グルコ ー ス Ί % 、 ァ スパラ ギ ン 0 . 0 5 %、 K 2 H P 04 0 . 0 5 % 、 ひも 寒天 3 . 0 % 、 PH 7 . 〇 ） を用 い 、 2 0 。C 、 2 4 、 2 7 C 、 3 0 C 、 3 7 °C , 5 0 °C の各温度で試験の結果、 5 0 C を 除い て そ の いず れの温度で も発育 し た が 、 最適 生育温度 は 2 7 〜 3 7 °C付近 と思われる 。
    [0160] (2) ゼ ラ チン の液化 （ Ί 5 %単純ゼラ チン培地 、 2 0 培養 ： グルコ ー ス ♦ ペプ ト ン · ゼラ チン培地、 2 7 H 培養 ）
    [0161] Ί. 5 %単純ゼラ チン培地で は 、 培養後 Ί 4 日 目 頃 よ り 液化がみ られる が 、 そ の作用 は極め て 弱い 。 グルコ ー ス ♦ ぺプ 卜 ン * ゼラ チ ン培地で は 、 培養後 2 Ί 日 間観察 し た が 、 液化をみ と め なか っ た 。
    [0162] (3) ス タ ー チの加水分解 （ ス タ ー チ · 無機塩寒天培地 お よびス タ ー チ寒天培地、 いずれも 2 7で培養 ）
    [0163] ス タ ー チ ♦ 無機塩寒天培地 、 ス タ ー チ寒天培地 と も に 培養後 3 曰 目 頃よ り 水解性が み と め ら れ、 その作用 は強 い方である 。
    [0164] (4) 脱脂記牛乳の凝固 ♦ ペプ ト ン化 （ 脱脂牛乳 、 3 7 で培養 ）
    [0165] 培養後 2 曰 目 頃よ り 極めて 弱い凝固が始ま り 、 凝固が 完了 し な い う ち に 、 培養後 8 日 目 頃よ り ペプ ト ン化が始 ま る 。 ペプ ト ン化 は培養後 Ί 4 曰 目 Hiに は完了 し 、 そ の 作用 は強い 。
    [0166] (5) メ ラ ニ ン様色素の生成 （ 卜 リ プ ト ン ♦ イ ー ス ト ♦ ブ ロ ス 、 〖 S P — 培地 Ί ； ペプ ト ン * ィ ー ス 卜 鉄寒天培 地、 1 S P— 培地 6 ； チ ロ シ ン寒天培地 、 I S P—培地 7 、 いず れも 2 7 培養 ）
    [0167] 卜 リ プ ト ン · イ ー ス ト · ブ ロ ス お よびペプ ト ン ♦ ィ — ス 卜 鉄寒天培地で は陽性 、 チ ロ シ ン寒天培地で は陽性で あ る 。
    [0168] (6) 炭素源の利用 性 （ プ リ ドハ ム ♦ ゴ ド リ ー ブ寒天培 地 、 I S P —培地 9 、 2 7 °C培養 ）
    [0169] D — グルコ ー ス 、 Lー ァ ラ ビ ノ ー ス 、 D — キシ ロ ー ス 、 D - フ ラ ク 卜 一 ス 、 シ ュ ク ロ 一 ス 、 イ ノ シ 卜 一ル、 L 一 ラ ム ノ ー ス 、 ラ フ ィ ノ ー ス 、 D —マ ンニ 卜 ー ルを利用 し て よ く 生育す る 。
    [0170] (7) リ ンゴ酸石灰の溶解 （ リ ンゴ酸石 灰寒天 、 2 7 °C 培養 ）
    [0171] 陽性であ る 。
    [0172] (8) 硝酸塩の遝元反応 （ 0 . 1 %硝酸 カ リ 含有ぺプ 卜 ン水 、 i S P —培地 8 、 2 7 培養 ）
    [0173] 陽性で あ る 。
    [0174] (9) セ ル ロ ー ス の分解 （ 瀘紙片添加合成液 、 2 7 °C培 養 ）
    [0175] 陰性で あ る 。
    [0176] 以上の性状を要約 す る と 、 M H 5 3 4 — 3 0 F 3株の 気菌糸 は ら せんを形成 し 、 輪生枝 はみ と め ら れず 、 胞子 の表面 は とげ状で あ る 。 種々 の培地で 白 〜明る い青昧灰 〜明 る い緑味灰の気菌糸を豊富 に着生 し 、 発育の色 は無 色〜 う す黄〜暗い黄茶〜灰味 才 リ ーブ 、 発育裏面 は オ リ ー ブ色を おぴ 、 溶解性色素 は み と め ら れな い か 、 わずか に茶色味を おびる程度で あ る 。 発育の色お よび溶解性色 素 は H C ^ で赤味を おぴる が 、 N a 〇 Hで は変色 し な い 。 メ ラ ニ ン様色素は 、 卜 リ プ ト ン ♦ イ ー ス ト ♦ ブ ロ ス お よ びペプ ト ン ♦ ィ ー ス 卜鉄寒天 で陽性、 チ 口 シ ン寒天で陰 性で ある 。 蛋白分解 は 、 ゼラ チン に おいて は極め て 弱い が 、 脱脂牛乳で は強 く 、 ま た ス タ ー チの水解性は強い 。 な お 、 細胞壁に含 ま れる 2 , 6 — ジ アミ ノ ピメ リ ン酸は L L —型であ っ た 。
    [0177] これ ら の性扰に よ り 、 M H 5 3 4 — 3 0 F 3 株 は ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス （ Streptomyces ) に属す る も の と考え ら れ、 近縁の既知菌種を検索す る と以 " Fの 3 種があげ ら れる 。 す なわち ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス ♦ ピ リ ド ク ロ モゲネ ス
    [0178] ( Streptomyces v i r i dochromojendes _)
    [0179] [ International Journal of Systematic Bacteriology, 2 2巻 、 3 6 9 頁 （ Ί 9 7 2 ) ； Soi I Science, 8 巻 、 Ί 6 3 頁 （ Ί 9 Ί 9 ) ] 、 ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス ♦ チ ヤ 一 卜 リ ュ ー シ ス ( Streptomyces c artreus i s )
    [0180] [ International Journal of Systematic Bacteriology, 1 8 巻 、 9 5 頁 。 （ Ί 9 6 8 ) ； Waksman, The
    [0181] Actionamycetes, 2巻 、 Ί 9 2 頁 （ Ί 9 6 1 ) ] 、 ス ト レプ 卜 ミ セ ス ♦ コ エル レス セ ンス （ Streptomyces
    [0182] coeru lescens ) [ I nternat ι ona I Journal or
    [0183] Systematic Bacteriology, 1 8 巻 、 1 0 0 M ( 9 6
    [0184] 8 ) ； Gauze, Zu r K I a s s i f i z Ί e r u n g de r
    [0185] Act i onomyceten , 9 3 頁 （ Ί 9 5 8 ) 、 Veb. Gustav , Fischer Ver I ag . Jena ] で あ る 。 次 に 、 前記 3 菌株 と
    [0186] M H 5 3 4 — 3 0 F 3 株を実際に 比較検討 し 、 そ の結果 を次表 に示 し た 。 ¾ 1 ¾
    [0187]
    [0188]
    [0189] 第 1 表 に示 し た よ う に 、 M H 5 3 4 — 3 0 F 3 株 と ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス ♦ ピ リ ド ク ロ モゲネ ス 、 ス 卜 レプ 卜 ミ セ ス ♦ チ ャ ー ト リ ュ ー シ ス お よびス ト レプ 卜 ミ セ ス ♦ コ ェ ル レス セ ンス は いず れも よ く 類似 し た 性状を示 し た 。
    [0190] 比較に 用 いた 3 菌株 は 、 当然の こ と なが ら類似 し た性 状を有す る が 、 ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス ♦ ピ リ ド ク ロ モゲネ ス の特徴は 、 発育裏面の色が オ リ ー ブ色を おびる こ と 、 I S P — 培地 3 で緑色の溶解性色素を生産 し 、 発育裏面の 色お よび溶解性色素は と く に H G で変化 し て 赤味を お び る こ と で あ り 、 そ の性状は前記の文献な ら び に
    [0191] " St reptomyces species com rising the blue - spore series ，' と い 題名 の文献 Journal of Bacteriology , 8 5 巻 、 6 7 6頁 （ 1 9 6 3 ) に も明確 に記載さ れて い る 。 こ の特徴 は 、 表記の 比較試験でも同様の成績を示 し - 従 っ て 、 ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス * ヺ ヤ ー 卜 リ ュ ー シ スお よび ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス ♦ コ エル レ ス セ ン ス につ い て は発育襄 面 の色は オ リ ーブ色を示さず 、 色素の PHに よ る変化も観 察さ れな か っ た 。 M H 5 3 4 — 3 0 ド 3 株は 、 I S P — 培地 3 上で はな いが 、 グ リ セ リ ン ♦ 硝酸塩寒天培地上で . 才 リ ー ブ色の溶解性色素を生産 し 、 発育襄面の色お よ び PHに よ る変色 につ いて は 、 ス ト レブ 卜 ミ セ ス ♦ ビ リ ド ク ロ モゲネ ス と 同様の成辏を示 し た 。 両者の相異点 と し て あ げ ら れる の は 、 牛乳の凝 ^ 、 ス タ ー チの水解性に お け る強弱の差異で あ る 。 な お 、 ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス · ビ リ ド ク ロ モゲネ ス は前述の文献 I nternat i ona I Journal of Systematic Bacteriology, 2 2巻 ， 3 6 9頁 （ 1 9 7 2 ) に お ける メ ラ ニ ン様色素の生成が 、 I S P—培地 "！ 、 6で共 に 陰性、 I S P — 培地 7 で 土 と記載さ れ て い る が 、 実地の比較試験で は 、 記載 した通 り で あ り 、 他の文献上 でもいず れも陽性で あ る ので 、 問題視す る こ と はな い と 推察する 。
    [0192] これ ら の こ と よ り 、 M H 5 3 4 — 3 0 F 3株ス 卜 レプ 卜 ミセ ス ♦ ビ リ ド ク ロ モゲネス （ St reptomyces
    [0193] v i r i doc romogenes ) M H 5 3 4 — 3 0 F 3 と周定 し た 。 なお、 M H 5 3 4 — 3 0 F 3株を工業院徴生物 工業技 術研究所 に寄託申請 し 、 Ί 9 8 7年 7 月 2 日 、 微ェ研菌 寄第 9 4 4 6号 （ F E R M P— 9 4 4 6 ) と して 受託 さ れた 。 そ の後、 Ί 9 9 0年 4 月 4 日 にブ タ ペ ス ト条約 に基 国際寄託に変換 し 、 受託番号 と し て F E R M B P — 2 8 4 8 が付与さ れ て い る 。
    [0194] M H 5 3 4 — 3 0 F 3株はほかの放線菌の場合 に み ら れる よ う に その性状が変化 しや す い 。 た と えば M H 5 3 4 一 3 0 F 3株の 、 ま た は こ の株 に 由来す る突然変異株 ( 自 然発生 ま た は誘発性 ） 、 形質融合体ま た は遣伝子耝 換え体であ っ て も ボス 卜 ス タ チンの生産能を有す る ス 卜 レブ 卜 ミ セ ス属の菌 は す べ て本発明 のポス ト ス タ チン製 造方法 に使用 する こ とが 出来る 。
    [0195] 本発明 の方法で は 、 前記の菌を通常の微生物 が利用 し う る栄養物を含有す る培地で培養す る 。 栄養源 と して は 、 グル ー ス 、 水あ め 、 デキ ス 卜 リ ン 、 シ ュ ク ロ ー ス 、 で んぶん 、 糖蜜 、 動 ♦ 植物油等を使用できる 。 ま た窒素源 と し て 、 大豆粉 、 小麦は い芽、 コ ー ン ステ ィ ー プ ♦ リ カ 一、 綿実かす 、 肉エキ ス 、 ペプ ト ン 、 酵母エ キ ス 、 硫酸 ア ン モニ ゥ ム 、 硝酸ソ ー ダ 、 尿素等を利用 でき る 。 そ の 他 、 必要に 応 じ 、 ナ ト リ ウ ム 、 コ バル ト 、 塩酸 、 憐酸 、 硫酸 、 及びそ の他の イ オ ン を生成す る こ と の出来る無機 塩類を添加す る こ と は有効で あ る 。 ま た菌の生育を助 け 、 生理活性物質ポ ス 卜 ス タ チン の生産を促進す る よ う な有 機及び無機物 を適当 に添加す る こ と がで きる 。
    [0196] 培養法 と し て は 、 好気的条件での培養法 、 特に深部培 養法 が適 し て いる 。 培養 に適当 な温度は Ί 5〜 3 7 °Cで あ る が 、 多 く の場合 、 2 6〜 3 0 °C付近で培養す る 。 生 理活性物質ボス 卜 ス タ チン の生産は培地や培養条件に よ り 異な る が 、 振 と う 培養、 タ ン ク培養 と も通常 1 〜 1 〇 日 の 間でそ の蓄積が最高 に達す る 。 培蔻物 中 の生理活性 物質ポス 卜 ス タ チ ンの蓄積璗が最高 に な っ た と き に 培養 を停止 、 培養液か ら 目 的物質を単齟精製 11 る 。
    [0197] 本発明 に よ っ て得 ら れる ポス 卜 ス タ チン の培養液か ら の採取 に あた っ て は 、 そ の性状を利用 し た通常の分離手 段を適宜組み合わせ て 抽 出精製す る こ と がで き る 。 即 ち 、 培養瀘液を PH 5 に修正 し ダイ ヤ イ オ ン P H — 2 0 ( 三菱 化成株式会社製 ） の カ ラ ム に通 し 、 水で 洗铮 し 、 メ タ ノ ー ルな ど の有機溶媒で溶龃 る 。 溶離液を減圧下 に濃縮 乾固 す る 。 こ れに少 [の メ タ ノ ー ルを加 え 可溶部分を セ フ ア デ ッ ク ス L H — 2 0 ( フ ア ルマ シ ア社製 ） の カ ラ ム に かけメ タ ノ ールで溶離す る 。 溶離液を滅圧下に濃縮乾 固する こ と に よ り 粗粉末を得る こ と がで き る 。
    [0198] 上述の方法 に加 え 、 吸着 ク ロ マ 卜 グラ フ ィ ー 、 ゲル濾 過 ク ロ マ 卜 グラ フ ィ 一 な どを適宜組み合わせあ る い は繰 り 返す こ と に よ っ て ポス 卜 ス タ チンを単離す る 。
    [0199] ボス 卜 ス タ チ ン の培養工程な らびに精製工程中での追 跡 は抗プ ロ リ ルエ ン ド ぺプ チダ ー ゼ活性の測定 に基づい て行 っ た 。 抗プ ロ リ ルエ ン ド ぺプチダーゼ活性の測定 は 、 後述す る試験例で示す よ う に 、 Yoshimoto , Tadash i ら の方法 [ Biochim. B i ophys. Acta, 5 6 9巻 、 1 8 4〜 1 9 2頁 （ 1 9 7 9 ) ] の改良法を用 い て 行 っ た 。
    [0200] ポス ト ス タ チン は化学合成法 に よ っ て も製造する こ と ができ 、 ま た ボス 卜 ス タ チ ン類縁化合物も同様の化学合 成法 に よ っ て製造す る こ と がで きる 。
    [0201] 即ち 、 式 [ I ] で示さ れる ボス 卜 ス タ チ ン お よびそ の 類縁化合物も し く はそ れ ら の塩は 、 下記部分構造式 [ E ]
    [0202] 一 N H C H C H C O - [ II ]
    [0203] R！ 0 H
    [0204] ( 式中 R は飽和 ま た は不飽和 の炭化水素基を示す ） を有す る 3 — ァ ミ ノ — 2 — ヒ ド L】 キ シ脂肪酸の誘導体を 酸化 し 、 下記部分構造式
    [0205] 一 N H C H - C O— C O— [ I ]
    [0206] I ( 式 中 R は前記 と 同 じ ） を有す る 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才キソ 脂肪酸の誘導体を得 、 必要に 応 じ保護基の除去及び ま た は塩の形成を行う こ と に よ り 製造できる 。
    [0207] 式 [ E ] で示さ れる部分構造式を有す る 3 - ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ脂肪酸の誘導体 は 、 ア ミ ノ 酸 と し て 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシ脂肪酸ま た は 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ー 5 — ァ リ ー ル脂肪酸を用 い て通常の ぺプチ ド合成法 に よ り 製造できる 。 こ の よ う に し て 得 ら れる化 合物 と し て 例 えば一般式 X - N hl C HI C H C O - Y [ IV ]
    [0208] 1 I
    [0209] R 1 0 H
    [0210] ( 式中 X , Yお よび R〗 は前記 と同 じ意味を表す 。 ） で示さ れる化合物が あ げ ら れる 。
    [0211] ( ェ ） . 即 ち 一般の液相法を用 い る場合次の通 り で あ る 。
    [0212] (1) 例 えば最終脱保護 に接触水素分解を用 い る場合 に つ い て 述べる 。
    [0213] 例 えばま ず Yに対応する ア ミ ノ 酸の ベ ン ジ ルエ ステル ま た は ペプ チ ド の ベ ン ジルエ ステル と例 え ば p — メ 卜 キ シ ベ ンジ ル才 キ シ カ ルポニル - - 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ脂肪酸 ま た は t — ブ 卜 キ シ カ ルポ 二ル ー 3 — ァ ミ ノ 一 2 - ヒ ド ロ キ シ脂肪酸等を ペプチ ド合成に 通常用 い ら れる溶媒 （ 例 えばジ メ チルフ オ ルム ア ミ ド ） 中で 、 ぺプ チ ド合成に通常 い ら れる縮合剤 （ 例 えばジ シ ク ロ へキ シル カ ルポ ジ イ ミ ド 、 ジ イ ソ プ ロ ピル力 ルボ ジ ィ ミ ド 、 N— ( 3 — ジメ チルァ ミ ノ プ ロ ピル ） 一 N ' — ェチルカ ルポ ジ イ ミ ド ま た はそ の塩 、 等の 力 ルポ ジ イ ミ ド類、 ま た はそ れ等 と縮合補助剤 、 例 え ば 、 Ί — ヒ ド ロ キシ ベ ン ゾ 卜 リ アゾ ール、 N — ヒ ド ロ キ シ コ ハ ク 酸イ ミ ドな どの 組み合せ ） を用 いて 縮合す る 。 つ いで 卜 リ フ ル才 口 酢酸 な ど の選択的脱保護剤で例 えば P — メ 卜 キシ ベ ンジル才 キシ カ ルポニル基、 ま た は t ー ブ 卜 キ シ カ ルポ二ル基を 除き 、 さ ら に 、 願次一般式 [ I ] に お け る X に対応す る ア ミ ノ 酸ま た はペプチ ドを 、 通常の方法で縮合 して 合成 す る こ と が出来る 。
    [0214] ( 2 ) 次に最終脱保護に ト リ フ ル才 ロ 齚酸を用 いる場合 につ い て述べ る 。
    [0215] 例 えば Y に対応する ア ミ ノ 酸の t 一 ブチルエ ステルま た は プチ ド の t — プチルエ ステル と例 えば p — メ 卜 キ シ ベ ンジル才キシ カ ルポ二ルー 3 — ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キ シ脂肪酸 ま た は ベ ン ジル才 キ シ カ ルポ ニル ー 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド U キシ脂肪酸を （1 ) と同様に縮合す る 。 次 に接触水素化分解 に よ り ア ミ ノ 基の保護基、 P — メ 卜 キ シ ベ ンジル才キシ 力 ルポニル基ま た はベ ンジル才キ シ カ ルポ二ル基を 除き 、 さ ら に 顒次一般式 [ I ] に お け る X に対応す る ア ミ ノ 酸ま た はペプチ ドを縮合 して も よ い 。
    [0216] ( I ) . 次 に 固相法を用 い る場合 につ い て述べる 。 9 フ ル才 レニルメ チル才 キ シ カ ルポニル一 ア ミ ノ ア シル — p — アルコ キ シベ ン ジル アル コ ー ル樹脂を 出発原 料 し 、 塩基処理に よ る 9 — フ ル才 レニルメ チル才キシ カ ルポ ニル基の除去 、 9 — フ ル 才 レ ニルメ チル 才 キ シ カ ルポ ニル 一 ア ミ ノ 酸 、 9 — フ ルォ レ ニルメ チル才 キシ カ ルポ 二ル ー 3 — ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キ シ ー ペ ン タ ン 酸 、 次いで 9 — フ ルォ レニルメ チル才 キ シ カ ルポ二ルー ア ミ ノ 酸の縮合を順次繰 り 返 し 最後 に 、 ベ ン ジル才 キシ カ ル ボ ニル 一 ア ミ ノ 酸、 ま た は 、 t ー ブ 卜 キシ カ ルボ二 ル ー ア ミ ノ 酸 、 ま た は 、 ァ ミ ノ 基の保護基 と な る カ ルポ ン酸 類を縮合す る こ と に よ り 合成で き る 。
    [0217] か く て 製造さ れる式 [ II ] の 部分構造式を有 す る 3 — ァ ミ ノ _ 2 — ヒ ド ロ キ シ脂肪酸の誘導体 （ 例 えば一般式 [ IV ] の化合物 ） の酸化は 、 他の ペプ チ ド部分 に影響を 与えな い よ う に穏やかな条件で行う 。 例 え ば （ 1 ) ジ メ チ ルスルホ キ シ ド ー （ 2 ) 触媒 （ 例 え ば ピ リ ジ ン — 卜 リ フ ル 才 ロ 舴酸塩 ） — （ 3 ) カ ルポ ジ イ ミ ド類ま た は無水酢酸の 組 み合せ を用 い て 、 ジ メ チル スルホ キ シ ド を溶媒 と し 、 又 は他の不活性溶媒中で 0 ^ 〜 4 0 °C程良、 3 - 4 8 時 程度で酸化を行う の が よ い 。 こ の酸化 に よ り 部分構造 式 [ DI ] を有する 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才 キ ソ 脂肪酸誘導体 が得 ら れる 。 こ の誘導体か ら 、 必要 に 応 じ て 、 適宜保護 基を全部も し く は一部除去す る こ と に よ り 、 例 えば式
    [0218] [ ェ 1 の化合物 が得 ら れる 。
    [0219] 次 に こ の必要 に応 じ て 行う 最終脱保護に つ いて 述べ る 。 式 [ III ] の部分構造式 を 有 す る 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才 キ ソ 脂肪酸の誘導体 、 例 え ば一般式 [ I ] の化合物 に お い て 、 X ま た は 丫 と し て セ リ ン 、 卜 レ オ ニ ン等の水酸基を 含むア ミ ノ 酸を含み 、 そ の水酸基が t 一 プチルエ ーテル と し て保護さ れて い る場合 に は 、 最終脱保護に は通常 卜 リ フ ルォ ロ 酢酸が使用 さ れる 。 最終脱保護 に接触水素分 解を用 い る場合 に はセ リ ン 、 卜 レ オ ニ ン等の ア ミ ノ 酸の 水酸基 は例 えばベ ンジルェ 一 テル と し て 保護 し て お け ば よ い 。
    [0220] 式 [ I ] の ポス ト ス タ チン お よびそ の類縁化合物を必 要 に応 じ て 塩 に変換す る に は通常の方法を採用 す ればよ い 。 例 え ば無機酸 、 有機酸を含 む溶液、 ある い は水酸化 ナ ト リ ウ ム 、 水酸化 カ リ ウ ムな どを含む溶液で処理す れ ばよ い 。
    [0221] 本発明 のボス 卜 ス タ チン お よびそ の類縁化合物も し く はそ れ ら の塩 は エ ン ド ぺ プ チダー ビ 阻害作用 を有す る 。 特 に 、 式 [ I ] に お いて 、 Y が 一 D — 口 イ シ ン 、 _ D— ロ イ シ ン - パ リ ン 、 ま た はそ れ ら の エ ステルで あ るポス 卜 ス タ チ ンお よびそ の類縁化合物 は強力 なプ Li リ ルェ ン ド ぺプチダーゼ阻害活性を有 し 、 ま た式 [ ェ ] で示さ れ る ポス ト ス タ チンの類縁化合物 、 特に X がパ リ ルー バ リ ル一 ま た はそ の末端ア ミ ノ 基を保護 し た 基、 R が ェ チ ル基 、 Y が し 一 口 イ シル ー ゾ リ ン 、 グ リ シル 一 ゾ リ ン ま はそ れ ら の エ ステ ルで あ る化合物 は強力 な カ テブシ ン B 阻害活性を有す る 。
    [0222] 本発明 の化合物 は毒性も低 く 、 例 えば ボス 卜 ス タ チン のマ ウ スで の L D 50 ( i V )は 2 0 0 Z 以上で あ る 。 従 つ て 本発明の化合物 は 、 例 え ば抗健忘症薬 と し て 、 あ る い は全身性エ リ テマ 卜一デ スな ど の 自 己免疫疾患治療薬 と し て有効で ある 。
    [0223] ポス 卜 ス タ チ ン お よびそ の類緣化合物も し く はそ れ ら の塩 は通常 、 経口投与あ るい は静脈 、 皮内 、 筋肉内投与 な ど の非経口投与 に よ っ て投与す る こ と がで き る 。 投与 通 は投与す る対象 、 投与ルー 卜 な ど に よ っ て 変動 す る が 通常 0 . 5〜 2 0 0 ^/ / 日 、 好 ま し く は 1 〜 1 0 0 fl¾ ノ 日 である 。
    [0224] 投与す る際の製剤 と し て は慣用 的に 用 い ら れて いる剤 形が挙げ ら れる 。 経口投与の場合 に は 、 デ ンプ ン な ど の 通常の賦形剤な ど と も に 成型さ れた錠剤 、 顆粒剤 、 カ ブ セル剤な ど が用 い ら れる 。 非経口投与の場合 に は通常生 理食塩水 、 溶解剤な ど を適宜用 いて 、 注射剤な ど と して 用 い ら れる 。
    [0225] 本明細書で用 い ら れる各種の略号 はそ れぞれ以下 に示 す意味を有 す る 。
    [0226] V a ： ゾ リ ン 、 P 「 o ： プ ロ リ ン 、
    [0227] A s p : ァ スパラ ギ ン酸 、 P h e : フ エ 二ル ァ ラ ニ ン 、
    [0228] L e u ： ロ イ シ ン 、 G J2 y ： グ リ シ ン
    [0229] L y s ： リ ジ ン 、 丁 h 「 ： ス レ オ ニ ン
    [0230] Z ： ベ ン ジル 才キ シ カ ルボ ニル 、
    [0231] B 0 c ： t ー ァ 卜 キシ カ ルポ ニル 、
    [0232] P B ： フ エ ニ ルブ タ ノ ィ ル 、
    [0233] P P ： フ ： L ニルプ ロ ピオ ニル
    [0234] P A ： フ エ 二ルァ セ チル 、 B z ： ベ ンゾィ ル - 0 B z I ： ベ ン ジルェ ステル、
    [0235] - 0 B u ΐ ： t 一プチルエ ス テル、
    [0236] - 0 M e メ チルエ ステル、
    [0237] F m o c 9 — フ ルォ レ二ルメ チルォ キ 力 ルポニル 、
    [0238] H 0 B t 1 ー ヒ ド ロ キシ ベ ンゾ 卜 リ ァゾ一ル、
    [0239] E t A P ： 3 — ァ ミ ノ — 2 — ヒ ド ロ キシペ ン タ ン酸。 次に実施例 、 参考例及び試験例 に よ っ て 本発明を更に trp細 説明す る 。
    [0240] 実施例 Ί
    [0241] ポス 卜 ス タ チン生産菌を用 いた ポス 卜 ス タ チ ン （ 化合物
    [0242] No. 1 ) _の製造
    [0243] 種 _培地及び生産培地 と し て パ ク 卜 ソ ィ 卜 ン Ί . 0 %、 ガ ラタ 卜 ー ス 2 . 0 %、 コ ー ン ステ ィ ープ ♦ リ カ ー 0 . 5 % 、 デキス 卜 リ ン 2 . 0 % 、 硫酸ア ンモ ニゥ ム 〇 . 2 % 、 炭酸カ ルシ ゥ ム 0 . 2 % を含む培地を用 い た な お殺菌前 の はす べて P H 7 . 4 に調整 し て 使用 し た 。
    [0244] 5 0 0 ^容三角 フ ラ ス コ に Ί O ragを分注 し た前記種 培地を Ί 2 0 で 2 0 分間殺菌 し 、 こ れに ス 卜 レプ 卜 ミ セ ス * ビ リ ド ク 口 モゲネ ス Μ Η 5 3 4 — 3 0 F 3 株 ( F E R Ρ - 9 4 4 6 ) の斜 面培養の ^! 〜 2 白金耳 を接種 し 、 つ いで 5 0 0 ^容三角 フ ラ ス コ に Ί 1 0 i す つ前記生産培地を分注 し、 2 0 °Cで 2 0 分閭殺菌 し 、 前記種培養液 2 すつ を接種 し 、 2 7 eCで 4 日 間振 と う 培養 し た 。 培養終了後 、 嫿過助剤 と し て珪藻土を加え瀘 過 し 、 Η体を含む 形物 お よび培養瀘液を得た 。 得 ら れた培養瀘液 Ί 2 . 5 ^ を塩酸で ΡΗ 5 に修正 し 、 吸着樹脂ダ イ ヤ イ オ ン H P — 2 0 の Ί jg の カ ラ ム に かけ 、 水で洗浄 し 、 8 0 % メ タ ノ ー ル （ 2 <e ) で溶離 し た 。 活 性画分 を含む溶離液を減圧濃縮 し 、 ポス 卜 ス タ チン を含 む褐色の粉末 8 3 を得た 。
    [0245] 得 ら れ た粉末 に少量の メ タ ノ ー ルを加 え 、 可溶部分を 、 メ タ ノ ー ルで充嫫 し た セ フ ア デ ッ ク ス L H — 2 0 ( フ ァ ルマ シ ア社製 ） Ί ί の カ ラ ム に かけ 、 メ タ ノ ー ルを展開 溶媒 と す る ク ロ マ ト グラ フ ィ ー を行 い Ί 5 g ずつ 分画 し た 。 活性画分 No. 2 0 〜 2 7 を減圧濃縮 し 、 う す い褐色粉 末 Ί . 5 3 を得た 。
    [0246] 得 ら れた粉末を少量の 2 2 % ァ セ ト ニ リ 卜 ルに 溶解 し 、 2 2 % ァ セ 卜 二 卜 リ ルで充唭 し た逆相 シ リ カ ゲル （ Y M C - G e I 0 D S 6 0 A 6 0 / 2 0 0 メ ッ シ ュ 、 小 山 化学研究所社製 ） Ί 0 0 に かけ 、 2 2 % ァ セ 卜 二 卜 リ ルを 展開溶媒 と す る ク ロ マ ト グラ フ ィ ー を行い 、 1 5 3 ず つ 分画 し た 。 活性画分 No. 3 0 〜 8 0 を減圧濃縮 し 、 ボス 卜 ス タ チンを含む黄色の粉末 2 0 O fflSを得た 。
    [0247] 得 ら れ た粉末 に 4 の ァ セ 卜 二 卜 リ ル 一 5 % 酢酸 カ リ ゥ ム 、 1 % ク ェ ン酸 * 1 水和物 を含む緩衝液 （ 緩衝液 A と す る （ 9 ： 4 Ί ) を加 え溶解 し 、 ミ リ ポ ア フ ィ ル タ 一 ( 0 . 5 m の F I LT E R U N IT H I L L E X 一 S E、 ミ リ ポ ア社製 ） で濾過 し 、 瀘液 を高速液体 ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ 一 （ セ ン シ ユ ー科学社製、 Nucleosi l5 C カ ラ ム 、 2 0 Φ Χ 3 0 ϋ職 ） に付 し精製を行 っ た 。 移動相 に は ァ セ 卜 二 卜 リ ル — 緩衝液 A ( 9 ： 4 1 ) の混合液を用 い 、 毎分 の流 速で溶出 し て 、 8 «2ずつ 分画 し た 。 活性分画 No.5 2〜 6 0か ら ァ セ 卜 二 卜 リ ルを留去 し た の ち水で 2 0 0 に希 釈 し 、 水で平衡化し た ダイ ヤ イ オ ン H P— 2 0 の カ ラ ム { 2 0 mH ) に かけ 、 水で洗浄 し 、 8 0 % メ タ ノ ールで溶 離 した 。 活性画分を含む溶雛液を減圧漉縮 し 、 ボス 卜 ス タ チ ンを含む淡黄色粉末 2 0 fl¾を得 た 。
    [0248] 得 ら れた粉末を少量の メ タ ノ ー ルに溶解 し 、 4 Gで 2 0 曰 閤静置 し て析出物 をグラ ス フ ィ ルタ ーで濾過 し 、 純 粋な ポス 卜 ス タ チ ン 白 色粉末 Ί 5 ί¾が得 ら れた 。 こ の 白 色粉末 は融点 1 6 9〜 Ί 7 Ί °Cを示 し た 。 得 ら れた純粋 な ポス ト ス タ チン の赤外線吸収スペ ク ト ル、 水素核磁気 共鳴ス ぺ ク 卜 ル及ぴ炭素核磁気共鳴スぺ ク 卜 ルはそ れぞ れ第 Ί 図 、 第 2 図及び第 3 図 に 示 した 。
    [0249] 参考例 1
    [0250] B o c — D — 口 イ シ ン 一 L — ノ S リ ン べ ン ジ ル エ ス テ ル の 合成
    [0251] B O G — D — ロ イ シ ン ♦ Ί 水和物
    [0252] 0 . 7 4 9 3 ( 3 . 0 0 mmo I ) 、 L ー ゾ リ ン ベ ン ジル ェ ステル ♦ p — 卜 ルエ ン スルホ ン酸塩 Ί . 2 5 2 ？
    [0253] ( 3 . 3 0 niiBO i ) 及び N — ヒ ド ロ キ シ ベ ンゾ 卜 リ アゾ— ル 0 . 8 1 1 ^ ( 6 . 0 0 mmo I ) を ジ ク ロ ロ メ タ ン 1 5 ^ に 溶解 し 、 氷冷化で 卜 リ エチル ァ ミ ン 0 . 5 0 4 ( 3 . 6 0 romo I ) 及び 8 7 % Ί — ェ チルー 3 — ( 3 — ジ メ チル ァ ミ ノ プ ロ ピル ） カ ルポ ジ イ ミ ド ♦ 過塩素酸塩 1 . 1 0 8 9 ( 4 . 2 0 mmo I ) を加 え 2 時間攛拌後 、 室 温でさ ら に 4 時間攪拌 し た 。 反応終 了後、 水 3 0 id及び Ί % ク ェ ン酸水溶液 5 roSを加 え 、 析出 し た 結晶 を瀘別後 分液 し た 。 有機層 を水 2 0 、 飽和炭酸水素ナ 卜 リ ゥ ム 水溶液 2 0 及ぴ水 "1 0 ragで洗浄 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ゥ ム で乾燥後、 溶媒留去す る こ と で、 粗 B 0 c - D - □ ィ シ ン 一 L 一 パ リ ンベ ンジ ルエ ステ ルの 白色結晶 1 . 3 9 0 3 を得た 。 次いで 、 こ の粗結晶を カ ラ ム ク ロ マ 卜 グラ フ ィ 一精製 （ シ リ 力 ゲル、 齚酸ェチル ： へ キサ ン （ 5 ： 2 ) ) t る こ とで 、 白色結晶 と し て B 0 c - D - □ ィ シ ン - L 一 バ リ ン ペ ンジルエステル 1 . 2 3 3 Sf を得た 。 収率 9 7 . 8 % 。 m p 8 2 . 0 〜 8 3 . 0 。 [ α ] D
    [0254] 29
    [0255] + 3 5 . 1 。 、 [ a ] + 7 6 . 6 ° ( c 1 . 0 2 、 ク □ □ ホル厶 ） 。
    [0256] 1 hi - N M R ( C D C 1 3 )
    [0257] δ 0 . 8 5 ， 0 . 9 2 ( d , d , 3 H ， 3 H ,
    [0258] J = 7 Hz, C H 3 )
    [0259] 0 . 9 0 , 0 . 9 8 ( d , d , 3 H ， 3 H ,
    [0260] J = 2 . 7 Hz, C H ) 1 . 3 6 - 1 . 5 4 ( m , 1 0 H ,
    [0261] ) 3 C O C O , ( C H C HI - C H a a H b )
    [0262] 1 . 6 2 - 1 . 7 6 ( m , 2 H ,
    [0263] ( C H 3 ) 2 C H - C H a H b 2 . 1 4 - 2 . 2 7 ) m , 1 H , C H 3 ) C H C H )
    [0264] ο 5
    [0265] 4 . 1- 4 ( b r , Ί Η , N H C H C O N H )
    [0266] 4 . 5 7 ( d d , 1 H , J = 9 . 2 , 4 . 2 Hz, C O N H C H C O O )
    [0267] 4 . 7 9 ( b r , 1 H , N H )
    [0268] 5 . 1 3 , 5 . 1 9 ( d , d f 1 H , 1 H , J = 1 2 . 0 Hz, C H 2 P h )
    [0269] 6 . 6 8 ( b r , H , N H 〉
    [0270] 7 . 2 9 - 7 . 4 0 ( m ， 5 H , P h )
    [0271] 参考例 2
    [0272] B o c — D — 口 イ シ ン 一 L — ゾ リ ンべ ンジルエ ステルの 合成
    [0273] 参考例 1 で N ー ヒ ド Li キシ ベ ンゾ 卜 リ アゾー ルのかわ り に N — ヒ ド ロ キシ コ ハ ク 酸 イ ミ ド 0 . 6 9 3 3
    [0274] ( 6 . 0 2 mmo I ) を用 い 、 同様 に し て B o c — D — ロ イ5 シル ー L ー パ リ ン ベ ン ジルエ ステル 0 . 7 Ί 0 3 を得 た 参考例 3
    [0275] 卜 レ オ （ 2 R , 3 S ) 」 （ 2 S ， 3 R ) — 3 — ( P ^ 卜 キシベ ン ジルォキ シ カ ルボニル ） ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キ シペ ン タ ン酸の合成
    [0276] 0 卜 レ 才 （ 2 R , 3 S ) , ( 2 S , 3 R 〉 一 3 — ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キ シペ ン タ ン酸 5 . 9 9 3 ( 5 . 0 mmo I ) に S - - 4 , 6 — ジメ チル ピ リ ミ ジ ン 一 2 — ィ ルチオ ー ル カ ルポ ン 酸 P — メ 卜 キ シベ ン ジル Ί 5 . 0 7 3
    [0277] ( A 9 . 5 mmo I ) 、 水 2 5 ^、 ジ ォ キサン 2 5 ^及び 卜 リ エチル ァ ミ ン 9 . 4 5 /^ ( 6 7 . 5 mmo I ) を加 え 、 室 温で 2 4 時間攪拌 し た 。 反応終了後 、 水 6 5 ^を加え 、 酢酸ェ チル 1 で 2 回 洗浄後 、 水層を氷浴で冷 £0 し た 。 水層 に 5 N 塩酸 を加 え PH 2 に調整後 、 酢酸ェ チル で 1 回及び 3 0 で 2 回 抽 出 し た 。 油層 を 5 %塩酸 5 0 で 3 回及び飽和食塩水 で 2 回洗浄 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ウ 厶で乾燥後 、 溶媒留去す る こ と で 、 卜 レ 才 （ 2 R ， 3 S ) , ( 2 S , 3 R ) — 3 — （ P — メ 卜 キ シ ベ ンジル才キ シ カ ルポ ニル ） ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸 9 . 6 5 3 を得た 。 収率 7 2 . Ί % 。
    [0278] 原料の ト レ 才 一 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシ ペ ン タ ン 酸 は 、 光学不活性な 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シペ ン タ ン 酸を エ タ ノ ー ル一 水溶媒で溶解度差を利用 し て 卜 レ 才 体 と エ リ ス 口 体 に分割す る こ と に よ り 得 ら れる 。
    [0279] 叁考例 4
    [0280] エ リ 卜 口 （ 2 R . 3 S ) , ( 2 S , 3 R ) - 3 - ( Ρ - メ 卜 キ シ ベ ン ジル 才 キシ カ ルポ ニル ） ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ ネ シ ペ ン タ ン酸の合成
    [0281] 参考例 3 の 卜 レ オ （ 2 R , 3 S ) , ( 2 S , 3 R ) - 3 ー ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸の代わ り に エ リ 卜 □ ( 2 R , 3 S ) , ( 2 S ， 3 FO 3 - ア ミ ノ ー 2 - ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン 酸 5 . 9 9 g ( 4 5 . 0 mmo I ) を用 い 、 同様に し て エ リ 卜 口 （ 2 R . 3 S ) , ( 2 S , 3 R ) 一 3 — （ P — メ 卜 キ シ ベ ン ジル 才 キ シ カ ルボ ニル ） ア ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸 1 0 . 7 6 3 を得た 。
    [0282] 参考例 5 Z ( Q M e;) 一 < 2 R , 3 S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シペ ン タ ノ ィ ル一 D — 口 イ シルー L ー ノ リ ン べ ン ジ ルエ ステ ルの合成
    [0283] B o c — D— ロ イ シル 一 L一 ノ リ ン ベ ン ジルエ ステ ル 1 8 9 . 2 m ( 0 . 4 5 0 mmo I ) に 卜 リ フ ル才 ロ 齚酸 2 を加 え 、 室温で 4 0 分間攪拌後、 溶媒留去 し 、 さ ら に ト ルエ ン を加 え て 溶媒留去す る操作を 2 回行う こ と で 白色結晶 と して 、 D — ロ イ シル— L — ノ リ ンべ ンジル エ ステル ♦ 卜 リ フ ルオ ロ ^酸塩を得た 。 こ こ に 、 （ 2 R , 3 S ) — 3 — （ P — メ 卜 キ シ ベ ン ジル才 キ シ カ ルポニル ） ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸 1 3 3 . 8
    [0284] ( 0 . 4 5 0 mmol ) 、 N — ヒ ド ロ キシルベ ンゾ 卜 リ アゾ ー ル 9 Ί . 2 ^ ( 0 . 6 7 5 O I ) 及び D M F 2 を加 え て 溶解 し 、 氷冷下で N — メ チルモルホ リ ン 5 0 . 4
    [0285] i ( 0 . 4 5 0 mmo I ) 及び 9 7 % Ί — ェ チル — 3 — ( 3 — ジ メ チルァ ミ ノ プ ロ ピル ） カ ルポ ジ イ ミ ド ♦ 過塩 素酸塩 Ί 4 8 . 3 ^ ( 0 . 5 6 3 mmo I ) を加 え 2 時間攪 拌後、 室温でさ ら に一晩間攪拌 し た 。 反応終了後 、 反応 混合物 をジ ク ロ ロ メ タ ン で希釈 し 、 1 % ク ェ ン 酸 水溶液 、 水 Ί 0 、 飽和炭酸水素ナ 卜 リ ウ ム水溶 液 Ί 0 ¾2及び水 Ί 0 で賬次洗浄 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ウ ムで乾燥後 、 溶媒留去す る こ とで 、 油状の粗 Ζ ( 0 M e ) - ( 2 R , 3 S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シペ ン タ ノ ィ ル 一 D — π ^ シルー L ー ゾ リ ン べ ンジルエ ステ ル 3 Ί 6 . 5 を得 た 。 次いで 、 こ の粗体を カ ラ ム ク ロ マ 卜 グラ フ ィ ー精製 （ シ リ 力 ゲル 、 齚酸ェ チル ： へキサン
    [0286] ( 5 ： Ί ) ) す る こ と で 、 白色結晶 と し て Z ( 0 M e ) - （ 2 R , 3 S ) - 3 -ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シペ ン タ ノ ィ ル ー D — 口 イ シル一 L — パ リ ン べ ン ジルエステル Ί 9 7 . 6 ^を得た 。 収率 7 3 . 2 %。 mm 1 5 . 0〜 1 5 . 5 °C。
    [0287] [ α ] 05+ 4 5 . 5 ° 、 [ α ] 6 + 1 0 2 9
    [0288] ( c . 0 4 , ク ロ ロ ホルム ） 。
    [0289] 1 Η - N M R ( C D C 1 3 )
    [0290] δ 0 . 8 0 - 1 . 0 4 ( m , 1 5 H , C H 3 x 5 )
    [0291] 2
    [0292] 5
    [0293] 1 . 5 1 - 1 . 8 0 ( m , 5 H , C Η 2 x 2 , C H ( L e u ) )
    [0294] 2 . 1 9 ( m , 1 Η , C hi ( V a I ) )
    [0295] 3 . 7 0 - 3 . 8 5 ( m， 4 H , 〇 Η 3 〇 ， C Η ( Ε ΐ A h ρ ) )
    [0296] 4 . 1 2 ( d d , 1 H f J = 6 . 4 , 3 . 0 Hz
    [0297] C Η 0 Η )
    [0298] 4 . 5 2 ( d d , Ί Η , J = 8 . 4 , 4 . 8 Η 2 C H ( V a I ) )
    [0299] 4 . 4 9 ( m , 1 ト I ， C Η ( l e u ) )
    [0300] 4 . 6 1 ( b r d , Ί Η ， J = 6 . 4 Hz, 0 H )
    [0301] 4 . 9 8 ( s , 2 Η , C Η 2 - C 6 Η 4 ) 5 . 0 8 , 5 . 1 8 ( d , d , 2 Η ,
    [0302] J = 1 2 . 4 tlz, C Η 2 Ρ h ) 5 . 3 1 ( b r d , 1 H , J = 8 . 4 Hz， N H
    [0303] ( E t A h ρ ) )
    [0304] 6 . 7 9 ( b r d ， 1 H , J = 8 . 4 Hz, N H
    [0305] . ( V a I ) )
    [0306] 6 . 8 4 - 6 . 9 2 ( m , 2 H , C 6 H 4 )
    [0307] 7 . 0 7 ( b r d , 1 H , J = 8 . 4 Hz,
    [0308] N H ( L e u ) )
    [0309] 7 . 2 2 - 7 . 4 0 ( m , 7 H , C 6 H 4 ,
    [0310] P h )
    [0311] 原料 と し て 使用す る （ 2 R , 3 S ) — 3 — ( P — メ 卜 キ シベ ン ジル才 キ シ カ ルポニルア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸は 、 実施例 3で得 ら れる ス レ 才体に （ 一 ） 一 1 - ( -ナ フ チル ） ェ チルァ ミ ン を加 えて エ タ ノ ール に加熟溶解後室温で静置 し 、 析出す る結晶 を瀘取 し 、 精 製最結晶後、 0 . 5 N塩酸で酸分解 し 、 酢酸ェチルで抽 出 し 、 無水硫酸ナ ト リ ウ ムで乾燥後 、 溶媒を留去 し て 得 る こ と がでさ る 。
    [0312] 参考例 6
    [0313] B 0 c — し ー ゾ リ ル一 （ 2 R ， 3 S ) — 3 — ァ ミ ノ 2 ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル一 D — 口 シ ン 一 し ー ノ リ ン べ ンジルエ ステ ルの合成
    [0314] Z ( 0 e ) 一 ( 2 R , 3 S ) — 3 — ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キ シ ぺ ン タ ノ ィ ル ー D — ロ イ シ ン 一 L — ノ S リ ン ベ ン ジルエ ステル Ί 9 ϋ . 2 m { 0 . 3 Ί 7 mmo I ) に ァニソ ール 0 . Ί ^及ぴ 卜 リ フ ルォ ロ 酢酸 2 を加 え 、 室温で 4 0 分間攪拌後 、 溶媒留去 し 、 さ ら に ト ルエ ン 2 <!ώを加 え て 溶媒留去す る操作を 2 回行 う こ と で 白色 ァ モルフ ァ ス と し て 、 （ 2 R , 3 S ) — D — シル一 L — リ ン ベ ン ジルエ ス テル ♦ 卜 リ フ ル 才 ロ 酢酸塩 2 4 3 . 6 ^を 得た 。 こ の塩 2 1 9 . 2 fl¾( ( 0 . 2 8 5 mmol相 当 ） に B 0 c — し リ ン 6 5 . 4 ( 0 . 3 0 1 mmo I ) , Ν — ヒ ド ロ キシルベ ンゾ 卜 リ アゾ ー ル 5 8 . 1
    [0315] ( 0 . 4 3 0 mmol ) 及び D M F 2 m2を加 えて 溶解 し 、 氷 冷下 で N — メ チルモルホ リ ン 3 2 _δ ( 0 . 2 8 6 mmo I 及び 9 7 % 1 — ェ チル ー 3 — （ 3 — ジ メ チル ァ ミ ノ プ ロ ピル ） カ ルポジイ ミ ド · 過塩素酸塩 9 4 . 0
    [0316] ( 0 . 3 5 7 mmo I ) を加 え 2時 its過間攪拌後 、 室温で さ ら に一晩間攪拌 し た 。 反応終了後 、 反応混合物 をジ ク ロ ロ メ タ ン 3 0 で希釈 し 、 1 % ク ェ ン酸水溶液 Ί 0 m£、 水 1 0 、 飽和炭酸水素ナ 卜 リ ウ ム水溶液 1 0 及び水 0 で頫次洗浄 し 、 無水硫酸 ナ ト リ ウ ムで乾燥後 、 溶 媒留去す る こ とで 、 油状の粗 B o c — L - パ リ ルー （ 2 R , 3 S ) 一 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシペ ン タ ノ ィ ル 一 D — 口 イ シルー L — パ リ ン べ ン ジ ルエ ステ ル
    [0317] 5 2 0 . 8 ^を得た 。
    [0318] 次いで 、 こ の粗体を カ ラ ム ク π マ 卜 グラ フ 精製 ( シ リ 力 ゲル 、 ジ ク L] ロ メ タ ン ： メ タ ノ ー ル （ 2 4 1 ) ) す る こ とで 、 白色結晶 と し て B 0 c — L — リ ル 一 ( 2 , 3 S ) 一 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル ー- D — π イ シ ン 一 し リ ン べ ン ジルエ ス テ ル 4 9 . 7 を得た 。 収率 8 2 . 8 % , m 1 6 7 . 0
    [0319] 26 26
    [0320] 6 8 °C 。 [ α ] + 3 5 . 7 [ a ] 436 +
    [0321] 1 . 0 ° ( c 0 0 ， ク ロ 口 ホルム ） 。 H - N R ( C D C 3 ) δ 0 . 8 0 - 1 . 0 3 ( m , 2 1 H , C H 3 x 7 ) 1 . 4 ( S , 9 H ( C H 3 ) 3 C O C O ) 1 . 5 2 - 1 . 9 0 ( m , 5 H , C ト" x 2 , C H ( L e u ) ) 2 . ( m , 1 H , C H ( V a l ) ) 2 . 1 9 ( m , 1 H , C H ( V a I ) )
    [0322] 3 . 8 7 ( m， 1 H , C H N H ( E t A h p ) )
    [0323] 3 . 9 3 ( d d , 1 H , J = 5 . 8 , 5 Hz, - C H ( V a I ) )
    [0324] 4 . 1 0 ( d d , 1 H , J = 3 . 4 ， 7 . 0 Hz, C H 0 H )
    [0325] 4 . 3 6 ( m , 1 H , C H ( L e u ) ) 4 . 5 8 ( d d , H , J - 5 . 0 , 6 Hz,
    [0326] C H ( V a I ) )
    [0327] 5 . 0 9 ( b r , 1 H , N H ( V a l ) ) 5 . 0 , 5 . 2 0 ( d , d , 2 HI ,
    [0328] J = 1 2 . •2 Hz, C H 2 P h ) 5 . 3 6 ( b r , 1 H ， O H ) 6 . 9 8 ( b r d , H , J = 8 . 6 Hz, N H ( V a i ) )
    [0329] 7 . 0 4 ( b p d , 1 H , J = 8 . 4 Hz, N H ( E t A h p ) )
    [0330] 7 . 2 0 ( b r d , 1 H , J = 8 . 4 II Z ,
    [0331] N H ( L e u ) )
    [0332] 7 . 3 0 - 7 . 4 0 ( m , 5 H . P h )
    [0333] 参考例 7
    [0334] Z — L一 バ リ ルー し 一 バ リ ル ー （ 2 R ， 3 S ) — 3 — ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル一 D — 口 イ シルー L — バ リ ン ベ ン ジルエ ステルの合成
    [0335] B o c — L— ノ リ ル 一 （ 2 R , 3 S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシ ペ ン タ ノ ィ ル一 D — ロ イ シル 一 L — ノ S リ ン ベ ン ジルエ ス テ ル 1 4 5 . 0 fflg ( 0 . 2 2 8 mmo I ) に 卜 リ フ ル 才 ロ 酢酸 2 を加 え 、 室温で 4 0分間攛拌後 、 溶媒留去 し 、 さ ら に 卜 ルェ ン 2 ί ώを加 えて 溶媒留去す る 操作を 2 回行う こ とで 白色結晶 と て 、 L 一 パ リ ル ー （ 2 R . 3 S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル 一 I〕 一 口 イ シル ー し 一 パ リ ン べ ン ジル エ ス テ ル ♦ 卜 リ フ ルォ ロ K酸塩を得た 。 この塩を酢酸ェチルで Ί Ο ηώに メ ス ア ッ プ し 、 1 サン プ リ ング後の残 り を溶媒留去 し た ( 0 . 2 0 6 mmol相当 ） 。 こ こ に Z — し 一 パ リ ン
    [0336] 5 4 . S ( 0 . 2 Ί 8 mmo i ) 、 N — ヒ ド ロ キ シルベ ン ゾ 卜 リ ア ゾー ル 4 2 . 4 ( 0 . 3 Ί 4 mmo I ) 及び D M F 1 . 5 を加 え て 溶解 し 、 氷冷 で N - メ チルモルホ リ ン 2 3 ^ ( 0 . 2 0 6 0 I ) 及び 9 7 % Ί — ェ チル 一 3 — ( 3 — ジ メ チルァ ミ ノ プ ロ ピル ） カ ルポ ジ イ ミ ド * 過塩素酸塩 6 8 . 0 ( 0 . 2 5 8 mmol ) を加 え 2 時 ^l攪拌後 、 室温でさ ら に一晚攪拌 し た 。 反応終了後、 反 応混合物をジ ク ロ 口 メ タ ン Ί 5 i で希釈 し 、 Ί % ク ェ ン 酸水溶液 7 、 水 7 Βέ、 飽和炭酸水素ナ 卜 リ ウ ム水溶液 7 ^及ぴ飽和食塩水 7 ^で頫次洗浄 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ゥ ムで乾燥後、 溶媒留去す る こ とで 、 一部結晶 の ァ モル フ ァ ス と し て粗 Z — L ー バ リ ル一 L—バ リ ル一 （ 2 R ， 3 S 5 - 3 — ァ ¾ ノ - 2 - ヒ □キ シぺ ン タ ノ ィ ル ー D 一 口 イ シ ン — L ー パ リ ン ぺ ン ジルエ ステル 2 7 7 . 9 を得た 。 次いで 、 こ の粗体を ク ロ ム ク ロ マ 卜 グラ フ ィ 一
    [0337] 1 0 精製 （ シ リ 力 ゲル、 ジ ク ロ 口 メ タ ン ： メ タ ノ ー ル ( 4 0 1 ) ) す るこ とで 、 白色結晶 と し て Ζ - L一パ リ ル— L ― A リ ル 一 （ 2 R ， 3 S ) - 3 - ァ ミ ノ一. 2 - ヒ ド ロ キ シ ぺ ン タ ノ ィ ル ー D 一□ ィ シル一 L ー バ リ ン ベ ン ジルェ ステル Ί 2 5 . 9 fflSを得た 。 収率 7 9 . 7 % 。
    [0338] 、 ） + )
    [0339] 2 . 1 7 ( m , 1 H , C H ( V a l ) )
    [0340] 4 . 1 3 — 4 . 2 7 ( m , 2 H ,
    [0341] H N C H C H ( O H ) C O )
    [0342] 4 . 1 一 4 . 6 4 ( m , 4 H ,
    [0343] C H x 3 ( V a I ) ， C H ( L e u ) )
    [0344] 5 . 0 6 , 5 . 1 5 ( d , d , 2 H ,
    [0345] J = 1 2 . 0 Hz, C 0 0 C H 2 P h )
    [0346] 5 . 0 6 , 5 . 0 9 ( d , d , 2 H ,
    [0347] J = 1 2 . 0 Hz, P h C H 2 0 C H 0 )
    [0348] 5 . 4 9 ( b p s , 1 H , O H )
    [0349] 5 8 6 ( b r , H , N H ( V a l ) ) 7 〇 9 ( b r , 1 H , N H ( V a l ) ) 7 2 2 ( b r , H , N H ( E t A p ) ) 7 2 2 - 7 . 3 9 ( m , 1 0 H , P h x 2 ) 7 A 5 ( b r d , Ί H , J = 7 . 8 H z ,
    [0350] N H ( し e u ) )
    [0351] 7 . 9 4 - 8 . 2 3 ( b r ， 1 H ,
    [0352] N H ( V a I ))
    [0353] 実施 例 2
    [0354] Z — し 一 バ リ ル - パ リ ル ( 3 S ) — 3 — ア ミ ノ ー
    [0355] 2 — 才 キ ソ ペ ン タ ノ ィ ル ー D — 口 イ シ ン 一 し ー ゾ リ ン べ ン ジ ル エ ス テ ル （ 化 合物 to. 2 ) の 合 成
    [0356] Z — L — パ リ ル ー L ー ノ リ ル 一 （ 2 R , 3 S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル ー D — 口 イ シ ル ー し 一 パ リ ン ベ ン ジ ル エ ス テ ル Ί 0 8 . ^ ( 0 . 1 4 1 mmo I ) に ピ リ ジ ン • 卜 1リ フ ル才 口 酢酸塩 Ί 9 . 9 m ( 0 . 1 0 3■ I ) 、 9 7 % Λ 一 1チル— 3 — ( 3 - ジ メ チル ァ ミ ノ プ ロ ピル ) 力 ルポ ジ イ ミ ド ♦ 過塩素酸塩 1 6 . 2 ( 0 . 4 4 mmo I ) 、 D M S 0 0 . 5 及びぺ ンゼ ン 2 を加 え 、 室搵で 2 4 時間攪拌 し た 。 反 応終了後 、 反応混合物 を齚酸ェチル 1 5 で希釈 し 、 水 5 i で洗浄 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ゥ ムで乾燥後、 溶媒留去 す る こ とで 、 一部ゲル状の粗 Z 一 し 一 バ リ ル 一 し 一 パ リ ル 一 （ 3 S ) - 3 一 ア ミ ノ ー 2 一 才 キソ ペ ン タ ノ ィ ル ー
    [0357] 10 D - 口 イ シルー L 一 バ リ ン ベ ンジルェ ステ ルを得た 。 次 いで 、 こ の粗体を薄履 ク ロ マ 卜 グラ フ ィ ー （ シ リ 力 ゲル ジ ク ロ ロ メ タ ン ： メ タ ノ一ル （ 1 5 二 Ί ) ) で精製す る こ とで 、 白色結晶 と し て Z - し 一 1 リ ル ー L —パ リ ル ― *
    [0358] ( 3 S ) 3 - ァ ミ ノ ー 2 - 才キ ソ ぺ ン タ ノ ィ ル - - D -
    [0359] 15 口 イ シル ー L ー バ リ ン べ ン ジルエステル 6 3 . 2 ^を得 た 。 収率 5 8 . 6 %。
    [0360] ni 2 CM . 0〜 2 0 2 . 0 [ « ] 8 4
    [0361] 26
    [0362] [ a ] 436 + 5 0 . 3 ° ( c 0 9 0 , ク ロ 口 ホルム ） 1 Η 一 N M R ( C D C £ 3 、
    [0363] 20 δ 0 . 7 7 - . 0 4 ( m 2 7 H , C H , X 9 )
    [0364] Ί . !5 0 - 1 . 8 5 ( m 4 H , C H 2 C H ,
    [0365] C H C b )
    [0366] 2 . 0 0 ( m , 1 H , C H 3 C H a H b )
    [0367] 2 . 0 5. - 2 . 2 5 ( m , 3 H
    [0368] 25 C H X 3 ( V a I ) ) — α — 八 — s — ^ — ε 5ζ
    [0369] M
    [0370] ( ( η Θ η )
    [0371] H N ' ZH 8 ' 8 =- P ' H L ' P J q ) 8 * 1
    [0372] ( 2 x M d ' H O し ' UJ ) 0 V ' 1 - 9 2 ' L 02
    [0373] ( ( d o V ^ 3 )
    [0374] H N 'ZH Z * 8 = Γ * H I ' P J q ) 9 9 * 9
    [0375] ( ( I ¾ Λ )
    [0376] H N 'ZH し ' 6 = Γ ' H し ' P J q ) ' 9
    [0377] ( ( I B Λ ) 9
    [0378] H N ' ZH 9 * 8 = Γ ' H し ' P J q ) 6 9 * 9
    [0379] ( ( I S A )
    [0380] H N * H 9 ' 8 = Γ ' H し ' P J q ) 9 ' 9
    [0381] ( ( l o V ^ Ξ1 ) l-I O ' ZH Z ' 8
    [0382] Z ' 8 8 ί7 = Γ ' Η し ' P P P ) t7 G * Q O L
    [0383] ( d 一 I H 0
    [0384] ' H S ' P ' P ) し し ' S ' O し ' S
    [0385] ( L| d - ^ Η Ο 'ΖΗ Ο し = Γ
    [0386] ' H ' P ' P ) 9 し '
    [0387] ( ( η θ ! ) Η Ο ' ( 1 ¾ Λ ) Η Ο
    [0388] ' H Z ' oi ) S 9 ' V - L '
    [0389] ( ( I e Λ ) H 0 'ZH
    [0390] 9 8 '∑11 17 ' = 「 ' 4 し ' ） 2 ε ' t7
    [0391] ( ( Ι Β Λ ) Η Ο ' Η ' αι ) 9 0 '
    [0392] 6
    [0393] I6f00/06df/JDd S08JI/06 OAV L ー パ リ ル ） （ 化合物 No. Ί ) の合成
    [0394] Z — L — ゾ S リ ル 一 L ー ノ リ ル 一 （ 3 S ) — 3 — ァ ミ ノ 一 2 — 才 キソ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — 口 イ シルー L — ゾ リ ン ペ ンジルエステル
    [0395] 4 6 . 8 ( 0 . 0 6 1 mrao！ ) に パラ ジ ウ ム黒 6 . 6 及びメ タ ノ ー ル Ί 2 ^を加 え 、 系内を水素置換後 、 室温 で 2 0 . 5 時閻接触遠元 し た 。 触媒を瀘別後 、 瀘液を溶 媒留去す るこ とで 、 白色結晶 4 0 . O fl¾を得た 。 こ の う ち 3 9 . 7 «¾を H P L C ( カ ラ ム ： CAPCELL PAK C 1 8 、 SHISEID0社 、 2 0 X 2 5 0廳 、 溶離液 ： 1 % ク ェ ン酸 、 0 . 6 5 % K酸 カ リ ウ ム水溶液 ： ァセ 卜 二 卜 リ ル =
    [0396] 8 . 2 、 流速 ： 8 / m i n 、 検出波長 ： 2 5 4 nm ) に か け て 、 目 的物 と未反応の原料お よび一部ェ ピメ リ 化す る こ とで生成 し た L ー パ リ ル 一 L — ノ リ ル 一 （ 3 R ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シペ ン タ ノ ィ ル一 D — ロ イ シル — ヒ ー ゾ S リ ン を分離 し 、 L 一 バ リ ル ー し 一 ゾ リ ル 一 （ 3 S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル一 D — 口 イ シル ー L — パ リ ンを含む フ ラ ク シ ョ ン を分取 し た 。 こ の フ ラ ク シ ョ ンを 2 5 °Cで濃縮後 、 濂縮液を C H P 2 0樹脂 に かけ 、 水洗ののち 、 8 0 % メ タ ノ ールで溶出 し た 。 '溶出液を溶媒留去 し 、 真空 ポ ンプで一晩乾燥す る こ と で'、 類 白色粉休のポス 卜 ス タ チ ン Ί 5 . 2 を得た 。 こ のポス 卜 ス タ チ ン に は 、 N M R で C H P 2 0樹脂由来 の不純物 が認め ら れた た め 、 こ の 内 5 . を再度 C H Ρ 2 0樹脂 に おけ 、 5 5 Vol 5 メ タ ノ ー ルで溶出 し 、 溶 出 液 を溶媒留去後、 得 ら れ た 固体をデ カ ン テ ー シ ヨ ン に よ り エーテルで洗浄 し 、 真空 ポ ンプで乾燥す る こ とで 、 白色粉休の ボス 卜 ス タ チ ン 2 . 4 «3を得 た 。 収率
    [0397] 2 1 . 7 % 。 S I - M S m / z 5 4 2 ( M + Ί + ) 1 H - N R ( D M 5 0 - d 6 )
    [0398] δ 0 . 7 0 - 0 . 9 5 ( m , 2 7 H , C H 3 x 9 ) 1 . 0 - 1 . 6 7 ( m , 3 H ,
    [0399] C H ( し e u ) f C H 3 - C H a C H b )
    [0400] 1 . 6 1 ( m , 1 H , C H a H b C H ( L e u ) ) 1 . 7 6 ( m , 1 H , C H 3 C O H Π n H Π h )
    [0401] Ί . 8 6 - 2 . 1 0 ( m， 3 H , C H ( V a ) )
    [0402] 3 . 2 0 ( m , 1 H . C H ( V a I
    [0403] 4 . 0 6 ( m . 1 H C HI ( V a I
    [0404] 4 . 2 7 ( m， 1 H C H ( V a I
    [0405] 4 . 4 3 ( m , 1 H C H ( L e u
    [0406] 4 . 9 5 ( m , 1 H C H C 0 C 0
    [0407] 7 . 9 8 ( b r d 1 H , J = 8 4 Hz, N H ( V a I ) )
    [0408] 8 . 1 0 ( b r d , H , J = 8 . 9 Hz, N H ( V a I ) )
    [0409] 8 . 3 6 ( d , 1 H , J = 6 . 6 II ,
    [0410] N H ( E t A o p )
    [0411] 8 . 5 6 ( d , 1 H , J = 8 . 7 Hz,
    [0412] N H ( し e u ) )
    [0413] た だ し 、 δ 2 . 8 0 — 3 . 9 0 に水 （ ァ ミ ノ 基 、 力 ルポキ シル基を含む ） に 由 来す るブ ロ ー ド の ピ ー ク あ り 参考例 8
    [0414] Z — D — [1 イ シル — L一 ゾ リ ン t プチルエ ス ルの合
    [0415] Z - D - ロ イ シ ン Ί . 0 0 0 g ( 3 . 1 I mmo I ) 、 し 一 バ リ ン ΐ ー ブチルエ ステル ♦ 塩酸塩 0 . 7 1 9
    [0416] ( 3 . 4 3 nimo I ) 及び Ν ー ヒ ド ロ キ シルベ ンゾ 卜 リ ァ ゾ ー ル 0 . 9 2 7 3 ( 6 . 0 0 tnmo I ) を ジ ク ロ □ メ タ ン Ί
    [0417] 5
    [0418] 7 «2に溶解 し 、 水冷下で 卜 リ 2エ チルア ミ ン 0 . 5 3 0 Bli ( 3 . 7 9 nimo I ) 及び 9 7 % 1 -ェ チル - 3 - （ 3 一 ジ メ チルア ミ ノ ブ 口 ピル ） カ ルポジ イ ミ ド' ♦ 過塩素酸
    [0419] 1 . 2 6 5 9 ( 4 . 8 0 m m 0 I ) を加 え 2時間攒拌後 温でさ ら に Ί 4 時間攪拌 し た 。 反応終了 後 、 飽和炭酸水 素ナ 卜 リ ウ ム水溶液 7 Αΐβ 、 水 7 ro2、 1 %ク ェ ン酸水溶液 7 及び水 7 で頫次洗淨 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ウ ムで乾 燥後 、 溶媒留去 す る こ と で 、 油状 の粗 Z 一 D _ □ ィ シル 一 し 一 パ リ ン ΐ 一 ブチルェテル 1 . 9 3 2 3 を得た 。 次 いで 、 こ の粗結晶 を カ ラ ム ク ロ マ 卜 グラ フ ィ 一精製 ( シ リ 力 ゲル 、 ジ ク □ □ メ タ ン ： メ タ ノ ー ル ( 4 0 0 ： 3 ) ) す る こ と で 、 白色結晶 と し て Z — D - Iコ イ シ ン 一 し - パ リ ン t 一 ブチルエ ステ ル Ί . 2 6 7 g を得た 。 収率
    [0420] 28
    [0421] 8 7 . 9 %。 [ ] 436 + 6 6 . 3。 、 [ a ] +
    [0422] 3 1 1 ° ( c 1 . 0 6 , ク □ □ ホルム ) 0
    [0423] 参考例 9
    [0424] エ リ 卜 □ ( 2 R , 3 R ) ， ( 2 S , 3 S ) - Z ( 0 M e ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシペ ン タ ノ ィ ルー D — ロ イ シルー し 一 パ リ ン t — ブチルエ ステ ルの合成
    [0425] Z— D — 口 イ シル ー し 一 パ リ ン t — ブチルエ ステル 5 0 3 . 9 ^ ( 1 . Ί 9 8 mmol ) にパ ラ ジ ウ ム黒 2 Ί . 及びメ タ ノ ー ル 5 ra2を加 え 、 系内を水素置換後 、 室 温で 3 時 接触還元 し た 。 触媒を瀘別後、 瀘液を溶媒留 去す る こ とで 、 油状の D — 口 イ シル ー L — ノ リ ン t — ブ チルエ ステルを得た 。 こ こ に 、 エ リ 卜 口 （ 2 R , 3 R ) ， ( 2 S , 3 S ) - 3 - ( P — メ 卜 キ シ ベ ンジル才 キシ カ ルポニル ） ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸
    [0426] 3 9 1 . 8 as ( 1 . 3 8 mrao I ) 、 N — ヒ ド ロ キシルベ ンゾ 卜 リ アゾ ール 3 2 4 . Λ m { 2 . 3 9 9 mmo I ) 及び ジ ク ロ ロ メ タ ン 8 ηιδを加えて 溶解 し 、 氷冷下で 9 7 % 1 ー ェ チル ー 3 — ( 3 — ジ メ チル ァ ミ ノ プ ロ ピル ） カ ルボ ジイ ミ ド ♦ 過塩素酸塩 4 4 2 . Λ { Λ . 6 7 7 mmol ) を加 え 2時間攒拌後 、 室温でさ ら に一晩間攪拌 し た 。 反 応終了後 、 反応混合物 を飽和炭酸水素ナ 卜 リ ウ ム水溶液 8 、 水 8 /ιώ、 1 % ク ェ ン酸水溶液 8 ^及び水 8 で願 次洗浄 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ウ ムで乾燥後 、 溶媒留去す る こ と で 、 ァ メ 状の粗エ リ 卜 □ ( 2 R , 3 R ) , ( 2 S , 3 S ) - Ζ ( 0 e ) — 3 — ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロ キシ ぺ ン タ ノ ィ ル ー D — 口 イ シル ー し 一 バ リ ン t 一 ブ チルエス テ ル 7 2 8 . 1 ^を得た 。 次いで 、 こ の粗体を カ ラ ム ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ 一精製 （ シ リ カ ゲル 、 ジ ク ロ ロ メ タ ン ： メ タ ノ ー ル （ Ί 0 0 : Ί ) ) す る こ と で 、 ア モルフ ァ ス 固体 と し て エ リ 卜 ci ( 2 R , 3 R ) , ( 2 S , 3 S ) - Z ( 0 M e ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシペ ン タ ノ ィ ル ー D — 口 イ シル ー し 一 ノ リ ン t 一 プ チルエ ステル 6 6 6 , 9 «¾を得た 。 収率 9 8 . 4 %。 S I — M S m / z 5 6 6 ( Μ + Ί + ) 。
    [0427] 参考例 Ί 0
    [0428] Ζ — L — フ エ 二ルァ ラ ニル — （ 2 R S , 3 R S ) - 3 - ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シペ ン タ ノ ィ ル 一 D — 口 イ シルー L — パ リ ン. t — プチルエ ステ ルの合成
    [0429] エ リ 卜 口 （ 2 R ， 3 R ) , ( 2 S , 3 S ) - Z
    [0430] ( 0 M e ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — 口 イ シルー L 一 ^ リ ン t 一 ブチルエステ ル
    [0431] 3 4 0 . 9 ( 0 . 6 0 3 mmol ) を メ タ ノ ール に 溶 解 し 、 パラ ジ ウ ム黒 5 0 . 7 <«3を 3 回 に分 けて 、 数時 ϋ ご と に加 え 、 水素雰 ϋ気中 、 室温で 3 2時間接触還元 し た 。 触媒を瀘別後 、 瀘液を溶媒留去す る こ とで 、 エ リ 卜 □ ( 2 R ， 3 R ) ， （ 2 S ， 3 S ) — 3 - ア ミ ノ ー 2 ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — 口 イ シルー Lー ノ リ ン t 一 ブチルエ ステルを得た 。 こ の う ち の半分量 に Z ·- L — フ エ 二ルァ ラ ニ ン 1 0 0 . 8 ^ ( 0 . 3 3 7 mmol ) 、 N ー ヒ ド ロ キ シ ベ ンゾ 卜 リ アゾー ル 8 Ί . 9
    [0432] ( 0 . 6 0 6 0 I ) 及びジ ク 匚 I 口 メ タ ン 0 を加 えて 、 氷冷下で 9 7 % Ί — ェ チル — 3 — （ 3 — ジ メ チルァ ミ ノ プ 口 ピル ） 力 ルポシ イ ミ ド ♦ 過塩素酸塩 Ί Ί Ί . 3
    [0433] ( 0 4 2 2 Ri ol ) を加 え 2 時 攪拌後 、 室温でさ ら に 1 8 時間攪拌 し た 。 D M F 2 . 0 «ώを追加 し さ ら に
    [0434] 2 2 . 5 時間搜拌後 、 反応混合物 を飽和炭酸水素ナ 卜 リ ゥ ム水溶液 9 «ώ、 水 9 βώ、 Ί % ク ェ ン酸水溶液 9 ^及び 水 9 で頤次洗浄 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ウ 厶で乾燥後 、 溶 媒留去す る こ とで 、 油状の粗 Ζ — L — フ エ ニルァ ラ ニル - ( 2 R S , 3 R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ぺ ン タ ノ ィ ルー D — 口 イ シル ー L — ノ リ ン t 一 ブチルエ ス テ ル 2 5 5 . 6 ^を得た 。 こ の粗体 は 、 精製す る こ と無 く 次の反応に 用 いた 。
    [0435] 実施例 4
    [0436] Z — L 一 フ エ 二ルァ ラ 二ル ー. （ R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 一 才キ ソ ペ ン タ ノ ィ ル ー D — ロ イ シル一 L ー ノ リ ン t — ブチルエ ステル （ 化合物 Να 3 ) の合成
    [0437] 参考例 Ί 0で得 ら れた粗 Ζ — し — フ I 二ルァラ 二ル ー ( 2 R S , 3 R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル _ D — 口 イ シル ー L 一 パ リ ン ベ ン ジ ルエ ステ ル L 一 パ リ ン べ ン ジルエ ステル 2 5 5 . 6 ^に ピ リ ジ ン ♦ ト リ フ ル才 ロ 酢酸塩 2 5 . Q ( 0 . 1 3 4 mmot ) 、 9 了 ％ 1 — ェ チル 一 3 — （ 3 - ジ メ チル ア ミ ノ ア 口 ピル ） カ ルポ ジ イ ミ ド ♦ 過塩素酸塩 2 Ί Ί . 6 fl¾ ( 0 . 8 0 3 m m 0 I ) 、 D S 0 0 . 6 5 及び 卜 ルェ ン 2 を加 え 、 室温で 2 0 時間攪拌 し た 。 反応終了後、 黄色の反応混合 物 を酢酸ェ チル 6 . 5 で希釈 し 、 水 7 で 洗浄 し 、 無 水硫酸ナ ト リ ウ ムで乾燥後 、 溶媒 ¾去す る こ とで 、 ァ モ ル フ ァ ス Κ体の Ζ — し 一 フ X 二ルァ ラ ニル 一 （ R S ) -- 3 — ァ ミ ノ - 2 一 才 キ ソ ペ ン タ ノ ィ ル ー D — 口 イ シル ー
    [0438] L - バ リ ン t 一 プチルェ ス テル 2 4 4 , 4 ^を得た 。 次 いで 、 こ の粗体を カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （ シ リ カ ゲ ル、 ジ ク ロ ロ メ タ ン ： メ タ ノ ー ル （ 1 0 0 ： Ί ) ) で精 製する こ とで 、 ァ モルフ ァ ス固体の Z — L ー フ ： πニルァ ラ ニル - ( R S ) - 3 - ア ミ ノ ー 2 — 才 キソ ペ ン タ ノ ィ ル — D 一 Li イ シルー L - -パ リ ン t 一 ブチルエ ステル Ί 1 3 . 7 i を得た 。 収率 6 3 . 5 %。 S I — M S m
    [0439] 5
    [0440] / z 6 8 Ί ( M + Ί + ) 6 実施例 5
    [0441] Z —丄 — フ ェ 二ルァ ラニル一 （ R S ) — 3 — ァ ミ ノ 一 2 才 キ ソ ペ ン タ ノ ィ ルー D — 口 イ シルー丄 ー パ リ „( 化 合物 No.4 _) の合
    [0442] Z - し - フ エ 二ル ァ ラ 二ル ー （ R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 - 才 キソ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — ロ イ シル 一 L — ノ リ ン t ー ブヲ ルエ ステル Ί 0 5 . 9 （ 0 . Ί 5 6 mmcH ) に 卜 リ フ ル才 口 酢酸 2 を加 え 、 室温で 9 0分間攪拌後、 溶 媒留去 し 、 さ ら に ト ルエ ン 2 ^を加 えて溶媒留去す る操 作を 2回行う こ とで ア モルフ ァ ス固体 と し て 、 Ζ — L — フ エ 二 ル ァ ラ 二ル 一 （ R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才 キ ソ ペ ン タ ノ ィ ルー D — 口 イ シル ー し 一 パ リ ン 1 0 6 . 5 を得た 。 次いで 、 こ の 1体を カ ラ ム ク [』 マ 卜 グラ フ ィ ー 精製 （ し H - 2 0 、 メ タ ノ ー ル ） す る こ と で 、 ァ モル フ ァ ス 休 白色結晶 と して Z — L一 フ エ 二ルァ ラ ニ ル一 ( R S ) 一 3 —ア ミ ノ ー 2 — ォ キソ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — ロ イ シル - - L一 パ リ ン 7 0 . 5 ffl を得た 。 収率 7 2 . 6 %。 S I - M S m / z 6 2 5 ( Μ + Ί + ) 、 6 4 7 ( Μ 4 N a + ) 。
    [0443] 参考例 Ί Ί
    [0444] Ζ ( 0 e ) - ( 2 R S , 3 R S ) - 3 - ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — ロ イ シ ン t — ブザ ルエ ス テルの合成
    [0445] D — 口 イ シ ン t — プチルエ ステル ♦ 塩酸塩 0 . 8 9 6 ^ ( 4 . 0 0 mmol ) に （ 2 R S , 3 R S ) - 3 — ( P — メ 卜 キ シ ベ ン ジル才 キ シ カ ルポ ニル ） ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸 Ί . 3 0 9 3 ( 4 . 4 0 mmo I ) 、 N - ヒ ド ロ キ シルベ ンゾ 卜 リ ア ゾ ー ル 1 . 0 8 ( 8 . 0 0 mmo I ) 及び ジ ク ロ ロ メ タ ン 2 0 を加 えて 、 氷冷下で 卜 リ エ チルァ ミ ン 0 . 6 2 rag ( 4 . 4 3 mmo I ) 及び 9 7 % 1 ー ェ チル ー 3 ·- ( 3 — ジ メ チルァ ミ ノ プ ロ ピル ） 力 ルポ ジ イ ミ ド ♦ 過塩素酸塩 Ί . 4 7 6 & ( 5 . 6 0 mmol ) を加 え 2 時間攪拌後 、 室温 でさ ら に Ί 5 時間攪拌 し た 。 反応終了後 、 反応混合物を飽和炭酸水素ナ ト リ ウ ム水溶 液 8 ra£、 水 8 ηιβ、 Ί % ク ェ ン酸水溶液 8 及び水 8 で 頫次洗浄 し 、 無水硫酸ナ ト リ ウ ムで乾燥後 、 溶媒留去す る こ と で 、 ァ メ 状 の粗 Ζ ( 0 M e ) ― ( 2 R S , 3 R S ) 一 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシペ ン タ ノ ィ ル一 D — ロ イ シ ン t 一 ブチルエ ス テ ル 2 . 1 2 2 3 を得た 。 次 いで 、 こ の粗 休を カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー精製 （ シ リ カ ゲル 、 ジ ク ロ ロ メ タ ン ： メ タ ノ ー ル （ Ί 0 0 ： Ί ) ) す る こ と で 、 白色結晶 と し て Z ( 〇 M e ) — ( 2 R S , 3 R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — ロ イ シ ン t 一 ブチルエ ス テル Ί . 8 5 8 2 を得た 。 収率
    [0446] 9 9 . 6 %。 S I - M S m Z z 4 6 7 ( M + 1 + ) 。 参考例 Ί 2
    [0447] B o c — し ー ノ リ ル一 （ 2 R S , 3 R S ) 一 3 — ァ ミ ノ - 2 — ヒ ド ロ キシ ペ ン タ ノ ィ ルー D -- ロ イ シ ン t ー ブチ ルエ ステルの合成
    [0448] エ リ 卜 口 （ 2 R ， 3 R ) , ( 2 S , 3 S ) - 2 ( 0 M e ) 一 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ルー. D — ロ イ シ ン t —プチルエ ステル 3 0 3 . 9
    [0449] ( 0；. 6 5 1 ramo I〉 を メ タ ノ ー ル 4 に 溶解 し 、 ノ ラ ジ ゥム黒 4 3 . 4 ^を 3 回 に分け て 、 数時間 ご と に加え 、 水素棼囲気中 、 室温で Ί 5 時間接触還元 し た 。 触媒を瀘 別後 、 瀘液を溶媒留去す る こ とで 、 エ リ 卜 n ( 2 R ， 3 R ) ( 2 S , 3 S ) — 3 — ァ ミ ノ -— 2 — ヒ ド ロ キ シ ぺ ン タ ノ ィ ル ー D — 口 イ シ ン t 一 ブチルエ ス テ ルを得た 。 こ こ に B o c — L — パ リ ン Ί 5 5 . 9 （ 0 . 7 8 mmo I ) 、 N -- ヒ ド ロ キ シルベ ンゾ 卜 リ ァゾ一 ル
    [0450] 1 7 6 . 1 «¾f ( 1 . 3 0 3 mmol ) 及び ジ ク □ □ メ タ ン 3 . 5 を加 え て 、 水冷下で Ί 一 ェ チル — 3 - ( 3 — ジ メ チ ルァ ミ ノ プ ロ ピル ） カ ルポ ジ イ ミ ド ♦ 塩酸塩 4 9 9 . 4 ( 2 . 6 0 5 ramo! ) を加 え 2 時 攪拌後 、 室温でさ ら に T 6 . 5時間攒拌 し た 。 反応混合物 に ジ ク ロ ロ メ タ ン 7 idを加え て希釈後 、 Ί % ク ェ ン酸水溶液 6 flifi、 水 6 / 、 飽和炭酸水素ナ 卜 リ ゥ ム水溶液 及び水 で順次洗 淨 し 、 無水硫酸ナ ト リ ウ ムで乾燥後 、 溶媒留去す る こ と で 、 ア モルフ ァ ス状の粗 B o c — L ー ノ リ ル 一 （ 2 R S 3 R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル ー D - 口 イ シ ン t 一 ブチル エ ス テル を得た 。 こ の粗休 は 、 精製す る こ と な く 次の反応 に 用 いた 。
    [0451] 実施例 6
    [0452] B o c — し 一 バ リ ルー （ R S ) — 3 — ァ ミ ノ 一 2 — ォ キ ソ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — 口 イ シル t — ブチルエ ステ ル （ 化 合物 No. 5 ) の合成
    [0453] B o c — L — ノ J ルー （ 2 R S , 3 R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — 口 イ シル ！； 一 ァ チ ル エ ス テ ル 0 . 6 5 Ί mmo Iに ピ リ ジ ン ♦ 卜 リ フ ル 才 匚 ι 酢酸塩 6 9 . ( 0 . 3 6 0 mmoに） 、 ジ シ ク ロ へ キ シ ル カ ルポ ジイ ミ ド 4 ◦ 8 . 8 ^ ( 1 . 9 8 2 mmo I ) 、 D M S 0 Ί . 3 及び ト ル エ ン 2 . 5 ^を加 え 、 室温 で 1 8 時間攪拌 し た 。 反応終了後 、 黄色の 反応混合物 を 酢 酸ェ チル 1 0 で希釈 し 、 生成 し た ジ シ ク ロ へ キ シル ウ レ ァ を濾別 し た 。 有機窿 を水 Ί 0 で洗浄 し 、 無水硫 酸ナ 卜 リ ウ ムで乾燥後 、 溶媒留 去 し た 。 得 ら れ た 油状物 に び酢酸ェ チル 5 を加 え 、 析出 し た ジ シ ク ロ へ キ シ ル ウ レ ァ を瀘別 し 、 濾液を溶媒留 去 す る こ とで粗 B 0 c — L 一 バ リ ル ー （ R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才 キ ソ ペ ン タ ノ ィ ル ー D — ロ イ シ ル — ァ チ ル エ ス テ ル 一 L — ノ リ ン ベ ン ジ ル エ ステ ルを得 た 。 次いで 、 こ の粗体を カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （ シ リ カ ゲル 、 ①ジ ク ロ ロ メ タ ン ： メ タ ノ ール （ Ί Ο Ο : 1 ) 、 ②ジ ク ロ ロ メ タ ン ： 齚酸ェ チル （ Ί 2 ： Ί 〜 1 0 ： Ί ) で精製す る こ と で 、 白色結 晶 と し て B o c — L ー バ リ ル一 （ R S ) — 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才 キソ ペ ン タ ノ ィ ル 一 D — 口 イ シル t 一 プチルエ ス テ ル 1 7 8 . 9 β¾を得た 。 S I — M S m / ζ 5 3 4 ( M + 「十 ） 。
    [0454] 参考例 Ί 3
    [0455] ( 2 R , 3 S ) 一 3 — （ 9 — フ.ルォ レニルメ チル才 キシ 力 ルポニル ） ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシペ ン タ ン酸の合成
    [0456] ( 2 R , 3 S ) - 3 一 ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン 夕 ン 酸 0 . 7 5 9 3 ( 5 . 7 0 m m 0 I ) に 、 炭酸水素ナ 卜 リ ゥム Ί . 1 9 9 ？ ( 1 A . 2 8 mmo I ) を水 2 0 ^ に溶解 し た 水溶液及びジ ォ キサ ン 2 0 を加 え 、 氷冷下で ク ロ □ ギ酸 9 ー フ ル才 レニルメ チル Ί . 6 2 3 ^ ( 6 . 2 7 mtno I ) を ジ 才 キサ ン Ί 0 に 溶解 し た 液 を 3 0分で滴下 し た 。 滴下終了後も室温で 2 時間攪拌 し た の ち 、 反応液 に 水 Ί 0 0 i を加 え希釈 し 、 エ ー テル Ί 0 i 及び 7 5 i で 1 II o洗浄 し た 。 水層 に 6 N 塩酸 2 . 8 を加 え pH 1 . 5 に 調整後 、 酢酸 ェ チル 5 0 で 3 回抽出 し た 。 油 M を飽和食塩水 5 〇 で洗浄 し 、 無水硫酸ナ 卜 リ ウ ム で乾燥後、 溶媒留去 す る こ と で 、 粗 （ 2 ， 3 S ) - 3 - ( 9 一 フ ル レニルメ チ ル ォ キ シ カ ルボ二 ル ） ア ミ ノ ー 2 - ヒ ド 口 キ シ ペ ン タ ン 酸 1 . 6 2 2 3 を得た 。 こ の粗 体 に 酢酸ェ チル 4 及 び η — へ キサン 4 i を加 え結晶化 さ せ た後 、 結晶 を瀘別 し 、 齚酸ェ チル ー π ー ぺ キサ ン ( 1 : 1 ) 溶液 2 で洗浄後 、 乾燥す る こ とで 白色固体 の （ 2 R , 3 S ) - 3 - ( 9 — フ ル 才 レ ニル メ チルォ キ シ 力 ルポ 二ル ） ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド、 口 キシぺ ン タ ン酸 0 . 9 9 9 S を得た 。 m P Ί 6 0 〜 Ί 6 1 . 5 V 。 次い で 、 こ の N - 保護ァ ミ ノ 酸 0 . 9 9 9 3 に 齚酸ェ チル 4 を加 え 、 浴温 5 0 °Cで懸濁 し な が ら 4 0 分 間攪拌 し た の ち n — ぺキサン 4 を加 え結晶 を瀘取 し た 。 結晶を酢 酸 ェ チル - n - へ キサ ン ( 1 : 1 ) 溶液 2 idで洗浄後、 乾燥す る こ とで 白色結晶 の （ 2 R ， 3 S ) 一 3 - ( 9 一 フ ル 才 レ二 レメ チル 才 キ シ 力 ルポ 二ル ） ァ ミ ノ ー 2 - ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸 0 . 8 6 6 g を得た 。 再結晶収率
    [0457] 26
    [0458] 8 6 . 7 % 。 [ ] 3 0 . 2 ° 、 [
    [0459] 」 436
    [0460] 6 3 . 0 0 ( c 1 . 0 1 ， メ タ ノ ー ル ） 。 m p 1 6 2 1 6 2 . 5 °C 。 F A B - M S m / z 3 5 6
    [0461] ( + 1 + ) 。 H - N R ( C D C £ 3 〉
    [0462] δ 0 . 9 6 ( d d , 3 H , J = 7 4 ， 7 . 4 Hz,
    [0463] C Η 3 )
    [0464] Ί . 6 9 ( m ， 2 H , C H 2 )
    [0465] 3 . 2 5 ( b r , C O 〇 H ， 0 H )
    [0466] A . 0 1 ( m , 1 H , C H N H )
    [0467] 4 . 1 8 ( d d , H , J = 6 . 6 ， 6 . 6 Hz,
    [0468] A r、 C H A r )
    [0469] A . 2 4 ( b r s , 1 H , C H 0 H ) 4 . 4 0 , 4 . 4 1 ( d ( d , H , 1 H ,
    [0470] J = 6 . 6 , 6 . 6 Hz, A r C - H C H rつ H b )
    [0471] 5 ， 3 ( d , 1 H , J = 9 . 6 Hz, N H )
    [0472] 7 . 2 0 — 7 . 8 0 ( m , 8 H , A r )
    [0473] 一方 、 先の結晶化瀘液及び洗液を溶媒留去する こ とで 得 ら れた ァ モルフ ァ ス 0 . 5 4 8 3 を カ ラ ム ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ 製 （ シ リ カ ゲル、 ク ロ 口 ホルム ： メ タ ノ ー ル 齚酸 ( 9 5 ： 5 ： Ί ) ) す る こ とで 、 白色固体 と して ( 2 R， 3 S ) 一 3 — （ 9 一 フ ル 才 レ ニルメ チル 才 キシ 力 ルポ二ル ) ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ペ ン タ ン酸
    [0474] 0 . 3 0 7 g を得た 。
    [0475] 参考例 1 4
    [0476] B 0 c -. し V a し -- V a し 一 3 — ァ ミ ノ 2 ヒ ド □ キ シ ペ ン タ ノ—ィ ル—— D—— L e u - L - V a 樹 脂の合
    [0477] F m o c — L ー ゾ リ ル 一 ロ ー ア ル コ キ シ ベ ン ジ ル ア ル コ ー ル樹脂 〇 . 5 3 ( 0 . 3 4 5 mmo Iのパ リ ン を含む ）
    [0478] ( 渡辺化学か ら 購入 ） をジ メ チルフ オ ルム ア ミ ド （ 3 X 6 X Ί 分 ） 中で膨潤さ せ た 。
    [0479] 次 いで 2 0 % ピぺ リ ジ ン / D M F 6 加 え 3分間攪拌 し 、 廃液後周様 に ピぺ リ ジ ン処理を 2 回 （ 2回 目 は 3分 3 回 目 は 2 0分攪拌 ） 裰 り 返 し た 。 廃液後 、 D M F ( 3 X 6 me X Ί 分 ） で洗 っ た 。 次いで N — メ チル ピ ロ リ ド ン
    [0480] ( 3 X 6 X Ί 分 ） で洗 っ た 。 次いで 、 F m 0 c — D — L e u 3 6 6 ^ ( 3当 ® ) 、 H 0 B t 1 4 0 fl¾ ( 3 当 量 ） 、 ジ イ ソ プ ロ ピル カ ルポ ジ イ ミ ド 0 . 2 6 5 ( 3 当量 ） を 6 の N — メ チル ピ ロ リ ド ン に 溶解 し て 加 え 3 時間攪拌 し た 。 廃液後 N — メ -ブ ル ピ ロ リ ド ン （ 3 X 6 Χ 1分 ） で洗い 、 排液後 、 D M F 分 ） で 洗 っ た 。
    [0481] 次いで 、 上記の よ う な ピベ リ ジ ン脱保護を行い 、 F m 0 c — 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キ シ ー ペ ン タ ン酸 3 6 8 ^、 H 0 B t 1 0 ^ , ジ イ ソ プ ロ ピル カ ルボ ジ ィ ミ ド 0 . 2 6 5 ( 3当 - ) を 6 の N — メ チル ピ ロ リ ド ン に 溶解 し て加 え 3 時間攪拌 し た 。 以下同様 に 洗浄 、 ピぺ リ ジ ン脱保護 、 洗浄の後 ^様 に F m 0 c — L — V a I ( 3 5 1 *«3 ) ^ B o c - L - V a I { 2 2 ) を縮合 し た 。
    [0482] 参考例 Ί 5
    [0483] B o o - L, - V a l - L - V a l 一 l— 一 3 — ア ミ ノ ー 2 — ヒ ド ロ キシ ペ ン タ ノ ィ ル一 D — L e u — L — V a I 樹 脂の酸化
    [0484] 上記の樹脂を D M Fで洗浄後 （ 3 x 6 ^ x 1 分 ） D M S 0で洗浄 （ 3 X 6 X 1 分 ） し 、 次 いで ピ リ ジ ン 一 卜 リ フ ルォ ロ 酢酸塩 Ί 2 5 、 無水酢酸 Ί 2 5 を 6 の D M S 〇 に 溶解 し て 加 え 、 Ί 8 時間攛袢 し た 。 廃液後 D S 0 ( 3 Χ 6 Χ Ί 分 〉 、 D M F ( 3 Χ 6 Χ Ί 分 ） メ タ ノ ー ル （ 3 X 6 /ϊώ X Ί 分 ） で賊次洗浄後、 真空下で 2 時間乾燥 し た 。
    [0485] 実施例 7 ボス 卜 ス タ ヲ ( L - V a I - L V a L - 3 ァ ミ ノ ー 2 — 才キ ソ ペ ン タ ノ ィ ルー D ——L e u — L
    [0486] V a に（ 化合物 No. 1 ) の 合
    [0487] 上記参考例 1 5 の乾燥樹脂を T F A ： フ エ ノ ール 9 5 5 ( 2 X 6 id ) で処理 し た 。 こ の処理か ら得 ら れた 溶液 を真空蒸発さ せ 、 残留物 を メ タ ノ ール 3 に 溶解 し 、 メ タ ノ ールで膨潤 さ せ た セ フ ア デ ッ ク ス L H - 2 0 ( 3 0 0 ) の カ ラ ム にそそ い だ 。 メ タ ノ ー ルで展開 し 、 最初 に 溶出 する U V吸収を示 す分画を集め真空蒸発さ せ た 。 得 ら れた残留物 Ί 3 Q ^を n — ブタ ノ ー ル、 H酸 、 水 1 0 0 : 1 ： Ί 0 0 の混合物 の上雇 Ί と下層 1 に 溶解 し 、 三鬼エ ン ジニ ア リ ン グ社製遠心向流ク π マ 卜 グラ フ 装置 に かけ下層 を移動相 と し て ク ロ マ 卜 グラ フ を行 っ た U V吸収を示す分画 を集め真空蒸発さ せ る と 襟 m化 台物 の無色粉末 8 2 . 9 が得 ら れた 。
    [0488] 実施例 8
    [0489] し 一 パ リ ル L — プ ロ リ ル一 3 — ァ ミ ノ 一 2 — 才 キ ソ ぺ ン タ ノ ィ ルー D — 口 イ シ ル一 L — リ ン （ 化合物 No. 6 ) の合成
    [0490] 参； ·例 Ί 4 Ί 5 、 実施例 7 と 同様 に 0 . 5 3 の F m 0 c 一 L ー パ リ ル樹脂 を 出発原料 と し 、 3 倍当 ®の F m 0 c 一 ア ミ ノ 酸を 次縮合後 、 酸化 、 脱保護を す る こ と に よ り 、 し リ ル 一 し 一 プ ロ リ ル 一 3 — 7 ミ ノ ー 2 一 才キ ソ ペ ン タ ノ ィ ル ー D — 口 イ シ ン 一 L リ ン 1 2 : 4 , 6 を 得 た 。 実施例 9
    [0491] フ エ ニルブ タ ノ ィ ル一 L — ノ リ ル一 し 一 プ ロ リ ル 一 3二 ア ミ ノ ー 2 — 才 キソ ペ ン タ ノ ィ ル一 D — 口 イ シル 一 し — パ リ ン （ 化合物 No.7 ) の合成
    [0492] 実施例 8で得た L — ノ リ ル 一 L— プ ロ リ ル一 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才 キソ ペ ン タ ノ ィ ル ー D — ロ イ シ ン 一 L 一 ノ リ ン 2 3 . 6 ^を メ タ ノ ー ル 2 ^に溶解 し 4 ー フ I ニルブ タ ン酸無水物 3 0 fl¾の塩化 メ チ レ ン溶液 Ί と 卜 リ エ チ ルァ ミ ン 0 . 0 5 0 を加 えて 室温 1 時間攪拌 し た 。 反 応液を齚酸で酸性 に し 、 メ タ ノ 〜ルで充旗 し た セ フ ア デ ッ ク ス L H 2 0の カ ラ ム （ 3 0 0 «ώ ) を用 いて 精製 し 、 2 0 . 9 ^の フ エ ニル ダ タ ノ ィ ル 一 L ー ノ リ ル一 L — プ 口 リ ル一 3 — ア ミ ノ ー 2 — 才 キ ソ ペ ン タ ノ ィ ルー D — 口 イ シル ー し 一 パ リ ン を得た 。
    [0493] 実施例 1 0
    [0494] 阆様 に し て第 2表 に示 し た各種の ボス 卜 ス タ ン類緣化 合物 を合成 し た 。 即ち 、 第 2表中 の化合物 No.8 — 1 7 ， 2 2及び 2 4 — 2 6 は 、 そ れぞれ対応す る原料化合物 を 用 い て 、 参考例 Ί 4 及び Ί 5並び に実施例 7 の方法 に準 じ て 合成 し た 。
    [0495] 化合物 No. Ί 8 — 2 Ί は 、 参考例 Ί 4及び Ί 5並び に 実 施例 7 — 9 の方法 に 準 じ て 合成 し た 。
    [0496] 化合物 No.2 7 は参考例 Ί 一- 7 及び実施例 2 の方法 に準 じ て 合成 し た 。
    [0497] 以上の如 く して 合 成さ れた 化合物 の物 ¾ 値は第 2表 に 示 し た 。
    [0498] 試験例 1
    [0499] 抗プ ロ リ ルエ ン ドべプチダーゼ活性の測定
    [0500] 抗プ ロ リ ルェ ン ド ぺプチダ 一ゼ活性は Yosli i moto ら の 方法 [ ( Bioc im. Piophys. Acta) 5 6 9巻、 Ί 8 4 — 1 9 2頁 （ Ί 9 7 9 ) ] の改良法で行 っ た 。 即ち 、 試験 官 に 4 0 % の ジ 才キサ ン を含む 0 . 5 mMの N — ベ ン ジル 才キ シ カ ルボニル一 L ー グ リ シルー L— プ ロ リ ル— /3 — ナ フ チルア ミ ド 0 . 2 、 0 . 0 5 M 卜 リ ス 〜 塩酸緩衝 液 （ PH7 . 8 ) 0 . 、 検体を含む水溶液 0 . 2 5 «ώ を加 え た 混合溶液を 3 7 °C、 3分間加温 し た後 、 Ko i da , Wa erら の [ J. Biol. Chem. ] 2 5 1 巻 、 7 5 9 3 — 7 5 9 9頁 （ 1 9 7 6 ) に 記載の方法の改良法 に よ る酵素 の精製法で 、 ブ タ の 腎藏か ら硫酸 ア ンモ ニ ゥ ム に よ る分 画、 D E A E — セ フ デ ッ ク ス A — 5 0 カ ラ ム ク ロ マ 卜 グラ フ ィ 一 に よ り 精製 し たプ π リ ル 1 ン ドぺプチダー ゼ 溶液 0 . 0 5 を加 えて 、 3 7 度で 3 0分間反応さ せた 。 反応後、 ツ イ ー ン （ Tween- 2 0 ) を 1 0 %、 フ ァ ー ス ト ガ ー ネ ッ ト G B C塩を 0 . 1 %含む Ί M酢酸ナ ト リ ウ ム 緩衝液 （ PH 4 . 2 ) 1 を加 え 、 室温 に Ί 5分放置後に 、 5 2 5 nmに お け る吸光度 （ a ) を測定 し た 。 ίί¾時 に検体 を含ま な い緩衝液の みを 用 いた 窗検反応液の吸光度 （ b ) を測定 し 、 +プ ロ リ ルエ ン ド ぺプチダ 一ゼ 阻害率を
    [0501] [ ( b - a ) / b ] x 1 0 0の式 よ り 計算 し た 。 結果 は 第 2 表 に 示 し た 。 試験例 2
    [0502] 抗エ ラ ス タ ーゼ 阻害活性及び抗 カ テブシ ン B 阻害活性 の測定
    [0503] 抗ェラ タ ーゼ ffl害活性 は Humf ord, R. A.ら の方法
    [0504] [ J. Biol . Chem. 2 2 5 巻 、 2 2 2 7 頁 （ 1 9 8 0 ) ] 、 抗 カ テブシ ン B 阻害活性 は Knigtu, C. G. の方法
    [0505] [ B i ochem. J. 1 8 9 巻 、 4 4 7 — 4.5 3 貞
    [0506] ( 1 9 8 0 ) ] に よ っ て 測定 し た 。 結果 は第 2 表 に示 し た 。
    [0507] 実施例 Ί 1
    [0508] ポ ス 卜 ス タ チン錠剤 の製造
    [0509] ボ ス 卜 スタ チン 3 0 重 1 [部 、 結晶乳糖 Ί 2 0部、 結晶 セ ル ロ ー ス Ί 4 7 部及ぴス テ ア リ ン酸マ グネ シ ウ ム 3 部 を V型混合機で打錠 し 、 1 錠 3 0 0 ^の錠剤 を得た 。
    [0510]
    [0511] ¾ 2 表（続き）
    [0512] 表中の略¾はそれぞれ以下の意味を有する。
    [0513] Rf1, f2 -TIC, reverse Phasc( P-18), KOAc 5%--クェン陂 1 :MeCt^65:35
    [0514] I 3 = (；，シリカゲルト, H )H:AcOH:ll20 =4:1:1
    [0515] f4 =TLC,シリカゲル l:,CHCI3 ： HeOH:AcOH=90:10;5
    [0516] PCt プ リルエンドべプチダ―ゼ阻害沾性， IC50 (ug/ id)
    [0517] tlast =~-ェラスタ一ゼ IC50 ( /mi)
    [0518] Cai:-B =カテブシン I3 活性， IC50 (Lig/ )
    [0519] 産業上の利用 可能 本発明で提供さ れる ポス 卜 ス タ チン お よびそ の類縁化 合物も し く はそれ ら の塩 は強力 なエ ン ド ぺ プチダ ー ゼ阻 ¾-活性を有す る 。 従 っ て 、 例 え ば抗健忘症治療剤 、 あ る い は全身性エ リ テマ 卜一デスな ど の 自 免疫疾患治療剤 と し て 有用 で ある 。
    权利要求:
    Claims

    5 o 請 求 の 範 囲
    Γ 記 XV [ ェ ]
    X - N H - C H 一 C 0— C 0 — 丫 [ I ]
    ( 式中 、 X は官能基が保護さ れて い て も よ い ペプ チ ド残 ま た は ァ ミ ノ 基が保護さ れて いて も よ い ア ミ ノ 酸残基 を し 、 R は飽和 ま た は不飽和 の炭化水素基を示 し 、 そ し て R ·! の結合す る炭素原子上 に お け る置換基の立体0 配置は S 又は R s ¾■ し 、 Y は官能基が保護さ れて いて も よ い ペプチ ド残 ¾ま た は 力 ルポ キ シル基が保護さ れて い て ち よ い ア ミ ノ 酸残基を示す ）
    で示さ れる ポス 卜 ス タ チ ン お よ びそ の類縁化合物も し く はそ れ ら の塩 。
    2 . 式 [ ェ ] の X 及び Y の そ れぞれの ア ミ ノ 酸残基 ま た は ペプ チ ド残基の構成ァ ミ ノ 酸残基の 1 つ が下記式
    N H 一 C H - C 0 0 H
    ( 式中 、 R 2 は水素 ： 非 if 换低級 ァ ルキル ； 又 は ァ ミ ノ ¾ 、 ヒ ド □ キ シ 、 メ ル カ プ 卜 、 低級 ア ルキ ル ォ 、 カ ル ポ キ シル 、 フ エ ニル、 ヒ ド 口 キ シ フ エ ニル 、 イ ミ ダゾ 一 ル基お し く は べ ンゾイ ミ ダゾ ール基で置換さ れた翳換低 級 ァ ルキルを示す ） で示 さ れる ア ミ ノ 酸の残基、 又 は下 1
    ！式 R
    C 00 H
    ( 式中 、 R 3 は水素又 は ヒ ド ロ キ シ基を示す ）
    で示さ れる ア ミ ノ 酸の残基で あ り 、 かつ ペプチ ド残基 は こ れ ら の ア ミ ノ 酸が 2〜 3個結合 し た低重合ペ プチ ド残 基で あ る請求の範囲第 1 項記載のポス 卜 ス タ チン お よび そ の類縁化合物も し く はそ れ ら の塩 。
    3. 式 [ I ] の Xが下記 N H （a) - (c) の ア ミ ノ 酸残基 も し く はそ れ ら の ア ミ ノ ¾が保護さ れた.ア ミ ノ 酸残基 ：
    (a) hi 0 N C H C 0 - ( V a I )
    C l-l ( C H 3 ) 2
    (b) H N —— I ~ C 〇 一 （ P 「 o )
    (O H 2 N C H - C O ( P h e ) ま た は下 記 （d) — (b) の ペプチ ド残基も し く はそ れ ら の官能 ¾が保護さ れた ぺ プチ ド残 ¾ ：
    ((1) H - N C H C 0 N H C H C 0 - I I
    C H ( C HI 3 ) · C H ( C H 3 ) 2
    (Va I -Va I -) 〇
    O—
    -r
    Z
    O
    〇
    〇 〇
    〇 〇 〇 〇
    〇 - z ェ 工
    〇— ϋ ϋ一〇 ェ X ェ
    Z
    I
    〇〇HN H〇〇H H〇 z( S (H〇) Ho e
    一: 0 e- (c) - N H C H 2 C O - H C H C O O H
    C H ( C H 3 ) 2
    ( G i y-Va 1 -OH ) で示さ れる 力 ルポキ シル基が保護さ れ て い て も よ い ア ミ ノ 酸残基ま た は官能基が保護さ れて いて も よ い ペプチ ド 残基で あ る 請求の範 1 第 Ί 項記載の ボス 卜 ス タ チン ま fc はそ の類縁化合物も し く はそ れ ら の塩 。
    6. 式
    O C
    ― o 〇 ― o 一 O二 ェ 〉〇一〇
    Z へ
    〇 〇 ヘ
    コ工 工 G ϋ — Ο—◦ -Jェ
    ^ Z
    〇
    I
    o ェ 〇 〇
    1
    一 O o
    ―〇
    ェ
    >〇
    z:
    1 へ〇
    ― o
    >〇 —
    一 z で示さ れる ボス 卜 ス タ チ ン ま た はそのエ ステルも し く は そ れ ら の ァ ミ ノ 基が保護さ れた化合物 お よ びそ れ ら の塩 。
    7. 式 [ ェ ] の Xが 、
    H 2 N C H C 0 一 N H C H C O - C H ( C H 3 ) 2 C H ( C H 3 ) 2
    ( V a i - V a I - ) 又はそ の末端ア ミ ノ 基を保護 し た 基、
    R -, がェ チル基 、
    Y が — N H C H C 0 N H C H C O -- O H
    I i
    C H 2 C H ( C M 3 ) 2
    C H ( C H 3 ) 2
    ( -- D - L e u — V a l -- O H ) 、
    - N HI C H 2 C O N H C H C O - O H
    C H ( C H 3 ) 2
    ( Gly-Val-OH) ま た はそ れ ら の末端 カ ルポ キ シル基をエ ス テルで保護 し た基で ある請求の範面第 Ί 琅記載の ボス 卜 ス タ チ ン お よびポス ト ス タ チン類縁化合物 ま た はそれ ら の塩。
    8. 式
    (Phe) (Leu) (Va i )
    (保護基） --HNCHCO— NHCHGO— CO— NHCHCO— NHCHCO— Oil
    CH C2 Hh CH2 CH (〇H3 ) 2
    CH (CH3 ) 2
    で示さ れるボス 卜 ス タ ン類縁化合物も し く はそ れ ら の o エ ステル及びそ れ ら の塩 。
    b
    9. 請求の範囲第 Ί 項記載の式 [ I ] で示さ れる ポ ス 卜 ス タ チ ン ま た はそ の類緣化合物 ま た はそ れ ら の 塩を 有効成分 と す るエ ン ド ぺプチダ ーゼ 阻害剤 。
    10. 請求の範囲第 Ί 項記載の ポス 卜 ス タ チ ンま た は そ の類緣化合物 ま た はそ の塩を有効成分 と す る カ テブシ ン B阻害剤 。
    11. 請求の範 B!第 Ί 瑣記載の ポ ス ト ス タ チ ン ま た は そ の類縁化合物 ま た はそ の塩を有効成分 と す る エ ラ ス タ0 ーゼ阻害剤 。
    12. 請求の範囲第 Ί 項記載の式 [ I ] に お いて Yが
    (a) 一 D — L e u — 0 H ま た は
    (b) - D - L. e u -- V a I - O H で さ れる基 ま た はそ の エ ステルで あ る ポ ス ト ス タ チ ン ま た はそ の類緣化合物 ま た はそ れ ら の塩を有効成分 と す るプ ロ リ ルエ ン ド ぺ プチダ 一 ゼ 阻 f 剤 。
    13. 下記部分構造式
    - N H C H C H C O - I
    R ！ 0 H
    ( 式 中 R は飽和 ま た は不飽和 の炭化水素 Sを示す 。 ） を有 ϋ る 3 — ァ ミ ノ — 2 — ヒ ド u キ シ脂肪酸の誘導体を 酸化 し 、 下記部分構造式
    - N H C hl - C O - G O -
    ^ 1
    ( 式中 R は 前記 と周 じ ） を有 る 3 — ア ミ ノ ー 2 — ォ キ ソ 脂肪酸の誘導体を得 、 必要に 応 じ保護基の 除去及び ま た は塩の形成を行 う こ と を特徴 と す る 、 請求の範囲第 1 項記載の ポス 卜 ス タ チ ン ま た はその類縁化合物も し く はそ れ ら の塩の製造法 。
    1 4 . ス ト レブ 卜 ミ セ ス属に 属す る ポス 卜 ス タ チン生 産菌を培養 し 、 そ の培養物か ら ホ ス 卜 ス タ チン を採取 す る こ と を特徴 と す る 、 請求の範曲第 6 瑣記載のポス ト ス タ チン の製造法 。
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