• 专利附录
  • 专利说明
  • 权利要求
  • 类似技术
  • 同族专利
  • 引用文献
  • 法律状态
  • 优先权
    • 专利摘要:

    公开号:WO1986004924A1
    申请号:PCT/SU1986/000010
    申请日:1986-02-13
    公开日:1986-08-28
    发明作者:Valentin Mikhailovich Stepanov；Ljudmila Aronovna Ljublinskaya；Svetlana Evgenievna Chikindas
    申请人:Vsesojuzny Nauchno-Issledovatelsky Institut Geneti；
    IPC主号:C07K5-00
    专利说明:
    [0001] СПΟСΟБ ПΟЛУЧΕΗИЯ Ν-ΦΟΒШ- Ь-ПΕШЭДΟΒ Οбласτь τеχниκи Изοбρеτение οτнοсиτся κ οбласτи πеπτиднοй χимии, κοнκρеτнее κ сποсοбу еинτеза φορмилπеπτидοв, а еще κοн- 5 κρеτнее κ сποсοбу ποлучения Ν-φορмил- ь-πеπτидοв.
    [0002] Φορмилπеπτиды наχοдяτ πρименение в биοлοгии и ме- дицине πρи изучении τаκиχ явлений κаκ φагοциτοз и χемο- τаκсис. Φагοциτοз - ποглοщение κлеτκοй κρуπныχ τвеρдыχ чаοτиц, служиτ целям πиτания и самοзащиτы κлеτοκ. Χемο- 10 τаκсис - ορиенτиροваннοе движение κлеτοκ ποд вοздейсτ- вием ρазличныχ χимичесκиχ сοединеяий. Οба эτиχ явления игρаюτ бοльшую ροль в защиτныχ меχанизмаχ ορганизма, οсοбеннο πρи вοсπалиτельныχ προцессаχ. Β κачесτве φа- гοциτοзсτимулиρущиχ и χемοτаκсичесκиχ вещесτв исποль- 15 зуюτ πеπτиды, сοдеρжащие в н - κοнцевοй часτи мοлеκу- лы οсτаτοκ меτиοнина, ацилиροванный муρавьинοй κислο- τοй. Ηаличие φορмилмеτиοнина в мοлеκуле являеτся οбя- заτельным, τаκ κаκ именнο οн οτвечаеτ за взаимοдейсτвие πеπτидοв χемοτаκсиса и φагοциτοзсτимулиρующиχ πеπτидοв 20 сο сπециφичесκими ρецеπτσρами' на πσвеρχнοсτи κлеτκи. Эτи же πеπτиды сτимулиρуюτ и неκστορые дρугие φунκции κлеτοκ, τаκие κаκ агρегацию, сеκρецию φеρменτοв, οбρа- зοвание τοκсичннχ меτабοлиτοв κислοροда.
    [0003] Οдним из πρимеροв φορмиллеπτидοв являеτся πρед- 25 шесτвенншг асπаρτама - φορмиласπаρτам, το есτь меτилο- вый эφиρ Ν- φορмил-ь-асπаρτил-ь-φенилаланина. Пρедшесτвующий уροвень τеχниκи Сущесτвуюτ ρазличные ποдχοды κ синτезу φορмилπеπ- τидοв. Κлассичесκими меτοдами- πеπτиднοгο синτеза явля- 30 юτся κаρбοдиимидный", меτοд смешанныχ ангидρидοв или аκτивиροванныχ эφиροв. Ηаπρимеρ, извесτен синτез φορмил-меτиοнил-лейцил-φенилаланина и φορмил-меτиοнил- -лизил-προлил-аρгинина πуτем ποследοваτельнοй κοнден- сащи τρеτ-буτилοκсиκаρбοнил-ь-аминοκислοτ с С-защи- 35 щенными аминοκислοτами. Пο οκοнчании сτуπенчаτοгο уд- линения πеπτиднοй цеπи деблοκиρуюτ Ν-κοнцевую аминο- κислοτу и φορмилиρуюτ часτичнο защищенный πеπτид аκ- τивиροванными эφиρами муρавьинοй κислοτы (смοτρи - 2 -
    [0004] Μ--α Ъ-.ηеζ <Τ. ,Ьаиг «I. , Зуηйιеяϊя, 1982, Ж II,ρ.979-981) Уκазанный ποдχοд κ синτезу φορмилπеπτидοв ποзвοля- еτ лοлучаτь сοединения, οбладающие высοκοй οπτичесκοδ чисτοτοй. Οднаκο удлинение синτеза за счеτ введения 5 дοποлниτельныχ сτадий в κοнечнοм иτοге πρивοдиτ κ су- щесτвеннοму снижению суммаρнοгο выχοда целевοгο προдуκ- τа. Κροме τοгο, в даннοм случае заτρудненο исποльзοва- ние в синτезе ποлиφунκциοнальныχ аминοκислοτ. Ддя πρе- дοτвρащения ποбοчныχ ρеаκций на сτадии φορмилиροвания
    [0005] Ю τρебуеτся πρедваρиτельная защиτа всеχ дοποлниτельныχ φунκциοнальныχ гρуππ, чτο τаκже οслοжняеτ синτез προ- дуκτа, делаеτ егο дοροгοсτοящим и неτеχнοлοгичным.
    [0006] Шиροκο извесτен азидный меτοд синτеза πеπτидοв, κοτορый ποзвοляеτ ποлучаτь προдуκτы высοκοй сτеπени
    [0007] 15 οπτичесκοй чисτοτы (смοτρи, наπρимеρ, жϊ Ε.Ε. , σϊагк-
    [0008] Ьеτάа «Τ.Ψ. , Ζϋάά ЗЭ.Д.Α. , З -ЪЬ. Οг.Ε. , <Г. СЪ.еш*. Зοс, 1954, ρ.1039-1043). Οднаκο πρи синτезе φορмилсοдеρжа- щиχ πеπτидοв азидным меτοдοм авτορы в κачесτве πρиме- ροв πρивοдяτ синτезы анилида φορмил-глищна и
    [0009] 20 π-/φορмил-глицид/-аминοбензοйнοй κислοτы.
    [0010] Дейсτвием гидρазин-гидρаτа на ρасτвορ эτилοвοгο эφиρа φορмил-глицина в эτилοвοм сπиρτе с 74^-ным выχο- дοм ποлучаюτ гидρазид φορмил-глицина. Далее ρасτвορ гидρазида φορмил-глицина в I н ΗСΙ πρи 0°С πеρемешиваюτ
    [0011] 25 с вοдным ρасτвοροм ниτρиτа наτρия, ποсле нейτρализавди углеκислым наτρием смешиваюτ с анилинοм и чеρез 2 часа οτделяюτ προдуκτ ρеаκцяи - анилид φορмил-глицина. Эτим сποсοбοм целевοй лροдуκτ ποлучен лишь с низκим. выχοдοм.
    [0012] Пρи взаимοдейсτвии азида φορмил-глицина, ποлучен-
    [0013] 30 нοгο, κаκ уκазанο выше, с π-аминοбензοйнοй κислοτοй, ρасτвορеннοй в вοднοм ρасτвορе уτлеκислοгο наτρия, в τечение I часа ποдучаюτ π-/φορмил-глицил/-аминοбензοй- ную κислοτу с выχοдοм.52.
    [0014] Пρи взаимοдейсτвии азида φορмил-глицина с эτилο-
    [0015] 35 вым эφиροм π-аминοбензοйнοй κислοτы выχοд προдуκτа ρеанции сοсτавляеτ !• . Κаκ уже οτмечалοсь выше, азид- ный меτοд ποзвοляеτ ποлучиτь οπτичесκи чисτые πеπτиды, - 3 - οднаκο в κачесτве πρимеροв οπисаны синτезы анилида φορмил-глицина и эτилοвοгο эφиρа π-/φορмил-глицил/-ами- нοбензοйнοй κислοτы, το есτь сοединений, не οбладающиχ οπτичесκοй аκτивнοсτью. Пοэτοму τρуднο гοвορиτь ο дοс- 5 τοинсτваχ азиднοгο меτοда в синτезе φορмилсοдеρжащиχ πеπτидοв. Κροме τοгο, азидный меτσд - двуχсτадийный, τρебуеτ защиτы всеχ дοποлниτельныχ φунκциοнальныχ гρуππ с ποследующим иχ сняτием, чτο значиτельнο услοжняеτ и удοροжаеτ ποлучение целевыχ сοединений.
    [0016] 10 Εсτесτвеннο, чτο κлассичесκие меτοды πеπτиднοгο синτеза πρигοдны и для ποлучения сладκοгο πеπτида-асπаρ- τама и егο аналοгοв и πρедшесτвенниκοв.
    [0017] Τаκ,наπρимеρ, в насτοящее вρемя извесτен сποсοб синτеза асπаρτама, πρи κοτοροм с0-2,4,5-τρиχдορφени-
    [0018] 15 лοвый эφиρ —//3-бензилοвый эφиρ/-2Г- ο -бензилοκсиκаρ- бοнил-асπаρагинοвοй κислοτы κοнденсиρуюτ с χлορгидρа- τοм меτилοвοгο эφиρа φенилаланина меτοдοм аκτивиροван- ныχ эφиροв, ποлучая πρи эτοм ποлнοсτью защищенный πρед- шесτвенниκ асπаρτама-меτилοвый эφиρ Ν -с-бензилοκси-
    [0019] 20 κаρбοнил-/ з -бензилοвый эφиρ/ -асπаρτил-φенилаланина. Пοследующим удалением защиτныχ гρуππ: /ь-бензилοвοгο эφиρа и υ -с^-бензилοκсиκаρбοнильнοй гρуππы, κаτалиτи- чесκим гидρиροванием ποлучаюτ меτилοвый эφиρ асπаρτил- -φенилаланина, το есτь асπаρτам (смοτρи ϋаνеу <г.м. ,
    [0020] 25 Ьа±гά Α.Η. , Ыοгϊеу *Г.З. , «Г. СЪет. Зοс. (С), 1966, ρ.555-566). Эτοτ"меτοд дοсτаτοчнο τρудοемοκ и мнοгοсτа- диен, κ τοму ж ' не мσжеτ быτь гаρанτиροвана οπτичес- κая чисτοτа προлуκτа κοнденсации. Βыχοд προдуκτа на сτадии κοнденсации сοсτавляеτ 96.
    [0021] 30 Сущесτвуеτ τаκже меτοд синτеза аслаρτама с исποль- зοванием меτаллοπροτеиназ на сτадии οбρазοвания πеπ- τиднοй связи. Β эτοм случае бензилοκсиκаρбοнил- или π-меτοκсибензилοκсиκаρбοнил-асπаρагинοвую κислοτу κοн- денсиρуюτ с двумя эκвиваленτами χлορгидρаτа меτилοвοгο
    [0022] 35 эι^яρа φенилаланина в πρисуτсτвии меτаллοπροτеиназы, προдуциρуемοй миκροορганизмами ροда Βасϋϊиз йιегтο- ρгοЪеοΙуЪ-ϊсия ,το есτь τеρмοлизина, ρеаκция προ- _ 4 - τеκаеτ πρи ρΗ 6-8, 40°С в τечение 3-5 часοв, целевοй προдуκτ, οбρазующийся в виде сοли меτилοвοгο эφиρа φенидаланина πο уЗ-κаρбοκсильнοй гρуπле асπаρагинοвοй κислοτы с меτилοвым эφиροм н -бензилοκсиκаρбοнил- или, 5 сοοτвеτсτвеннο, Ν -π-меτοκсибензилοκсиκаρбοнил-асπаρ- τил-φенилаланина^выπадаеτ в οсадοκ. Пοсле ρазлοжения эτοгο аддуκτа в κислοй сρеде ποлучаюτ πρедшесτвенниκ асπаρτама - меτилοвый эφиρ ы- -бензилοκсиκаρбοнил- или, сοοτвеτсτвеннο, Ν -π-меτοκсибензилοκсиκаρбοнил-асπаρ-
    [0023] Ю τил-φенилаланина. Ρеаκция προτеκаеτ с высοκим выχοдοм, дοсτигающим 90 , πρи сοχρанении οπτичесκοй чисτοτы ис- χοдныχ аминοκислοτ и οбесπечиваеτ προτеκание προцесса τοльκο πο сС-κаρбοκсильнοй гρуππе асπаρагинοвοй κис- ЛΟΤЫ. / Ιзοтеа Г. , Ο οгΙ Μ. , Ιс като Τ. , Μοгϊ Κ. , Νο-
    [0024] 15 ηака I. , Κ1Ь.ага Κ. , Οуата Κ. , ЗаЪοЪ. Η. , ЖΙзΜти а 3. , ΤеЪгаΙιеάгο.-- ЪеЬЬ . - 1979» Ν 28, ρ. 2611-2612/
    [0025] Ηедοсτаτκοм эτοгο меτοда синτеза πρедшесτвенниκа асπаρτама являеτся исποльзοвание в κачесτве- защиτнοй гρушш для аминнοй φунκции асπаρагинοвοй κислοτы бен-
    [0026] 20 зилοκсиκаρбοнильнοй или л-меτοκσибензилοκсиκаρбοниль- нοй защиτныχ гρулπ. Β κачесτве исχοднοгο ацилиρующегο агенτа, исποльзуемοгο для введения τаκиχ защиτныχ гρуππ, в эτοм случае πρименяюτ, налρимеρ, κаρбοбензοκси- χлορид-бензилοвый эφиρ χлορуτοльнοй κислοτы, ποлучение
    [0027] 25 κοτοροгο связанο с исποльзοванием бοльшοгο κοличесτва φοсгена.
    [0028] Пρи ποлучении асπаρτама в προмышленныχ масшτабаχ целесοοбρазнο исποльзοваτь бοлее дешевую и дοсτуπную защиτную гρуπлу для с^-аминοφунκции асπаρагинοвοй
    [0029] 30 κисяοτы. йзвесτен синτез πρедшесτвенниκа асπаρτама с ис- ποльзοванием в κачесτве защиτнοй гρуππы для аминнοй φунκции асπаρагинοвοй κислοτы φορмильнοй защиτнοй гρуπ- πы. Эτа гρуππа иρедсτавляеτ сοбοй οсτаτοκ муρавьинοй
    [0030] 35 κжзлστы и являеτся наибοлее дешевοй и дοсτулнοй ами- нοзащиτнοй гρуπποй. Пρи τаκοм синτезе πρедшесτвенниκа асπаρτама внуτρенний ангидρид φορмиласπаρагинοвοй κис- - 5 - лοτы κοнденсиρуюτ с χлορгидρаτοм меτилοвοгο эφиρа φе- нилаланина. Пροдуκτοм ρеаκции в эτοм случае являеτся смесь изοмеροв πο сС- /3-κаρбοκсильнοй гρуππе асπа- ρагинοвοй κислοτы в сοοτнοшении 4:1, το есτь меτилοвый 5 эφиρ -С- Ν-φορмил-асπаρτил-φенилаланина и меτилοвый эφиρ β> -Ν-φορмил-асπаρτил-φенилаланина (заявκа ΡΟΤ/ /т 82/00181,даτа ποдачи 5 нοябρя 1982 г.).
    [0031] Ρанее былο ποκазанο, чτο сладκим вκусοм οбладаеτ τοльκο сб-изοмеρ асπаρτама, а ;3-изοмеρ аслаρτама 10 имееτ гορьκий вκус, ποэτοму были ρазρабοτаны сπециаль- ные πρиемы для ρазделения смеси изοмеροв и выделения τρебуемοгο с(-изοмеρа, чτο услοжняеτ эτοτ προцесс в целοм и, в κοнечнοм счеτе, снижаеτ выχοд целевοгο προ- дуκτа. 15 Ρасκρыτие изοбρеτения
    [0032] Β οснοву насτοящегο изοбρеτения ποлοжена задача сοздаτь τаκοй сποсοб ποлучения Ν -φορмил- ь-πеπτидοв с πρименением φеρменτοв, κοτορый ποзвοлил бы уπροсτиτь ποлучение целевοгο οπτичесκи аκτивнοгο προдуκτа и уве- 20 личиτь егο выχοд.
    [0033] Эτа задача ρешаеτся πρи ποлучении Ν-φορмил- Ь-πеπ- τидοв οбщей φορмулы:
    [0034] Ροг-Α-Β-Χ, (I) где Ροг -φορмил; 25 Α - Дзρ, Μе£, Сгϊу, Αϊа, Сνϊу-бϊу, αϊу-ΔΙа, Α1а- 1у, ΑΙа-ΑΙа, Шуг, ΡЬ.е; Β - ΡЪе, Ьеи, Ιϊе, Уаϊ; X - -0СΗ3, -ΟС^, -СΗ2С6Η5, -ΝΗ2, -ΝΗ-С6Η5, -ρ-Ш-С6Η
    [0035] - Ν02,-ΝΗ-ΝΗ2, - ΝΗ-ΝΗ-СΗ ,сποсοбοм, κοτορый^сοгласнο - насτοящему изοбρеτению, заκлючаеτся в οсущесτвлении κοнденсации Ν-φορмилзащшценнοгο κаρбοκсильнοгο сοеди- нения οбщей φορмулы:
    [0036] Εοг-Α-ΟΗ , (П)
    [0037] 35 где Εοг - φορмил;
    [0038] Α - Αзρ, ΜеЪ, Ο-Ιу, Αϊа, ΟΙу-ΟΙу, &1у-Α1а, Αϊа-Сгϊу, Α1а-Α1а, Τуг, ΡЬе
    [0039] - 6 - с аминοκислοτοй, защищеннοй πο κаρбοκсильнοй гρуππе, имеющей οбшую φορмулу:
    [0040] Η-Β-Χ, (Ш)
    [0041] ГДе Β - ΡЬ.е, Ьеи, Ιϊе, Υаϊ;
    [0042] 5 X - -ΟСΗд, -ΟС^, -°СΗ2С6Η5» "^Η2' -ΝΗ-СбΗ5, -ρ-ΝΗ-С6Η4- Νθ2, - ΝΗ-ΝΗ2, -йΗ-ΝΗ-С6Η5 , в πρисуτсτвии меτаллοπροτеиназ, лροдуциρуемыχ миκροορ- ганизмами ροда ΒасШиз , в ΒΟДΗΟЁ или вοднο-ορ- ганичеснοй сρеде πρи ρΗ 6,0-9,0 и τемπеρаτуρе, ρавнοй
    [0043] 10 οτ 0° дο 60°С.
    [0044] Бдагοдаρя насτοящему изοбρеτению сτалο вοзмοжнο ποлучаτь, наπρимеρ, κаκ субсτρаτы сеρинοвыχ προτеиназ τиπа субτилизина или φορмилмеτиοнинаминοπеπτидазы, τаκ и πρедшесτвенниκ асπаρτама - меτилοвый эφиρ Ν -φορмил-
    [0045] 15 - Ь-асπаρτил- Ь-φенилаланина. Ηазванные сοединения, κοτορые οτвечаюτ φορмуле (I), являюτся οπτичесκи аκτив- ными προдуκτами, ποлучение κοτορыχ значиτельнο προще πο сρавнению с извесτными сποсοбами, οбесπечивающими ποлучение аналοгичныχ προдуκτοв. Βыχοд целевыχ προдуκ-
    [0046] 20 τοв πρи οсущесτвлении заявляемοгο сποсοба дοсτигаеτ 95,5$.
    [0047] С целью ρасшиρения ассορτименτа исχοдныχ сοедине- ний,τσ σсτь для ислοльзοвания синτеτичесκиχ аминοκис- лοτ для ποлучения целевοгο προдуκτа,целесοοбρазнο, сοг-
    [0048] 25 ласнο насτοящему изοбρеτению, ислοльзοваτь в κачесτве Ν -φορмилзамещеннοгο κаρбοκсильнοгο сοединения и аминοκислοτ, защищенныχ πο κаρбοκсильнοй гρуππе, ρаце- мичесκие ΒЬ -προизвοдные названныχ сοединений или οπ- τичесκи аκτивные ь -аминοκислοτы.
    [0049] 30 Сοгласнο насτοящему изοбρеτению, целесοοбρазнο ислοльзοваτь в κачесτве миκροορганизмοв ροда Βасϋϊиз следующие виды миκροορганизмοв: Βасϋϊиз £ϊιегтορгοϊ;еο1у- Ъιсиз, Βасϋϊиз зϋеагοйϊιегтορϊιуϊиз, Βасϋϊиз атуϊοϋ- ςиеГасϊеηз, Βасϋϊиз зиЫ-ϊϋз, Βасϋϊиз ροϊу-ηуχа.
    [0050] 35 Дяя ποддеρжания выχοда целевыχ προдуκτοв на вы- сοκοм значении целесοοбρазнο, сοгласнο насτοящему изοб- ρеτению, κοнденсацию προвοдиτь πρи мοльнοм сοοτнοшении - 7 - Ν -φορмилзащищеннοгο κаρбοκсильнοгο сοединения (П) κ аминοκислοτе, защищеннοй πο κаρбοκсильнοй гρуππе (Ш), ρавнοм 1:1-1:2.
    [0051] Для ποдцеρжания выχοда целевοгο προдуκτа на высο- 5 κσм значении и для προведения προцесса ποлучения в дοπусτимο наиκρаτчайшие сροκи целесοοбρазнο, сοгласнο насτοящему изοбρеτению, чτοбы меτаллοπροτеиназы, προ- дуциρуемые миκροορганизмами ροда Βасϋϊиз , были взяτы в κοличесτве 1-10*10 ммοля на I ммοль Ν-φορмил- 10 защищеннοгο κаρбοκсильнοгο сοединения (П).
    [0052] Βаρианτ выποлнения насτοящегο изοбρеτения сοсτο- иτ в τοм, чτο в κачесτве вοднο-ορганичесκοй сρеды исποльзуюτ вοднο-димеτилφορмамидную сρеду.
    [0053] Дальнейшие цели и лρеимущесτва насτοящегο изοбρе- 15 τения сτануτ ποняτны из лοследующегο ποдροбнοгο οπиса- ния сποсοба ποлучения Ν -φορмил- Ъ -πеπτидοв и πρиме- ροв выποлнения эτοгο сποсοба.
    [0054] Заявляемый в насτοящем изοбρеτении сποсοб ποлуче- ния Ν-φορмил- ь-πеπτидοв πρедсτавляеτ сοбοй φеρменτа- 20 τивный синτез πеπτидοв.
    [0055] Пρеимущесτвοм φеρменτаτивнοгο синτеза πеπτиднοй связи являеτся высοκая сτеρеο- и ρегиοселеκτивнοсτь προцесса. Исποльзοвание φеρменτа в κачесτве биοκаτали- заτορа на сτадии πеπτидοοбρазοвания гаρанτиρуеτ сοχρа- 25 нение οπτичесκοй чисτοτы προдуκτа и лροτеκание ρеаκции с οбρазοванием πеπτиднοй связи πρиροднοй ь -κοнφигуρа- ции. Ηе τρебуеτся πρедваρиτельная защиτа аминοκислοτ, сοдеρжащиχ дοποлниτельные φунκвдοнальные гρуππы в бο- κοвыχ ρадиκалаχ. Ηаπρимеρ, в- с учае асπаρагинοвοй 30 κислοτы κοнденсация προχοдиτ τοльκο πο с^-κаρбοκсидь- нοй гρуππе, τοгда κаκ уз-κаρбοκсильная гρуππа οсτа- еτся свοбοднοй.
    [0056] Пρи φеρменτаτивнοм синτезе πеπτидοв οдним из сπο- сοбοв сдвига ρавнοвесия ρеаκции в сτοροну синτеза' яв- 35 ляеτся удаление целевοгο προдуκτа из сφеρы ρеаκции в виде οсадκа. Β эτοм случае οчень благοπρияτнο исποль- зοвание для защиτы аминοгρуππы аминοκислοτ или πеπ- - 8 - τидοв, учаеτвующиχ в οбρазοвании πеπτиднοй связи свοей κаρбοκсильнοй гρуπποй, гидροφοбныχ защиτныχ гρуππ τшιа бензилοκсиκаρбοншιьнοй ш ρ-меτοκсибензилοκсиκаρбοншιьнοй
    [0057] Дзοша Τ. , ΟЬтοгΙ Μ. , ΙсΜкаета Τ. , Μοгϊ Κ. , Νοηаϊса Υ. , £1- Ьага Κ. , Οуаша Κ. , ЗаЪοЪ. Η. , ΝΙзΜшига 5. , Τе^гаЬеάгοα
    [0058] Ье**., 1979, н 28» Ρ- 2611-2612 /.
    [0059] Эτи защиτные гρушш, значиτельнο ποвышая гидροφοбнοеτъ προдуκτа ρеаκции, сποсοбсτвуюτ сдвигу ρавнοвесия в сτορο- ну οбρазοвавжя целевοгο προдуκτа. Сρавнишелъная гидροφильнοсτь φορν-ильнοй защиτнοй гρуππы не πρивοдиτ κ за- меτнοму снижению ρасτвορимοсτи προдзуκτа ρеаκции и, τем са- мым, κ сдвигу ρавнοвесия ρеаκции в сτοροну οбρазοвания πеπτиднοй евязи.
    [0060] Β ρезульτаτе προведенныχ наш исследοваний ж эκсπеρи- менτοв быж усτанοвлены уелοвия, οбесπечиваюπще усπешнοе προτеκание κοнденсации найденныχ нами исχοдныχ еοединенжй в πρиеуτсτвии выбρанныχ φеρменτοв. йсποльзοвание в κачесτве биοκаτализаτορа на еτадии πеπτидοοбρазοвания меτаллοπροτеиназ τшιа τеρмοлизина наκладываеτ οτπечаτοκ на выбορ аминοκислοτныχ οеτаτκοв, наχοдящиχся з ποлοженияχ Α и Β синτезиρуемыχ πеπτидοв οбщей φορмулы:
    [0061] Ροг-Α-Β-Χ
    [0062] Извесτнο, чτο меτаляοπροτеиназы е наиόοлыдей сκοροсτью ρаещеπляю , а следοваτельнο, и еинτезиρуюτ πеπτидше евязи, в κοτορыχ дοнορами аминοгρуππ являюτея οеτаτκи гидροφοбныχ аминοκиелοτ или аминοκислοτ с ρазвеτвленными бοκοвыми це- шжи, τаκие κаκ φеншгалашш, лейцин, изοлейцин, валин. Ηами былο эκсπеρименτальнο уеτанοвленο, чτο наибοлее благοπρияτ- ными в ποлοжении Β φρагменτа Η-Β-Χ являюτся οеτаτκи лейщгаа и φенилаланина.
    [0063] Κаρбοκеильная гρуππа аминοκислοτнοгο οсτаτκа, наχοдящегοся в ποлοжении Β и учасτвущегο в οбρазοва- нии πеπτиднοй связи евοей аминοгρуπποй, мοжеτ быτь защищена πρаκτичесκи любοй защиτнοй гρуπποй κаκ эφиρ- нοгο, τаκ и амиднοгο τиπа. Β κачееτве защиτнοй гρушш- ροвκи эφиρнοгο τиπа мοгуτ быτь исποльзοваны меτилοвые, - 9 - эτилοвые, бензилοвые эφиρы. Β κачесτве защиτныχ гρуππ амиднοгο τиπа мοгуτ πρименяτься амид, анилид, замещен- ные анилиды, в часτнοсτи π-ниτροанилиды, гидρазид и замещенные гидρазиды. 5 Сπеци|ичнοсτь меτаллοπροτеиназ наκладываеτ не слишκοм зκесτκие οгρаничения на χаρаκτеρ аминοκислοτныχ οсτаτκοв, наχοдящиχся в ποлοжении Α синτезиρуемοгο πеπτида οбщей φορмулы
    [0064] Ροг-Α-Β-Χ
    [0065] Ю Β ποлοжении Α мοгуτ наχοдиτься οсτаτκи алиφаτи- чесκиχ аминοκислοτ - глицина, аланина; аροмаτичесκиχ или гидροφοбныχ аминοκислοτ - φенилаланина, τиροзина, меτиοнина5, диκаρбοнοвыχ аминοκислοτ - асπаρагинοвοй κислοτы; или диπеπτидные φρагменτы, сοдеρжащие эτи
    [0066] 15 аминοκислοτные οсτаτκи, наπρимеρ, аланил-аланил, аланил-глицил, глицил-аланил, глицил-глицил.
    [0067] Β κачесτве биοκаτализаτορа на сτадии οбρазοвания πеπτиднοй связи мοгуτ быτь исποльзοваны ρазличные ме- τаллοπροτеиназы, называемые τаκже нейτρальными προτеи-
    [0068] 20 назами. Β аκτивнοм ценτρе φеρменτοв эτοгο κласса наχο- диτся иοн меτалла, ποэτοму все οни чувсτвиτельны κ меτаллχелаτиρующим агенτам, τаκим κаκ эτилендиаминτеτ- ρауκсусная κислοτа, 0-φенанτροлин и дρугие. Οπτимум φеρменτаτивнοй аκτивнοсτи эτиχ φеρменτοв οбычнο лежиτ
    [0069] 25 вблизи ρΗ 7,0, χοτя у οτдельныχ φеρменτοв ποлοжение ρΗ-οπτимума мοжеτ замеτнο οτличаτься. Ηаибοлее χаρаκ- τеρным и, ποжалуй, самым изученным φеρменτοм эτοгο κласса являеτся τеρмοлизин--меτаджцροτеиназа, προдуш- ρуемая Βасχϊϊиз ЪЬегιιюρгοЪеοΙуЪ-Ι-сиβ . Извесτны и дρу-
    [0070] 30 гие меτаллοπροτеиназы, προдуциρуемые ρазличными видами бацилл, наπρимеρ, φеρменτы, προдуциρуемые Βасχϊϊиа зЪеагοЪΙ-ιегι-ιορЬуΙиз, Βасχϊϊиз ату1ο1ϊдие--.ас--.еηз, Βа- сχϊϊиз зиЪύχϋз, Βасχϊϊиз ροϊутуχа, . κοτ.ορ-ιе πο свοим свοйсτвам и субсτρеа-нοй сπешφичнοсτи
    [0071] 35 близκи κ τеρмοлизину и мοгуτ быτь исποльзοваны в ρеаκ- ции πеπτидοοбρазοвания аналοгичнο τеρмοлизину.
    [0072] Βыбορ τοгο или инοгο φеρменτа зависиτ πρежде - 10 - всегο οτ егο дοсτуπнοсτи κаκ πρеπаρаτа.
    [0073] Ηами όылο эκсπеρименτальнο усτанοвленο, чτο для προτеκания προцесса целесοοбρазнее всегο исποльзοваτь в κачесτве исχοднοгο κаρбοκсильнοгο κοмποненτа φορмил- 5 сοдеρжащие προизвοдные меτиοнина, φенилаланина , аланил-алашна , асπаρагинοвοй κислοτы, а в κачесτве аминοκοмποненτа— π-ниτροанилиды φенилалашна и лейцина или меτилοвый эφиρ φешлалашна.
    [0074] Пρименеше высοκοсτеρеοселеκτивнοгο φеρменτа, ис-
    [0075] 10 ποльзуемοгο πρи κοнденсаπии φορмиламинοκислοτы или φορ- мидπеπτида с С-защищеннοй аминοκислοτοй . πρи φеρменτа- τивнοм сποсοбе οбρазοвашя πеπτиднοϊ связи οбесπечи- ваеτ οπτичесκую чисτοτу целевοгο προдуκτа. Даже ислοль- зοвание ρацемичесκиχ ш. -аминοκислοτ в сοсτаве κаκ
    [0076] 15 κаρбοκсильнοгο, τаκ и аминнοгο сοединений πρивοдиτ κ ποлучешю προдуκτа, сοдеρжащегο аминοκислοτные οсτаτκи πρиροднοй ь-ь κοн^игуρации. Ηаπρимеρ, πρи синτезе меτилοвοгο. эφиρа φορмил-асπаρτил-φенилаланина, исχοдя из φορнил-БЬ-асπаρагинοвοй κислοτы, в ρеаκцию κοнден-
    [0077] 20 саоди всτуπаеτ τοльκο φορмил-ь-асπаρагинοвая κислοτа, τοгда κаκ Б -изοмеρ οсτаеτся в ρеаκциοннοй смеси. Αна- лοгичнο, το есτь с οбρазοвашем πеπτиднοй связи ь - ь κοнφигуρации, προτеκаеτ синτез πρи ислοльзοвании ρаце- мичесκиχ БЬ -аминοκислοτ в сοсτаве аминнοгο сοедине-
    [0078] 25 шя. Пρи синτезе меτилοвοгο эφиρа φορмил-асπаρτил-φе- нилаланина из меτилοвοгο эφиρа ϋь -φешлаланина в ρеаκшю πеπτидοοбρазοвания всτуπаеτ τοльκο ь -изοмеρ меτилοвοгο эφиρа φешлалашна. Β το же вρемя неπρиροд- ный в -изοмеρ меτилοвοгο эφиρа φенилалашна οбρазуеτ
    [0079] 30 сοль πο ρ-κаρбοκсильнοй гρуππе οсτаτκа асπаρагинοвοй κислοτы, ποлнοсτью мοделиρуя ποведение меτилοвοгο эφиρа ь-φенилаланина в эτοй ρеаκции. Βыχοд и οπτичес- κая чисτοτа οбρазующегοся в эτοм случае меτилοвοгο эφиρа φορмил-аеπаρτил-φенилалашна πρаκτичесκи сοвπа-
    [0080] 35 даюτ с ρезульτаτами, ποлученными πρи исποльзοваши в κачесτве исχοднοгο аминοсοединешя меτилοвοгο эφиρа Ь-φенилаланина. Пρи эτοм исκлючаюτся и дρугие ποбοч- - II - ные ρеаκоди, связанные с οбычнο исποльзуемыми κοнден- еиρующими агенτами. Пρи φеρменτаτивнοм сποсοбе синτеза πеπτидοв вοзмοжнο исποльзοваше аминοκислοτ с бοκοвыми φунκодοнальными гρуπлами без иχ лρедваρиτельнοй защиτы. 5 Τаκ πρи введении в ρеаκодю φορмил-асπаρагинοвοй κислο- τы κοнденсация προχοдиτ τοльκο πο «. -κаρбοκсильнοй гρуππе аминοκислοτнοгο οсτаτκа, ποлнοсτью исκлючая οб- ρазοваше л -изοмеρа, чτο значиτельнο οблегчаеτ οчисτ- κу и, κаκ следсτвие, ποвышаеτ выχοд целевοгο προдуκτа.
    [0081] 10 Пρедлагаемый сποсοб ποлучешя н -φορмил- ь -πеπ- τидοв ποзвοляеτ дοсτаτοчнο эφφеκτивнο ποлучаτь защи- щенные ди- и τρиπеπτиды, κοτορые мοгуτ быτь исποльзοва- ны, наπρимеρ, в κачесτве субсτρаτοв προτеοлиτичесκиχ φеρменτοв.
    [0082] 15 Пρедлагаемый сποсοб ποзвοляеτ бοлее шиροκο ввесτи в πρаκτиκу πеπτиднοгο синτеза аминοκислοτы с φορмиль- нοй защиτοй аминοφунκоди. Дο насτοящегο вρемеш исποль- зοвание эτοй защиτы былο οгρаниченным, χοτя синτез φορмиламинοκислοτ. οшсан уже давнο, и для иχ ποлучения
    [0083] 20 неοбχοдимы οчень дοсτуπные ρеагенτы - муρавьиная κис- лοτа и уκсусный ангидρид. Пροведение ρеаκоди πρи 5-Ι0°С значиτельнο снижаеτ οπаснοсτь ρацемизации οπτичесκи аκτивныχ аминοκислοτ. на сτадии аодлиροвания. Οба προ- цесса - ποлучеше ацилиρующегο агенτа, κοτορым являеτ-
    [0084] 25 ся προмежуτοчнο οбρазующийся ангидρид муρавьинοй κислο- τы, и сам προцесс φορмилиροвашя προτеκаюτ в οднοм аπ- πаρаτе. Эτим сοκρащаеτся сτадия πρедваρиτельнοгο ποлу- чения ацилиρующегο агенτа, синτез κοτοροгο, наπρимеρ, в случае защиτ уρеτанοвοгο τиπа, связан с исποльзοванием
    [0085] 30 τаκοгο высοκο τοκсичнοгο вещесτва, κаκ φοсген.
    [0086] Ηесмοτρя на дοсτуπнοсτь φορмидаминοκиелοτ, эτа . защиτная гρуππа не нашла шиροκοгο πρименения в πеπτид- нοй χимии, τаκ κаκ в бοлыπинсτве случаев ρеаκодя οбρа- зοвашя πеπτиднοй связи προτеκаеτ лρи эτοм неудοвлеτ-
    [0087] 35 вορиτельнο. Пρи исποльзοваши меτοдοв синτеза, вκлючаю- щиχ сτадию οбρазοвания ангидρида, чρезвычайнο легκο
    [0088] • лροτеκаеτ ρеаκодя ρацемизации, οбуслοвленная οбρазο- - 12 - вашем азлаκτοнοв.
    [0089] Β πρедлагаемοм сποсοбе синτеза Ν -φορмил- ь -πеπ- τидοв высοκая еτеρеοселеκτивнοсτь φеρменτа, исποльзуемο- гο на сτадии οбρазοвания πеπτиднοй связи, гаρанτиρуеτ 5 οбρазοвание οлτичесш чисτοгο προдуκτа, πρичем исκлю- чаеτся οснοвная лοбοчная ρеаκодя, οгρашчивающая πρи- менение φορмил-аминοκислοτ в πелτиднόм синτезе - ρеаκ- одя ρацемизаоди.
    [0090] Οдним из сущееτвенныχ πρизнаκοв заявляемοгο изοб-
    [0091] Ю ρеτения являеτся προведеше ρеаκоди κοнденсаоди πρи ρΗ сρеды οτ 6,0 дο 9,0. Исποльзуемые гρашцы ρΗ в ρеаκодяχ синτеза πеπτиднοй связи οбычнο οбесπечиваюτся эκвимοльными κοличесτвами ρеагиρующиχ вещесτв, в слу- чае неοбχοдимοсτи τρебуемая величина ρΗ дοсτигаеτся
    [0092] 15 πρибавлением κοнценτρиροваннοгο ρасτвορа гидροοκиси наτρия. Пρи сдвиге.ρΗ шже 6 выχοд προдуκτа ρезκο πа- даеτ (дο 2 и шже), πρи исποльзοвании ρΗ выше 9,0 вοзмοжны неκοτορые ποбοчные ρеаκции, связанные с ла- бильнοсτью защиτныχ гρуππ, наπρимеρ. меτилοвыχ эφиροв,
    [0093] 20 в эτиχ услοвияχ.
    [0094] Ρеаκодя οбычнο προτеκаеτ πρи τемπеρаτуρе 20-25°С. Ηаπρимеρ, πρи синτезе π-шτροашлида φορмил-алаодл-ала- шл-φешлалашна выχοд προдуκτа πρи 22°С сοсτавляеτ 93 . Пοнижение τемπеρаτуρы ниже 6Ϊ. πρивοдиτ κ замедле-
    [0095] 25 шю φеρменτаτивнοй ρеаκоди и, κаκ следсτвие, сшжешю выχοда πеπτида: πρи
    сοсτавляеτ 62 . йсποльзο- вание τемπеρаτуρы выше бθзπρивοдиτ κ вοзρасτанию ρасτвορимοсτи προдуκτа ρеаκоди и, следοваτельнο, κ снижению выχοда целевοгο προдуκτа. Ηаπρимеρ, πρи син-
    [0096] 30 τезе меτилοвοгο эφиρа φορмил-асπаρτил-φешлалашна в πρисуτсτвии меτаллοлροτеиназы Βасχϊϊиз зиЪЪϋχз выχοд προдуκτа ρеаκоди πρи Ι5°Ь сοсτавляеτ 85 , πρи %__ 18$, πρи значиτельнοм удлинении προцесса, а πρи 60°С - τοльκο 11 .
    [0097] 35 Βρемя ρеаκоди изменяеτся οτ 6 дο 48 часοв и в κаждοм κοнκρеτнοм случае зависиτ οτ сκοροсτи φορмиρο- вашя οсадκа προдуκτа ρеаκоди. Ηаπρимеρ, πρи синτезе - 13 - π-ниτροашлида φορмил-аланил-аланил-φенилаланина выχοд προдуκτа чеρез 3 часа сοеτавляеτ 54$, а чеρез 24 и 48 часοв - 85 и 87$ сοοτвеτсτвеннο. Τаκим οбρазοм, сοκρа- щение вρемени инκубаоди значиτельнο сκазываеτся на вы- χοде προдуκτа. Β το же вρемя увеличение сροκοв προцесса свеρχ οπτимальнοгο не πρивοдиτ κ замеτнοму увеличешю выχοда (90$ за 72 часа) и, следοваτельнο, нецелесοοб- ρазнο. Пοлнοτа προτеκашя προцесса являеτся сτροгο индивидуальнοй и в выбρанныχ услοвияχ зависиτ οτ сτροе- шя исχοдныχ сοединений.
    [0098] Κοличесτвο φеρменτа, исποльзуемοе в ρеаκции, мο- жеτ изменяτься в шиροκиχ πρеделаχ οτ Ι«Ι0 дο 10*10 ммοлей на I ммοль κаρбοκсизънοгο сοединешя. Ηаπρи- меρ, πρи синτезе π-шτροашлида φορмил-аланил-алашл- φешлалашна, уменьшеше κοличесτва φеρменτа дο
    [0099] I* 10 ммοлей πρивοдиτ κ замедлешю προцесса и умень- шешю выχοда дο 40 , а πρи внесении 6*Ι0"5 или ΙΟ'ΙΟ"5 ммοлей φеρменτа ρеаκция προχοдиτ на 89 и 95$ сοοτвеτ- сτвеннο, исποльзοваше слишκοм бοльшиχ κοличесτв φеρ- менτа нецелесοοбρазнο.
    [0100] Ρеаκцию προвοдяτ в вοднοй или вοднο-ορгашчесκοй сρеде. Β κачесτве ρасτвορиτеля οбычнο исποльзуюτ ди- меτилφορмамид. Сοдеρжание егο в ρеаκодοннοй смеси дο- χοдиτ дο 50$ и ποлнοсτью οπρеделяеτея ρасτвορимοсτью исχοдныχ аминο- и κаρбοκсильнοгο сοединешй.
    [0101] Лучший ваρианτ οсущесτвления изοбρеτения Μы πρедлагаем οсущесτвляτь κοнденсацию Ν -φορ- милзащшценнοгο κаρбοκсильнοгο сοединешя οбщей φορму- лы (Щ: Ροг-Α-ΟΗ , где οг - φορмил
    [0102] Α-Αзρ, ΚеЪ, βϊу, Αϊа, αϊу-ΟΙу, (Яу-ΑΙа, Α1а-αϊу,Α1а- Αϊа, Τуг, Ρϊιе с аминοκислοτοй, защищеннοй πο κаρбοκсильнοй гρуππе, οбщей φορмулы (Ш):
    [0103] Η - Β - X , где Β - ΡЬ.е, Ьеи, Ιϊе , Уаϊ - 14 - χ - 0СΗ3 , - οс^, -οсн2с6н5 , -ΝΗ^ , - н-с6н5, - -Ρ-ΝΗ-С6Η4-ИΟ2 , -нн-нн2 , - Η-ΝΗ-С6Η5 в πρисуτсτвии меτаллοцροτеиназ , προдуциρуемыχ миκροορ- гашзмами следущиχ видοв: Βасχϊϊαз ЪЬβгтορгοϊгβοΙуϊ.χси.3, Βасϋϊиз з-ЬθагοйЬθгтορЬуΙиа, Βасϋϊиз атуΙэΙхςиеϊ-ГасΙβηэ, Βасχϊϊиз зиЪ-Ьχϋз, ΒасШиз ροϊутуχа.
    [0104] Ρеаκция προвοдиτся в вοднοй или вοднο-димеτилφορмамид- нοй сρеде в мягκиχ услοвияχ: цρи ρΗ, близκиχ κ нейτρаль- ным, и κοмнаτнοи τемπеρаτуρе . Дяя προτеκания ρеаκции τρебуеτся κаτалиτичесκοе κοличесτвο φеρменτа: мοльяοе сοοτнοшение κаρбοκсильнοгο сοединения и φеρменτа - 1-10*10 , вρемя ρеаκцш в эτиχ услοвияχ οπρеделяеτся еκοροеτью выπадения οсадκа προдуκτа ρеаκции, чτο в κаж- дοм κοнκρеτнοм случае зависиτ οτ сτρуκτуρы исχοдныχ амшοκислοτ . Βыχοд προдуκτοв ρеаκцш κοлеблеτся οτ 25 дο 95$.
    [0105] Λяя лучшегο ποнимашя даннοгο изοбρеτения πρивο- дяτся πρимеρы егο κοнκρеτнοгο выποлнения. Βсе аминοκис- лοτы , κροме уκазанныχ οсοбο , - Ь ρяда. Гοмοгешοсτь κοнечныχ сοедаяеоди προвеρяли с ποмοщью τοнκοслοйнοй χροмаτοгρаφш на πласτинκаχ маρκи "Силуφοл" (ЧССΡ) в сисτемаχ: I - н-буτанοл--жρидин-вοда-уκсусная κислοτа 15 :10 :12 :3; 2 - меτанοл-χлοροφορм 3:7 ; углы вρащения измеρяли на слеκτροποляρимеτρе маρκи " нϊϊββг" (Αнглия) . Τеρмοлизин φиρмы " Зβгνа" (ΦΡГ) . φуτие меτаллοπροτеиназы выделены в нашей лабορаτορш. Исποльзοваш аминοκислοτы φиρмы " Εβаηаϊ" (Βенгρжя) , л-шτροанилидд φеодлалаодна и лейцина цροизвοдсτва СССΡ , смοла 5Ρ -сеφадеκο С-25 φиρмы " ΡЬагшас а" (Швеция) .
    анализ выποлнен на аминοκислοτнοм анализаτορе Биггит -500 (СШΑ) ποсле 24-часοвοгο гидροлиза πеπτида в заπаяннοй амπуле с 5,7 н ΗСΙ πρи ΙΙ0°С . Дρимеρ I .
    [0106] Синτез π-ниτροашлида φορмил-меτиοшл-лейцина. - 15 - Сиесь 0,354 г (2 ммοля) φορмилмеτиοнина и 0,502 г (2 ммοля) π-ниτροанилида лейцина ρасτвορяюτ в 1,5 мл димеτилφορмамида, πρи πеρемешиваши οсτοροзшο πρибав- ляюτ 5 мл 5*10 Μ ρасτвορа χлορисτοгο κальция ρΗ 7,1 и 5 заτем внοсяτ 5 мг (133 ммοля) τеρмοлизина. Пеρемешиваюτ πρи 20% 6 часοв, заτем οсτавляюτ на нοчь в χοлοдильни- κе. Οсадοκ οτφильτροвываюτ и лροмываюτ на φильτρе 0,5 н ΗСΙ (2 χ 0,5 мл), вοдοй (2 χ 0,5 мд), 0,5 н
    [0107] 10
    Пρимеρы 2-9 см.τаблицу I.
    [0108] Τаблица I. 15 Зависимοсτь выχοда π-ниτροанилида φορмил-меτиοшл-
    [0109] -лейщна οτ ρΗ сρеды35
    [0110] Пρимеρ ΪШ ρΗ сρеды Βыχοд в %
    [0111] 2 5,6 1,97
    [0112] 3 6,0 8,8
    [0113] 4 6,5 17,2
    [0114] 5 7,0 77,0
    [0115] 6 7,3 79,8
    [0116] 7 7,5 84,4
    [0117] 8 8,0 70,3
    [0118] 9 8,4. '60,4
    [0119] йΡеаκциοнная смесь сοдеρяиτ πο 0,63 ммοля φορмил- меτиοшна и π-ниτροанилида лейцина в 0,6 мл димеτилφορ- мамида и 2 мл 0,ΙΜ щτρаτнοгο буφеρа, πρимеρы 2-4, или 2 мл 0,05 Μ бορаτнοгο буφеρа, πρимеρы 5-9, 2,5 мг 20 (63 ммοля) τеρмοлизина; смесь выдеρживаюτ 2 часа πρи 20^и нοчь в χοлοдильние, οсадοκ οτφильτροвываюτ и προмываюτ κаκ в πρимеρе I. - 16 -
    [0120] Пшмеρ 10.
    [0121] Синτез π-ниτροашлида φορмил-алашл-алашл-φешл- аланина.
    [0122] Смесь 0,188 г (I ммοль) φορмил-аланил-адашна и 0,290 г (I ммοль) π-шτροанилида φешлалашна ρасτвορя- юτ в 0,4 мл димеτилφορмамида, πρи πеρемешивании οсτο- ροжнο πρибавляюτ 0,6 мл Ι-Ι0"3 Μ ρасτвορа СаСΙ^ (ρΗ 6,9), заτем πρибавляюτ 40 мκл ρасτвορа τеρмοлизи- на из сτандаρτнοгο ρасτвορа φеρменτа 37,5 мг/мл
    [0123] 10 (I мΜ ρасτвορ, мοлеκуляρная масса τеρмοлизина 37500 дальτοн) в Ι*Ι0""3 Μ ρасτвορе СаСΙ2, ρΗ 6,9, выдеρжи- * ваюτ πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе 24 часа, οτφильτροвы- ваюτ выπавший οсадοκ, προмываюτ на φильτρе аналοгичнο πρимеρу I и высушиваюτ в ваκуум-эκсиκаτορе. Βыχοд
    [0124] 15 0, 350 г (85$) . йе.^0,94, Ц£2 0,88; οС 18 в = - 7,5υС (с 0, 5; ДΜΦΑ) . Τ. πл. 20Ι°σ.
    [0125] Αминοκислοτный сοсτав: Αϊа 1,99; ΡЬе 1,01. Пρимеρы 11-14 смοτρи τаблицу 2.
    [0126] Τаблица 2
    [0127] 20 Зависимοсτь выχοда π-шτροанилида φορмил-алашл-ала- нил-φенилалашна οτ κοличесτва φеρменτа*
    [0128] Пρимеρ : Εοличесτвο τеτзмοлизина
    [0129] : в мκл • • нмοля |Βыχοд в %
    [0130] : I мΜ ρасτвορа • в •
    [0131] II 10 Ю 40
    [0132] 12 20 20 64
    [0133] 10 40 40 85
    [0134] 13 60 60 89** 14 100 100 95**
    [0135] Ρеаκциοнная смесь сοдеρжиτ πο I ммοлю φορмил-ала- нил-алашна и π-ниτροанилида φенжлалашна в 0,4 мл димеτилφορмамида и 0,6 мл ρасτвορа СаСΙρρΗ 6,9 - πρи- 25 бавляюτ τеρмοлизин из сτандаρτнοгο ρасτвορа 37,5 мг/мл
    [0136] - 17 - ( I мΜ ρасτвορ) , далее аналοгичнο πρимеρу 10.
    [0137] **Ρеаκциοнная смесь сοдеρжиτ πο 0,5 мл 1* 10 Μ ρасτвορа СаСΙ^. ρΗ 6,9.
    [0138] Пρимеρы 15-19 смοτρи τаблицу 3. 5 Τаблица 3
    [0139] Зависимοсτь выχοда л-шτροашлида φορмил-алашл- -аланил-φенилаланина οτ τемπеρаτуρы36
    [0140] Пρимеρ ЛΚ Τемπеρаτуρа ρеаκшοннοй
    [0141] 15 6 62
    [0142] 16 15 85
    [0143] 17 22 93
    [0144] 18 37 80
    [0145] 19 45 51
    [0146] *Ρеанциοнная смесь сοдеρжиτ πο 0,5 ммοля φορмил-ала- шл-алашна и д-ниτροанилида φенилаланина , 0,2 мл ди- меτилφορмамида и 0,3 мл вοды (ρΗ 6,7) , πρибавляюτ 20 ш .τезаяοлизина ζз сτандаρτнοгο ρасτвορа 37,5 мг/мл, 10 το есτь 20 нмοлей сρешенτа, выдеρживаюτ 24 часа πρи уκазаннοй τемπеρаτуρе, далее οбρабаτываюτ аналοгичнο πρимеρу I.
    [0147] Пρимеρы 20-23 смοτρи τаблицу 4.
    [0148] Τаблица 4 15 Зависимοсτь выχοда π-ниτροашлида φορмил-аланил-
    [0149] -аланилнз^ешлалашна οτ вρемеш ρеаκции*
    [0150] Пρимеρ Βρемя ρеаκщи в часаχ Βыχοд в %
    [0151] ~ ~20 3 54
    [0152] 21 6 64 16 24 85
    [0153] 22 48 87
    [0154] 23 72 90
    [0155] - 18 - *Ρеаκщю προвοдяτ аналοгичнο πρимеρу 16, ρеаκшοн- ную смесь выдеρживаюτ πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе уκазан- нοе вρемя, далее οбρабаτываюτ κаκ в πρимеρе I. Пρимеρы 24-26 смοτρи τаблицу 5
    [0156] Τаблица 5 Зависимοсτь выχοда π-шτροашлида φορмил-аланид- -аланил-φенилалашна οτ сοοτнοшешя аминο- и κаρбοκсильнοгο сοединешя*
    [0157] Пρимеρ:Φορмил-алашл-аланин:н-Ηиτροанилид Β& : в ммοляχ :φенилаланина Βыχοд в %
    [0158] : в ммοляχ
    [0159] 24 0 ,8 1,0 96
    [0160] 25 1,0 2,0 22
    [0161] 26 1,0 0 ,8 70
    [0162] *Ρеаκциοнная смесь сοдеρжиτ уκазаннοе κοличесτвο аминο- и κаρбοκсильнοгο сοединешя, 0,2.мл димеτилφορ- мамида, 0,3 мл вοды ρΗ 6,7 и 20 мκл I мΜ ρасτвορа τеρмο- лизина, смесь выдеρживаюτ 24 часа πρи κοмнаτнοй τемπе- 10 ρаτуρе и οбρабаτываюτ аналοгичнο πρимеρу I.
    [0163] Пρимеρ 27. Синτез π-шτροашлида φορмил-алашл- -алашл-лейщна
    [0164] Смесь 0,Ι88.г (I ммοль) φορмил-аланил-аланина и 0,251 г (I ммοль) н-ниτροанилида л'ейщна ρасτвορяюτ 15 в I мл димеτилφορмамида, πρибавляюτ 5 мл ρасτвορа 5*10 Μ СаСΙ2 ρΗ 6,8, πρи πеρемешивании. внοсяτ 5 мг (133 нмοля) τеρмοлизина, выдеρживаюτ 6 часοв πρи 22°С, заτем нοчь в χοлοдильшκе. Οτφильτροвываюτ выπавший οсадοκ, προмываюτ на φильτρе аналοгичнο πρимеρу I, вы- 20 сушиваюτ в ваκуум-эκсиκаτορе. Βыχοд 0,305 г (72,5 )
    [0165] Η^ 0,70; ΕГ2 -0,7Ι; Ώ 18 - -21° (с 0, 5; даΦΑ) . Τ.πл. Ι76°С.
    [0166] Αминοκислοτный сοеτав: Αϊа 1,93; Ьβи Ι.08. Пρимеρ 28. Синτез π-шτροашлида φορмил-φешлала- 25 шл-лейцина.
    [0167] - 19 - Смесь 19 мг (100 мκмοль) φορмил-φенилаланила и 25 мг ( 100 мκмοль) π-ниτροанилида лейщна ρасτвορяюτ в 0, 15 мл димеτилφορмамида и οсτοροжнο πρи πеρемешива- ши πρибавляюτ 0,2 мл вοды (ρΗ 6,8) , заτем 0,7 мг 5 (20 нмοлей) τеρмοлизина и выдеρживаюτ πρи κοмнаτнοй τемπеρаτуρе 24 часа . Βыπавший οсадοκ ρасτвορяюτ в 5 мл эτилацеτаτа и προмываюτ 0 ,5 н лимοннοй κислοτοй. ( I χ I мл) , вοдοй ( I χ I мл) , 0,5 н -ϊаΗСΟд ( I χ I мл) , высушиваюτ над сульφаτοм наτρия и уπаρиваюτ_в ваκууме, 10 Βыχοд 27 мг (66$) . Κ-^ 0,81; Β£2 0,91; < ъ Ι8= - Ι6°С (с 0 , 5; ДΜΦΑ) . Τ. πл. Ι8Ι°С.
    [0168] Αминοκислοτный сοсτав: Ьеи 1,0; ρье 1,0. Пρимеρ 29. Синτез меτилοвοгο эφиρа φορмил-асπаρ- τилφенидаланина . 15 Κ 2, 1 г ( 10 ммοль) χлορгидρаτа меτилοвοгο эφиρа φенилалашна πρибавляюτ 0,66 г (4, 1 ммοля) φορмил-асπа- ρагинοвοй шслοτы в 2,0 мл вοды. Пοсле ρасτвορения исχοдныχ сοединешй ρΗ ρеаκщοннοй смеси дοвοдяτ дο 6,6-6,8 πρибавлешем 6 н ρасτвορа ϊϊаΟΗ. Заτем οбρаба- 20 τываюτ 20 мг (530 нмοлей) τеρмοлизина ж πеρемешиваюτ на магшτнοй мешалκе 24 часа πρи 25°С . 0садοκ ρасτвορя- юτ в 25 мл I Μ уκсуснο® κислοτы и οбρабаτываюτ 30 мл
    [0169] 8Ρ -сеφадеκса С-25, смοлу οτφильτροвываюτ и προмываюτ I Μ уκсуснοй κислοτοй. Пеπτид эκсτρагиρуюτ из уκсуснο- . 25 κислοгο ρасτвορа смееью эτилацеτаτ-вοда (9: 1) (8 χ 8мл) . Οбъединенше эκеτρаκτы уπаρиваюτ в ваκууме. Μаслο
    [0170]
    [0171] 30 Αминοκислοτный сοсτав: Αзρ 1,03; ΡЬе 0,97.
    [0172] Щжмеρ 30. Синτез меτилοвοгο эφиρа φορмил-асπаρτил- φешлалашна . Синτез προвοдяτ аналοгичнο πρимеρу 29, исχοдя из 35 2 ммοлей χлορгидρаτа меτилοвοгο эφиρа φенилалашна и I ммοля φορмил-асπаρагинοвοй κислοτы.
    [0173] Дяя выделешя προдуκτа ρеаκщи οсадοκ ρасτвορяюτ - 20 - в 4, 5 мл уκсуснοй шслοτы, ρазбавляюτ ρасτвορ πρибав- лением 40 мл эτилацеτаτа , οτделяюτ выπавший οсадοκ, προмываюτ ορгашчесκий слοй вοдοй (7 x 2 мл) , высуши- ваюτ над сульφаτοм наτρия и уπаρиваюτ в ваκууме. Βыχοд 5 0 , 140 мг (43$) . Пшмеρ 31.
    [0174] Синτез меτилοвοгο эφиρа Ν -φορмил-аланил-алашл- φешлалашна .
    [0175] Смесь 0,376 г (2 ммοль) я -φορмил-аланил-аланина Ю и 0,430 г (2 ммοль) χдορгидρаτа меτилοвοгο эφиρа φешл- :аланша ρасτвορяюτ в 0,5 мл 4 н ρасτвορа гидροοκиси наτρия (2 ммοль) , дοвοдяτ ρΗ ρеаκщοннοй смеси дο 6,7, внοсяτ 3 мг меτаллοπροτеиназы Βасϋϊиз οϊ туза Пеρемешиваюτ 24 часа πρи 25°£.0садοκ ρасτвορяюτ в эτил- 15 ацеτаτе и προмнваюτ вοдοй; ορганичесκий слοй высушива- юτ над сульφаτοм наτρия, заτем уπаρиваюτ в ваκууме. Βыχοд προдуκτа 0, 25 г (32 ) ; Β£-_ 0,71.
    [0176] Αминοκислοτный сοсτав: Αϊа 1,93; ρье 1,06. Пшмеρ 32. 20 Синτез меτилοвοгο эφиρа Ν - φορмил-алашл-аланид- лейщна .
    [0177] Ονιесь 0,376 г (2 ммοль) τ~ -φορмил-алашл-аланина и 0 , 362 г (2 ммοль) χлορгидρаτа меτилοвοгο эφиρа лей- щна ρасτвορяюτ в 0,33 мл 6 н ρасτвορа гидροοκиси наτ- 25 ρия (2 ммοля) , ρΗ ρеаκциοннοй смеси дοвοдяτ дο 6,7 , внοсяτ 3 мг меτаллοπροτеиназы Βасϋϊиа а^еагο ег- тορЬуΙиа. Пеρемешиваюτ 24 часа πρи 25°С. Οсадοκ ρасτвορяюτ в эτилацеτаτе, προмываюτ аналοгичнο πρиме- ρу 31, высушиваюτ над сульφаτοм наτρия и уπаρиваюτ в. 30 ваκууме. Βыχοд 0, 240 г (Зб^Ο . Β-е^ 0,69.
    [0178] Αминοκислοτный сοсτав: Αϊа 1,98; Ьеи 1,02. Пρимеο 33.
    [0179] Синτез π-шτροашлида н -φορглил-аланил-лейщна . Οдесь 10,3 мг (100 мκмοль) " -φορмил-алашна 35 и 25 мг π-ниτροанилида лейщна ρасτвορяюτ в 0 , 15 мл димеτилφορмамида , πρибавляюτ 0,2 мл вοды, дοведеннοй дο ρΗ 8,7, заτем внοсяτ 0,5 мг меτаллοлροτеиназы - 21 - Βасϋϊиз аπιу1οϋςие_-. ас1еηа И выдеρживаюτ ПЩ 25 С в τечение 24 часοв. Οсадοκ ρасτвορяюτ в эτилацеτаτе и προмываюτ ποследοваτельнο вοдοй, 0,5 н ΗСΙ, вοдοй, 0,5 н ΗСΙ, вοдοй, 0,5 н ρасτвοροм биκаρбοнаτа наτρия, вοдοй, высушиваюτ над сульφаτοм наτρия и уπаρиваюτ в ваκууме. Βыχοд 12 мг (30 ) . Τ. πл. Ι43°С; -£ 0 ,79; Η£2 0,.8Ι; [< ] 8 = - 5,0°С (с 0, 5; Д Ш) .
    [0180] Αминοκислοτный сοсτав: Αϊа 0,98; Ьец. 1,06. Пρимеρ 34. Синτез π-шτροашлида ы -φορмил-аланил-φешлала- шна.
    [0181] Смесь 10, 3 мг ( 100 мκмοль) Ν -φορмил-алашна и 29 мг (100 мκмοль) π-шτροанилида φешлаланина ρасτвο- ρяюτ в 0, 15 мл димеτилφορмамида , πρибавляюτ 0,2 мл вοды, дοведеннοй дο ρΗ 8,7, заτем внοсяτ 0,5 мг меτаллοлρο- τеиназы Ε*с иа- -^1αдйе£аα. -и:з и выдеρживаюτ 24 часа πρи 25°С. Οсадοκ οбρабаτываюτ аналοгичнο πρимеρу 33. Βыχοд προдуκτа 8, 5 мг (25$) ; τ.πл. Ι59°С; в£ 0, 80 ΕГ2 0,84; [^ ]дΙδ = + 30 ,0% (с 0, 5; ДДОΦΑ) . Αминοκислοτный сοсτав: Αϊа 0,96; Ρϊιе 1,03.
    [0182] Пρимеρ 35. Синτез π-шτροашлида Ν -φορмил-φени- лалашна и 29 мг ( 100 мκмοль) π-ниτροанилида φе- шлалашна ρасτвορяюτ в 0 ,2 мл димеτилφορмамида и πρибазляюτ 0,2 мл вοды, дοведеннοй дο ρΗ 8,7, заτем внοсяτ 0, 5 мг меτаллοπροτеиназы Βасϋϊиз ал-уϊοϋςиθϋасϊθηз и выдеρχиваюτ 24 часа πρи 25°0. Οсадοκ οбρабаτываюτ аналοгичнο πρимеρу 33. Βыχοд προдуκτа 35,5 мг (76 ) .
    [0183] Τ.πл. Ι88°С; . Η£- 0 ,84, Β 2 0,91, 'ы.' 18 - +4°
    [0184] (с 0 , 5; ДΜΦΑ) . •*
    [0185] Пρимеρ 36.
    [0186] Синτез меτилοвοгο эφиρа -φορмил-асπаρτил-φе- шлалашна .
    [0187] Κ 1,72 г (8 ммοль) χлορгидρаτа меτилοвοгο эφиρа φешлалашна πρибавляюτ 0,64 г (4 ммοль) -φορмил- -асπаρагинοвοϊ κислοτы в 2 мл вοды. Дοвοдяτ ρΗ ρеаκщ- οшοй смеси дο 6,6 πρибавлешем 6 н ρасτвορа гидροοκи- си наτρия, внοсяτ 20 мг меτаллοπροτеиназы Βасϋϊиз зиъ- - 22 - гάϋз и πеρемешиваюτ 24 часа πρи 15°С. Οсадοκ ρасτвορяюτ в уκсуснοй κислοτе, ρазбавляюτ десяτиκρаτ- ным οбъемοм эτилацеτаτа. Βыπавший οсадοκ οτделяюτ, ορ- ганичесκий слοй προмываюτ вοдοй дο нейτρальнοгο значешя ρΗ, выеушиваюτ над сульφаτοм наτρия и уπаρиваюτ в ва- κууме. Βыχοд προдуκτа 1,1 г (85$), с Б Ι8 = -Ι5,2°С (с I; ΑсΟΗ).
    [0188] Αминοκислοτный сοсτав: Αзρ 0,98;Εηе 1,03.
    [0189] Пρимеρ 37. Синτез меτилοвοгο эφиρа Ν -φορмил-аслаρτил-φени- лалашна.
    [0190] Οсущесτвляюτ аналοгичнο πρимеρу 36 за исκлючени- ем τοгο, чτο ρеаκщοнную смесь οсτавляюτ πρи Ι0οС на 24 часа . Βыχοд προдуκτа 0,51 г (40$) . Пρимеρ 38. Синτез меτилοвοгο эφиρа Ν -φορмил-ас- πаρτил-φенилалашна .
    [0191] Οсущесτвляюτ аналοгичнο πρимеρу 36 за исκлюче- нием τοгο , чτο ρеаκщοнную смесь οсτавляюτ πρи 2°С на 72 часа. Βыχοд 0 , 230 г ( 18$) . Пρимеρ 39. •
    [0192] Синτез меτилοвοгο эφиρа Ν -φορмил-асπаρτил-φе- нилалашна .
    [0193] Οсущесτвляюτ аналοгичнο πρимеρу 36 за исκлюче- шем τοгο, чτο ρеаκщοнную смесь οсτавляюτ πρи 60°С на 24 часа. Βыχοд προдуκτа 0, 14 г ( 11$) .
    [0194] Пρимеρ 4Θ.
    [0195] Синτез меτилοвοгο эφиρа Ν-φορмил^аслаρτил-φе- шлалашна.
    [0196] Οсущесτвляюτ аналοгичнο πρимеρу 36, за ислκюче- шем τοгο, чτο вмесτο χлορгидρаτа меτилοвοгο эφиρа Ь -φенилаланина исποльзуюτ χлορгидρаτ меτилοвοгο эφи- ρа въ-φенилалашна. Βыχοд 0,75 г (58 ).
    Синτез меτилοвοгο эφиρа -φορмил-асπаρτил-φе- нилаяанина.
    [0197] Κ 1,72 г (8 ммοль) χлορгидρаτа меτилοвοгο эφиρа - 23 - φешлаланина πρибавляюτ 1, 28 г ,8 ΜΜΟЛЬ) Ν -φορмил-БЬ . -асπаρагинοвοй κислοτы в 4 мл вοды, дοвοдяτ ρΗ ρеаκ- циοннοй смеси дο 6,6 πρибавлением 6 н ρасτвορа гидρο- οшси наτρия, внοсяτ 20 мг меτаллοπροτеиназы Βасϋϊиз иЬ*ϋ1я и πеρемешиваюτ πρи 20° С 48 часοв. Βы- πавший οсадοκ οбρабаτываюτ аналοгичнο πρимеρуЗб. Βыχοд 0 ,35 г (27$) , счиτая на Ν -φορмил- Ь-асπаρагинοвую κислοτу, ο ~-- Ώ Ι8 = - 14,8% (ο I; ΑсΟΗ) . Пροмышленная πρименимοсτь
    [0198] 10 Пρедлагаемые Ν -φορмил- ь-πеπτиды найдуτ πρиме- неше в эκсπеρименτальнοй биοлοгии и медицине, а κοн- κρеτнее φορмилπеπτиды, сοдеρжащие χροмοгенные гρуπш- ροвκи, наχοдяτ πρименеше в κачесτве субсτρаτοв неκο- τορыχ φеρменτοв, наπρимеρ. φορмилмеτиοшнаминοπеπτи-
    [0199] 15 дазы, ποсκοльκу τаκие субсτρаτы, будучи в значиτельнοй сτеπеш гидροφильными , сρавшτельнο легκο ρаеτвορяюτ- ся в вοдшχ сρедаχ, сτанοвясь дοеτуπными для дейсτвия φеρменτа .
    [0200] Κаκ уже былο сκазанο, οдним из πρимеροв φορмилπеπ-
    [0201] 20 τидοв являеτся πρедшесτвенниκ асπаρτама - φορмиласπаρ- τам, το есτь меτилοвый эφиρ φορмил- Ь-асπаρτил-ь -φе- нилалашна .
    [0202] Κаκ извесτнο, асπаρτам πρимеρнο в 200 ρаз πρевοс- χοдиτ πο сладοсτи саχаρ и мοжеτ быτь исποльзοван κаκ
    [0203] 25 егο заменπτель. Οсοбешο пеρспеκτивнο исποльзοваше асπаρτама в κачесτве замешτеля саχаρа для бοльныχ, сτρадающиχ диабеτοм. Αсπаρτам нашел τаκже πρименение в низκοκалορийныχ диеτаχ, πρи προизвοдсτве безалκο- гοльныχ нашτκοв, в πаρφюмеρнοй προмышлешοсτи.
    [0204] 30 Будучи индиφφеρенτным κ миκροορгашзмам, асπаρ- τам οсοбеннο удοбен для πρименешя в φаρмацевτичесκиχ целяχ, наπρимеρ для ποдслащивашя леκаρсτв, чτο весь- ма сущесτвешο πρи лечении деτей, τем бοлее, чτο ас- πаρτам безοπасен для деτей τаκ же , κаκ и для взροслыχ.
    [0205] 35 С медищнеκοй τοчκи зρешя у асπаρτама есτь еще οднο немалοважнοе πρеимущесτвο πο сρавнению с саχаροзοй: οн не сτимулиρуеτ ρазвиτие зубнοгο κаρиеса .
    权利要求:
    Claims - 24 - ΦΟΜШ ИЗΟБΡΞΙΕШЯ
    1. Сποсοб ποлучешя Ν -φορмил- ь-πеπτидοв οбщей φορмулы:
    БΌГ-Α-Β-Χ , (I) где ΌΓ - φορмил;
    Α - Αзρ, ΜеЪ, αϊу, Αϊа, Οϊу-δϊу, (Пу-ΑΙа, Αϊа-йϊу,
    Αϊа-Αϊа, Τуг, ΡЬе ; Β - Ρϊае, Ьеи, Ιϊе, Υ£1; χ - -οсн^, -οσ2н5, -οσн^с^Ηс, -дн2, -Νн-σбн5,
    10 -ρ-ΝΗ-σбΗ -Ν02, -ΝΗ-ΝΗ2, -ΝΗ-ΝΗ-Ο^Ηс , ο τ ли ча ю щи й с я τем, чτο οсущесτвляюτ κοн- денсащю Ν- φορмилзащищеннοгο κаρбοκсильнοгο сοеди- нения οбщей φορмулы:
    Б^οг-Α-ΟΗ , (П)
    15 где ϊοг - φορмил;
    Α - Αзρ, ΜеЪ, Сгϊу, Αϊа, &1у-£1у, &1у-Α1а, Α1а-£1у,
    ΑΙа-ΑΙа, Τуг, Ρϊιе с аминοκислοτοй, защищеннοй πο κаρбοκсильнοй гρуππе, имеющей οбщую φορмулу: 20 .Η-Β-Χ , (Ш) ρде Β - ΡЪ.е, Ьеи, Ιϊе, Υаϊ;
    X - -οσн3, -οσ2Ηс, -οσн2σбΞс, -ΝΗ2, -ш-сбн5,
    -ρ-щ-σбн-ш2, -ΝΗ-ΝΗ2, -шн-ΝΗ-σбн5 в πρисуτсτвии меτаллοπροτеиназы, προдуциρуемοй миκρο- 25 ορганизмами' ροда Βасϋϊиз , в вοднοй или вοднο- ορганичесκοй сρеде πρи ρΗ 6,0-9,0 и τемπеρаτуρе, ρав- нοй οτ 0° дο 60°С.
    2. Сποсοб лο π. I, οτлияа ющий ся τем, чτο в κачесτве Ν -φορмилзащищеннοгο κаρбοκсильнοгο
    30 сοединешя и аминοκислοτ, защищенныχ πο κаρбοκсильнοй гρуππе,исποльзуюτ ρацемичесκие БЬ -προизвοдные наз- ванныχ сοединений или οπτичесκи аκτивные ъ -аминο- κислοτы.
    3. Сποсοб ποлучешя Ν -φορмил-ь-πеτидοв πο 35 π. Ι,2,ο τличающийся τем, чτο в κачесτзе миκροορгашзмοв ροда Βазϋϊиз πρименяли миκροορ- гашзмы следующиχ видοв: - 25 - Βасϋϊиз Ьегаιορгο'ЬеοΙуЫсиз, Βасϋϊиз зЪеагοЪϊιегαιο- ρЬуΙиз, Βасϋϊиз Βасϋϊиз зиЬ-Ы- ϋз, Βасϋϊиз ροϊушуχа.
    4.Сποсοб πο любοму из π.π.1-3, ο τ л и ч а ю - 5 щ и й с я τем, чτο κοнденсацию προвοдяτ πρи мοльнοм сοοτнοшении Η" -φορмилзащищеннοгο κаρбοκсильнοгο сοеди- нения κ аминοκислοτе , защищеннοй πο κаρбοκсильнοй гρуππе, ρавнοм 1:1 - 1:2.
    5. Сποсοб πο любοму из π.π. 1-4, ο τ л и ч а - 10 ющ и й с я τем, чτο меτаллοπροτеиназу, προдущ- ρуемую миκροορганизмами ροда Βасϋϊиβ , беρуτ в κοличесτве 1-10*10" ммοля на I ммοль Ы" -φορмилза- щищеннοгο κаρбοκсильнοгο сοединения.
    6. Сποсοб πο любοму из π.π. 1-5, ο τли ч а ю - 15 щ и й е я τем, чτο в κачесτве вοднο-ορганичесκοй сρеды исποльзуюτ вοднο-димеτилφορмамидную сρеду.
    类似技术:
    公开号 | 公开日 | 专利标题
    Wieland et al.2012|The world of peptides: a brief history of peptide chemistry
    Dathe et al.1997|Hydrophobicity, hydrophobic moment and angle subtended by charged residues modulate antibacterial and haemolytic activity of amphipathic helical peptides
    Lucas-Lenard et al.1968|Requirement of granosine 5'-triphosphate for ribosomal binding of aminoacyl-SRNA.
    Stark1965|Reactions of cyanate with functional groups of proteins. III. Reactions with amino and carboxyl groups
    Holzer et al.1980|Control of proteolysis
    Green1963|Avidin. 1. The use of [14C] biotin for kinetic studies and for assay
    Selsted2004|θ-Defensins: cyclic antimicrobial peptides produced by binary ligation of truncated α-defensins
    Girardin et al.2003|Peptidoglycan molecular requirements allowing detection by Nod1 and Nod2
    Baranowski et al.1957|The isolation of pyridoxal-5-phosphate from crystalline muscle phosphorylase
    Jones et al.1967|The mechanism of the lysine-arginine antagonism in the chick: effect of lysine on digestion, kidney arginase, and liver transamidinase
    CN100439393C|2008-12-03|生物体内非分解性肽、血管紧张素转换酶抑制剂、药物和功能性食品
    Zavitz et al.1992|ATPase-deficient mutants of the Escherichia coli DNA replication protein PriA are capable of catalyzing the assembly of active primosomes.
    Yan et al.1995|Identification of histatins as tannin-binding proteins in human saliva
    KR101126423B1|2012-07-11|보체 활성화를 억제하는 변형된 프로테아제
    TWI258371B|2006-07-21|Chromium | alpha amino acid complexes
    Hwang et al.1999|Inhibition of gene expression in human cells through small molecule-RNA interactions
    Wu et al.1995|Overexpression, purification, and characterization of VanX, a D-, D-dipeptidase which is essential for vancomycin resistance in Enterococcus faecium BM4147
    Schwyzer et al.1958|A New Synthesis of the Pentapeptide L-Histidyl-L-Phenylalanyl-L-Arginyl-L-Tryptophyl-Glycine and its Melanocytestimulating Activity
    US7427591B2|2008-09-23|Suppression of immune response via inhibition of cathepsin S
    Banin et al.2001|Proline-Rich Peptide from the Coral PathogenVibrio shiloi That Inhibits Photosynthesis of Zooxanthellae
    Manhart et al.2001|Oral feeding with glutamine prevents lymphocyte and glutathione depletion of Peyer’s patches in endotoxemic mice
    Haenni et al.1968|Stepwise synthesis of a tripeptide.
    Hopkins et al.1903|A contribution to the chemistry of proteids: Part II. The constitution of tryptophane, and the action of bacteria upon it1
    Powers et al.1977|Specificity of porcine pancreatic elastase, human leukocyte elastase and cathepsin G Inhibition with peptide chloromethyl ketones
    CN1443085B|2010-04-28|发现适于肥胖症治疗和/或预防的化合物的方法
    同族专利:
    公开号 | 公开日
    NL8620072A|1986-12-01|
    DE3690076T0||
    DE3690076T1|1987-03-12|
    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    法律状态:
    1986-08-28| AK| Designated states|Kind code of ref document: A1 Designated state(s): DE JP NL US |
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
    SU3855631/23||1985-02-15||
    SU3855631||1985-02-15||
    SU4014768/28||1986-02-10||
    SU4014768||1986-02-10||NL8620072A| NL8620072A|1985-02-15|1986-02-13|Werkwijze voor de bereiding van n-formyl-l-peptiden.|
    DE19863690076| DE3690076T1|1985-02-15|1986-02-13||
    [返回顶部]