• 专利附录
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  • 法律状态
  • 优先权
    • 专利摘要:

    公开号:WO1985005633A1
    申请号:PCT/DE1985/000191
    申请日:1985-05-30
    公开日:1985-12-19
    发明作者:Detlef Wilke；Alfred Weber
    申请人:Schering Aktiengesellschaft；
    IPC主号:C12P17-00
    专利说明:
    [0001] Verfahren zur Herstellung von Oiianoclavin
    [0002] Die Erfindung betrifft das in dem Patentanspruch gekennzeichnete Verfahren.
    [0003] Chanoclavin = 2-Methyl-3-[l,3,4,5-tetrahydro-4-(methylamino)- benz(cd)-indol-5-yl]-2-propen-l-ol ist bekanntlich eine Vorstufe zur Biosynthese pharmakologisch wirksamer Ergot- a kaloide und kann unter anderem zur Herstellung pharmakologisch wirksamer Verbindungen verwendet werden. (3. Med. Chem., 17, 1974, 300).
    [0004] Es wurde gefunden, daß ein Pilzstamm Claviceps spec. Chanoclavin in hohen Ausbeuten und praktisch frei von anderen Ergot- alkaloiden in das Kulturmedium ausscheidet. Dieser Stamm Claviceps spec. wurde aus einem Mutterkorn einer wild wachsenden Trespe (Bromus) isoliert. Er hat die interne Bezeichnung SCHERING, MBCE 373113 und ist bei der deutschen Sammlung für Mikroorganismen unter der Nummer DSM 2837 hinterlegt. Der Stamm bildet auf Agarmedien mit Glucose oder Saccharose als Kohlenstoffquelle und Asparagin, Ammoniumsuccinat oder Ammoniumeitrat als Stickstoffquelle kompakte, stark gefaltete, weiße im Alter rötliche Kolonien die aus Hyphen bestehen, die im Alter stark lichtbrechende Vakuolen aufweisen.
    [0005] Die Hyphen haben einen Durchmesser von 3 bis 4 μ . Konidien werden nicht gebildet. Der Koloniendurchmesser beträgt nach 10 Tagen Kulturzeit 3 bis 4 cm und nach 20 Tagen Kulturzeit 6 bis 7 cm.
    [0006] Das erfindungsgemäße Verfahren wird unter Bedingungen durch¬ geführt, die man üblicherweise zur Anzucht von Pilzkulturen für eine Stoffwechselsynthese anwendet. So werden zunächst in allgemein üblichen Vorversuchen die günstigsten Fermenta¬ tionsbedingungen, wie z.B. die Auswahl des günstigsten Nähr- Das erfindungsgemäße Verfahren wird unter Bedingungen durch¬ geführt, die man üblicherweise zur Anzucht von Pilzkulturen für eine Stoffwechselsyπthese anwendet. So werden zunächst in allgemein üblichen Vorversuchen die günstigsten Fermenta- tionsbedinuπgen, wie z. B. die Auswahl des günstigsten Nähr¬ mediums, der technischen Bedingungen wie Temperatur, Belüftung pH-Wert und der optimalen Zeiten für die Germination und die Entwicklung des Mikroorganismus ermittelt.
    [0007] Als Kohlenstoffquelle kann für das Fermentationsmedium bei¬ spielsweise Glucose oder Saccharose verwendet werden. Als Stickstoffquelle dient unter anderem Asparagin, Ammoniumsuccinat oder Ammαniumcitrat. Ferner enthält das Medium die nötigen Wuchsstoffe (beispielsweise Hefeextrakt) und Mineralstoffe (Kalium-, Magnesium-, Kalzium-, Eisen- und Zink-Kationen, sowie Sulfat, Phosphat und Nitrat-Anionen in der üblicherweise angewendeten Konzentration.
    [0008] Die Fermentation kann ein- oder zweistufig erfolgen, wobei das für die Vorkultur verwendete Medium mit dem der Haupt¬ kultur identisch sein oder von diesem verschieden sein kann. Anzucht und Vermehrung erfolgen vorzugsweise bei einer niederen Konzentration an Kohlenstoffquelle (10 bis 100 g/1), die Chanoclavin-Erzeugung selbst vorzugsweise bei höherer Kon¬ zentration an Kohlenstoffquelle (100 bis 300 g), wobei als Kohlenstoffquelle vorzugsweise Glucose verwendet wird.
    [0009] Zu Beginn der Fermentation wird der pH-Wert des Mediums vorzugsweise in einem Bereich von 4 bis 6 eingestellt. Die Züchtungstemperatur liegt im Bereich von etwa 10 bis 35° C, vorzugsweise im Bereich von 20 bis 30° C. Die Kultur¬ bedingungen sind streng aerob. Die optimale Fermentations¬ zeit wird durch Analyse des gebildeten Chanoclavins in üb¬ licher Weise ermittelt. Nach erfolgter Fermentation wird das gebildete Festuclavin in an sich bekannter Weise isoliert, beispielsweise indem man die Fermentationsansätze mit einem nicht mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, wie Ethylacetat, Methyliso- butylketon, Dichlormethan, Chloroform oder Tetrachlorethan extrahiert, die Extrakte einengt und das erhaltene Rohprodukt durch Chromatographie und/oder Kristallisation reinigt.
    [0010] Das nachfolgende Ausführungsbeispiel dient zur Erläuterung des erfindungsgemäßen Verfahrens.
    [0011] B eis piel
    [0012] Claviceps spec. DSM 2837 wird auf einem Nährmedium angezüchtet, welches folgende Komponenten enthält:
    [0013] Saccharose (100 g/1), Citronensäure (10 g/1), Hefeextrakt (0,1 g/1), Kaliumhydrogenphosphat (500 mg/1), Magnesiu - sulfat-Heptahydrat (300 mg/1), Ammoniumsulfat (69 mg/1), Calciumnitrat-Tetrahydrat (1 g/) , Eisensulfat-Heptahydrat (7 mg/1), Zinksulfat-Heptahydrat (6 mg/1). Das Nährmedium ist auf pH 5,1 eingestellt. Die Anzuchtskultur wird 14 bis 28 Tage lang bei 30° C im Brutschrank aufbewahrt.
    [0014] Ein ca. 1 cm2 großes Mycelstück wird mittels eines Ultraturrax unter sterilen Bedingungen in 5 ml physiologischer Kochsalz¬ lösung zerkleinert und damit 50 ml eine Vorkultur enthaltend Glucose(50g/1) , Citronensäure(7, 5 g/1), Kaliumdihydrogenphos- phat (500 mg/1), Magnesiumsulfat-Heptahydrat (300 mg/1), Ammoniumnitrat (6 g/1), Calziumnitrat-Tetrahydrat (1 g/1), Zinksulfat-Heptahydrat (6 mg/1), Eisen(II)-sulfat-Heptahydrat (7 mg/1), Hefeextrakt (100 mg/1) - eingestellt auf pH 5,1 - die sich in einem 500 ml Erlenmeyerkolben befindet, beimpft und auf einem Rundschüttler 4 Tage lang bei 24° C und 220 Umdrehungen pro Minute kultiviert.
    [0015] 5 ml der so erhaltenen Vorkultur werden in 50 ml eines Me¬ diums enthaltend Saccharose (200g/l), Citronensäure (10 g/1), Hefeextrakt (0,1 g/1), Kaliumdihydrogenphosphat (500 mg/1), Magesiu sulfat-Heptahydrat (300 mg/1), Ammαniumsulfat (6 g/1), Calciumnitrat-Tetrahydrat (1 g/1), Eisensulfat-Heptahydrat (7 mg/1) und Zinksulfat-Heptahydrat (6 mg/1) - eingestellt auf pH 5,1 - die sich in einem 500 ml Erlenmeyerkolben be¬ findet, überführt und 9 Tage lang bei 24° C auf einem Rund¬ schüttler mit 240 Umdrehungen pro Minute geschüttelt. Dann wird das Kulturmedium abfiltriert und der Gehalt an Chanoclavin mittels der van Urk 's-Reaktion (Mikrochim. Acta, 1959, 619-630) fotometrisch ermittelt. Die Konzentration des Kulturfiltrates beträgt 390 mg/1. Dünnschichtchro ato- graphisch sind keine weiteren Ergotalkaloide nachweisbar.
    权利要求:
    Claims

    Patentanspruch
    Verfahren zur Herstellung von Chanoclavin, dadurch gekennzeich. net, daß man den Mikroorganismus Claviceps spec. DSM 2837 kultiviert und das gebildete Chanoclavin nach Beendigung der Fermentation isoliert.
    类似技术:
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    同族专利:
    公开号 | 公开日
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    CS392085A2|1990-04-11|
    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    法律状态:
    1985-12-19| AK| Designated states|Designated state(s): HU JP US |
    1985-12-19| AL| Designated countries for regional patents|Designated state(s): AT BE CH DE FR GB IT LU NL SE |
    1986-01-28| WWE| Wipo information: entry into national phase|Ref document number: 1985902480 Country of ref document: EP |
    1986-07-02| WWP| Wipo information: published in national office|Ref document number: 1985902480 Country of ref document: EP |
    1989-02-22| WWG| Wipo information: grant in national office|Ref document number: 1985902480 Country of ref document: EP |
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
    DEP3420954.9||1984-06-01||
    DE19843420954|DE3420954A1|1984-06-01|1984-06-01|Verfahren zur herstellung von chanoclavin|DE19853568347| DE3568347D1|1984-06-01|1985-05-30|Process for the production of chanoclavin|
    HU852885A| HU197944B|1984-06-01|1985-05-30|Process for producing chanoclavine|
    AT85902480T| AT40901T|1984-06-01|1985-05-30|Verfahren zur herstellung von chanoclavin.|
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