• 专利附录
  • 专利说明
  • 权利要求
  • 类似技术
  • 同族专利
  • 引用文献
  • 法律状态
  • 优先权
    • 专利摘要:
    本發明係關於接枝至聚合物之活性成份之新穎共軛物，包含其等之奈米顆粒，其等製備方法及其等聚合中間物。
    公开号:TW201302225A
    申请号:TW100142380
    申请日:2011-11-18
    公开日:2013-01-16
    发明作者:Abderrhamane Amgoune；Didier Basile；Fethi Bensaid；Didier Bourissou；Eric Didier；Stephanie Greco；Harivardhan Reddy Lakkireddy；Serge Sable；Michel Veillard
    申请人:Sanofi Sa；Centre Nat Rech Scient；Univ Toulouse 3 Paul Sabatier；
    IPC主号:C08G65-00
    专利说明:
    活性成份之聚合共軛物，其製備方法及其聚合中間物
    本發明係關於活性成份(特定言之紫杉醇)之聚合共軛物。
    紫杉醇常具有極低水溶解度。因此，紫杉醇係以氫化蓖麻油與醇之混合物調配，此會導致大量副作用，如過敏、腎毒性、心臟毒性及神經毒性。已尋求替代性調配物；特定言之，已針對提供替代及有效投與形式之目的探索基於聚合物之水可溶性調配物，如微球體、奈米顆粒及膠束(Gaucher等人，J. of Controlled Release,143(2010),2-12)。
    具奈米尺寸之顆粒特別適宜，係因其等小尺寸將容許其等到達腫瘤組織及包含親水性冠之其等結構可延長體循環時間。
    因此，美國專利案5 766 635描述由聚乙二醇及聚乳酸之共聚物所製備之活性成份奈米顆粒，該等奈米顆粒係藉由簡單沈澱形成。然而，藉此形成之奈米顆粒係藉由簡單物理封裝活性成份而獲得。
    此外，Nederberg等人，Biomacromolecules,2009,10,1460-1468描述包含聚乙二醇與聚乳酸之Y共聚物及太平洋紫杉醇(paclitaxel)之膠束。然而，又，膠束係藉由以該經改質之PEG-PLA共聚物簡單物理封裝太平洋紫杉醇而獲得。
    然而，此類封裝缺點在於難以控制封裝程度，且常存在活性成份沈澱之高風險。此外，奈米封裝會導致難以控制且由擴散及生物降解決定之釋放。
    因此，需要可避免此等缺點之另一類奈米顆粒。因此，已提出活性成份與(共)聚合物之共價共軛。
    因需以共價封裝提供調配物，共價封裝可特定言之化學計量封裝，限制活性成份沈澱及/或控制釋放。
    WO 99/17804描述由喜樹鹼與甲基丙烯醯基-甘胺酸-胺基醯基衍生物之共價共軛獲得之聚合喜樹鹼衍生物。
    然而，此專利申請案僅係關於喜樹鹼衍生物。
    因此，提供聚合物與紫杉醇之共價共軛物。例如，Zhang等人，Biomaterials,26(2005),2121-2128提供在水性介質中形成膠束之經由二乙醇酸連接子之太平洋紫杉醇與單甲氧基-聚乙二醇-聚乳酸交酯(MPEG-PLA)之共軛物。然而，鍵結至PLA末端之活性成份被截留在藉此形成之膠束之疏水區域且實際上無法輕易觸及。
    Cheng等人，Angew. Chem. Int. Ed.,2008,47,4830亦描述在無法輕易觸及之疏水區域內活性成份接枝至PLA末端之奈米顆粒。
    因此需改良活性成份自共價封裝之此類調配物中之(共)聚合物之釋放控制，共價封裝可化學計量封裝並限制活性成份沈澱。
    本發明建議藉由提供稱為共軛之共價封裝，即，將連接子導入(共)聚合物與活性成份之間及顯著改良活性成份之水解可觸及性來解決此技術難題。
    因此，本發明者已發現滿足上述要求之聚乙二醇與聚乳酸之官能化共聚物。
    根據第一主要內容，本發明係關於活性成份與聚乙二醇-聚乳酸共聚物之如式(I)之共軛物，及其等醫藥可接受鹽：
    於上述式(I)中：
    -　mPEG係甲氧基-聚乙二醇；
    -　PLA係聚乳酸；
    -　m係聚乙二醇片段(mPEG)之平均分子量且係於100與15 000之間(以Da表示)，特定言之，100至10000，更特定言之，1000與5000之間；如約2000；
    -　n係聚乳酸片段之平均分子量且係於1000與50000之間(以Da表示)之間選擇，更特定言之，3000至20 000，仍更特定言之，5000至20 000之間，如約10 000或14 000；
    -　AP係活性成份殘基，較佳係選自紫杉醇，
    -　L係連接子，
    -　X係氫原子或視需要經選自鹵素原子或OR、CN、CF3、NRR'或COOR基團之一或多個取代基取代之烷基，其中R及R'彼此相同或不同地係氫原子或烷基。
    術語「平均分子量」係指重量平均分子量。
    一般而言，AP殘基係藉由存在於AP中之OH基鍵結至L。
    較佳地，PLA在其視需要殘留之自由羥基末端處展現保護性基團，例如，C(=O)烷基，如C(=O)CH3基團。
    較佳地，X係甲基。
    (mPEG)m基團可由下式表示：
    其中p表示共聚物中之環氧乙烷單元之平均數。一般而言，p係於1與340之間，如約20與110之間。
    (PLA)n基團可由下式表示：
    其中q表示共聚物中之乳酸單元之平均數。一般而言，q係於10與700之間，如約40與300之間。
    根據本發明之共軛物可使每條聚合物鏈化學計量封裝1至50%，一般至多15重量%，特定言之，約5至6%之活性成份且在水相中展現低活性成份沈澱及活性成份因連接子之控制釋放。此外，由於mPEG/PLA共聚物之特殊Y結構，活性成份將出現在疏水/親水介面處且因此相較於活性成份位於疏水核中而言，可特異及非特異性水解觸及，可控制釋放。
    於如上定義之式(I)中，AP可選自紫杉醇。該等紫杉醇特定言之係選自太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、卡巴他賽(cabazitaxel)及拉羅他賽(larotaxel)，如式：
    太平洋紫杉醇：R10=-OC(=O)-CH3；R5'=Ph，R7=OH；R8=CH3
    多烯紫杉醇：R10=-OH；R5'=-O-C(CH3)3；R7=OH；R8=CH3
    拉羅他賽：R10=-OC(=O)-CH3；R5'=-O-C(CH3)3；R7及R8藉由其等所結合之碳原子形成環丙基；
    卡巴他賽：R10=OCH3；R7=-OCH3；R8=CH3；R5'=-O-C(CH3)3
    一般而言，於紫杉醇之情況中，該OH基係存在於紫杉醇側鏈之2'位置或7位置。
    更特定言之，該活性成份係在2'位置上進行接枝之卡巴他賽。
    特定言之，如式(I)之化合物係如下式：
    術語「連接子」意指包含1至10個碳原子且在連接至mPEG/PLA共聚物之末端展現氧原子及在鍵結至AP之另一末端展現與存在於活性成份中之羥基反應之基團(例如，羧酸基)之烷基鏈。該烷基鏈可視需要由選自-O-、-C(=O)-、-NR-或-O-C(=O)-NR-、-S-、-S-S-之一或多個原子或基團間隔。該連接子可特定言之選自琥珀酸、戊二酸或二乙醇酸之二羧酸酯衍生物。尤其可提及琥珀酸、戊二酸及二乙醇酸之二羧酸酯衍生物，更佳，琥珀酸之二羧酸酯衍生物。
    較佳，如式(I)之共軛物對應式(Ia)：
    其中AP、X、L、p及q係如上所定義。
    更特定言之，如式(I)之化合物對應下式(Ib)：
    其中AP、L、p及q係如上所定義。
    根據一具體實施例，根據本發明之共軛物對應上式(Ib)，其中L係諸如琥珀酸、戊二酸或二乙醇酸之二羧酸酯衍生物。
    如式(I)之化合物可包含一或多個非對稱碳原子。因此，其等可以對映異構體或非對映異構體之形式存在。此等對映異構體、非對映異構體及其等混合物(包括消旋混合物)係於本發明範圍內。
    如式(I)之化合物可以鹼或酸加成鹽之形式存在；特定言之X包含NRR'基團之情況。此等加成鹽係於本發明範圍內。
    此等鹽可由醫藥可接受酸製備，但，例如，用於如式(I)化合物之純化或單離之其他酸之鹽亦係於本發明範圍內。
    如式(I)之化合物亦可以水合物或溶劑化物之形式，即與一或多個水分子或與溶劑之組合或締合之形式存在。此等水合物及溶劑化物亦係於本發明範圍內。
    於本發明全文中：
    -　鹵素原子意指：氟、氯、溴或碘；
    -　烷基意指：飽和、直鏈或支鏈型(C1-C6)脂族烴基。以實例方式可提及甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第三丁基或戊基及類似者；
    -　芳基意指：包含5至10個碳原子之芳環基。以芳基實例方式可提及苯基或萘基。
    根據另一主要內容，本發明係關於一種製備本發明共軛物之方法。
    根據第一實施例，如式(I)之共軛物可藉由將如式(III)之化合物：
    與對應下式之該活性成份之衍生物：
    AP-L-H
    偶合來獲得，其中L係如通式(I)中所定義。
    因此，於紫杉醇之情況中，AP-L-H對應紫杉醇側鏈之自由OH基基本上經由LH之羧酸基發生LH基團酯化之AP衍生物。
    此偶合反應可在熟習本項技術者已知之酯化條件下實施，特定言之，在諸如碳化二醯亞胺(諸如二異丙基碳化二醯亞胺(DIPC))之活化劑存在下，藉由或不藉由諸如二甲基胺基吡啶(DMAP)之觸媒。此反應可在諸如二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯之適宜溶劑中，在0℃至溶劑回流溫度之溫度下，較佳室溫下實施。
    經改質之活性成份AP-L-H可自活性成份AP藉由與所需連接子L之前驅體之偶合獲得。
    因此，於L表示二琥珀酸酯化合物之情況中，所使用之前驅體係琥珀酸酐。於L表示二乙醇酸酯根之情況中，所使用之前驅物係二乙醇酸酐。
    此偶合反應一般係於諸如吡啶之溶劑或氯化溶劑中，在諸如DMAP或吡啶之觸媒存在下，於0℃至所採用溶劑之回流溫度的溫度下，更一般而言室溫下實施。
    根據第二實施例，該方法包含將展現OH基之該活性成份AP與如式(II)之PEG/PLA共聚物偶合之步驟：
    其中LH展現羧酸端基COOH，且mPEG、m、X、PLA及n係如式(I)中所定義。
    該偶合反應可在正常酯化條件下，於諸如二氯甲烷或氯仿之溶劑中，在諸如碳化二醯亞胺(諸如二異丙基碳化二醯亞胺(DIPC))之活化劑存在下，藉由或不藉由諸如二甲基胺基吡啶(DMAP)之觸媒來實施。該反應一般係於0℃至溶劑回流溫度之溫度下，更一般而言室溫下實施。
    如式(II)之化合物可自如式(III)之化合物：
    其中，mPEG、m、PLA、n及X係如式(I)中所定義，藉由與連接子LH之前驅體之偶合獲得。因此，於LH表示二琥珀酸酯根之情況中，所使用之前驅物為琥珀酸酐。當L係二乙醇酸酯根時，所使用之其前驅物為二乙醇酸酐。根據所需L基團可利用之前驅物基本上為熟習本項技術者已知且可自市面購置。
    該偶合反應一般係於諸如甲苯或二氯甲烷之溶劑中，在諸如吡啶之觸媒存在下，於室溫至該溶劑回流溫度之溫度下實施。
    此反應可藉由使用適宜觸媒，特定言之諸如DMAP來促進。
    根據以上一或其他合成路徑所使用之如式(III)化合物係新穎化合物。因此，本發明亦係關於如式(III)之化合物：
    其中mPEG、PLA、m、n及X係如式(I)、(Ia)及/或(Ib)中所定義。
    化合物(III)較佳對應下式(IIIa)及(IIIb)：
    根據另一主要內容，本發明亦係關於製備如式(III)之中間物之方法。該方法包含：
    1.藉由適當保護基對如式(IV)之化合物中羥基進行選擇性單保護之步驟：
    2.使藉此獲得之經單保護之化合物與(PLA)n基團之前驅物偶合，及
    3.對步驟1期間所導入之保護基進行脫保護。
    就步驟1而言，適當保護基可特定言之選自甲矽烷基衍生物，如T.W. Green及P.G.M. Wurts於Protective Organic Groups in Organic Chemistry,Wiley與Sons,1991中，亦或J.F.W. McOmie於Protective Groups in Organic Chemistry,Plenum 13,1973中所描述之彼等物。
    根據一特適宜態樣，使用以下一或其他甲矽烷基衍生物來進行保護：
    較佳
    其中Lg表示離去基團，如鹵素原子或三氟甲烷磺酸酯根，較佳係鹵素原子，如氯。
    此反應可在熟習本項技術者已知之條件下，如在鹼，特定言之，諸如三乙胺之有機鹼，及諸如二氯甲烷之溶劑存在下，於室溫至溶劑回流溫度之溫度下，特定言之，在約40℃下實施。
    在步驟2)中，宜藉由開環聚合(ROP)利用前驅物3,6-二甲基-1,4-二氧雜環己烷-2,5-二酮來實施與(PLA)n前驅物之偶合。僅以説明方式給出，此反應可藉由以下方案闡明：
    一般而言，宜在諸如硫脲(如N-環己基-N'-[3,5-雙(三氟甲基)苯基]硫脲)、胺(如金雀花鹼(sparteine))及/或其等混合物之有機觸媒存在下，於室溫至溶劑回流溫度間之溫度下實施開環聚合。就適當溶劑而言，可提及二氯甲烷。
    可藉由應用或調整熟習本項技術者已知之脫保護方法來實施脫保護步驟3)，如上述Green等人及McOmie等人所提及之彼等方法。宜使用氟化物，如氟化四丁基銨(TBAF)：Bu4N+F-，或三氟硼烷(BF3.Et2O)。此反應係於諸如THF或二氯甲烷之適當溶劑中，於室溫至反應混合物回流溫度間之溫度下，例如，約40℃下進行足以產生所需轉換程度的時間。
    化合物(IV)：
    可自如式(V)之化合物，
    藉由對保護基Pg1及Pg2進行脫保護，特定言之，藉由催化氫化Pd/C或酸水解獲得，其中mPEG、m及X係如上所定義及Pg1及Pg2彼此相同或不同，各自獨立地表示羥基之保護基，或者Pg1及Pg2藉由與其等所結合之氧原子一起形成視需要經(例如)經取代或未經取代之芳基取代之縮醛基而形成二醇基之保護基。
    根據一具體態樣，Pg1及Pg2一起形成苯亞甲基，以使如式(V)之產物對應下式(Va)：
    其中i係0、1或2及各R相同或不同，獨立地表示H或O(C1-C6)烷基，較佳OMe。
    如式(V)之化合物可藉由使如式(VI)之化合物：
    與(mPEG)m，特定言之，於諸如1,3-二環己基碳化二醯亞胺、4-(二甲基胺基)吡啶鎓對甲苯磺酸鹽(DPTS)及/或其等混合物之偶合劑，或DMAP存在下偶合而獲得。此反應一般係在室溫下實施。
    化合物(VI)可藉由依照熟習本項技術者已知之方法對化合物(VII)進行保護而獲得：
    於特定言之化合物(VIa)之情況中：
    化合物(VIa)可自化合物(VII)及苯甲醛獲得，特定言之，藉由應用及/或調整U. Annby等人，Tetrahedron Letters,1998,39,3217。
    如式(VII)之化合物可自市面購置或可藉由應用或調整熟習本項技術者已知及/或在熟習本項技術者已知範圍內之方法獲得，特定言之，參照Larock等人在Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers,1989中所描述之製程。
    根據本發明之方法可另包含後續步驟，包括對所需化合物進行之單離及/或純化。藉此製備之所需化合物可藉由習知方式自反應混合物回收。例如，可藉由將溶劑自反應混合物蒸餾出，或，若需要，在將溶劑自溶液混合物蒸餾出之後，藉由將殘餘物傾入水中，接著以水不可混溶有機溶劑萃取，及藉由將溶劑自萃取液蒸餾出來回收該等化合物。此外，若需要，可藉由各種技術對該化合物進行進一步純化，如藉由重結晶、重沈澱或各種層析技術，特定言之，尺寸排除製備層析。
    根據另一主要內容，本發明亦係關於包含本發明共軛物之奈米顆粒。此等奈米顆粒一般展現10至300 nm，一般20至200 nm之尺寸。
    一般而言，其等包含PLA核及PEG邊，AP存在於介面處。
    其等可藉由奈米沈澱，特定言之，藉由將共軛物溶於諸如丙酮之適當溶劑中，及蒸發該溶劑來製備。
    根據另一主要內容，本發明亦係關於一種包含本發明共軛物之醫藥組合物。
    根據另一主要內容，本發明亦係關於一種用於治療及/或預防癌症之本發明共軛物。 實例
    以下實例係以闡示本發明之方式給出。
    除非另外說明，否則溶劑及反應物係以原始形式使用。所有合成及聚合均係在惰性氬氣氛圍下利用標準Schlenk技術實施。事先將該等溶劑乾燥並在使用前進行蒸餾：二氯甲烷(DCM)係經CaH2乾燥，甲苯係經鈉或利用溶劑純化器(Mbraun MB-SPS-800系統)乾燥，四氫呋喃(THF)係經鈉乾燥及二乙基醚係經鈉乾燥。DL-丙交酯(PURAC)係藉由共沸蒸餾及自甲苯重結晶來純化。隨後昇華並在氬氣下保存於手套箱中。
    核磁共振(NMR)：利用配備有一低溫探針之Bruker Avance 300 MHz、Bruker Avance 400 MHz及Bruker Avance 500 MHz裝置於室溫下記錄NMR頻譜。1H及13C之化學位移δ係相對於殘餘溶劑以ppm表示及29Si之化學位移δ係相對於作為外標之Me4Si以ppm表示。偶合常數J係以赫茲給出。採用以下縮寫來描述訊號：s(單峰)、br(寬)、d(雙重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)及m(多重峰)。
    空間排除層析(SEC)：數量平均莫耳質量Mn、重量平均莫耳質量Mw及多分散性指數(Mw/Mn)係藉由空間排除層析(SEC)在35℃下利用由Allilance Waters e2695、MALS miniDAWN(Wyatt)光散射偵測器、Viscostar-II(Wyatt)黏度計及Waters 2414折射儀組成之三重偵測來測量。將THF以1.0 ml/分鐘之流動速率用作溶離劑。使用Styragel(WAT054405)前管柱及兩個Shodex(KF-802.5及KF-804)管柱。利用聚苯乙烯標準(400-100 000 g/mol)實施校正。依如下方式製備樣品：將待分析之產物(10至20 mg)溶於1 ml含甲苯(用作標記物)之THF中。隨後利用一0.45 μm過濾器過濾溶液。
    質譜分析：利用Thermo Fisher Scientific DSQ光譜儀記錄化學離子化(DCI)質譜。
    透射電子顯微術(TEM)：奈米顆粒之形態係藉由TEM，使用具有200 keV之加速場之JEOL-JEM 2100F顯微鏡觀察得到。為了製備樣品，以0.2%(w/v)磷鎢酸將稀釋10倍(0.5 mg/ml)之數滴奈米顆粒分散液培養30分鐘。隨後將樣品置於銅柵格上並在室溫下乾燥。
    動態光散射(DLS)：奈米顆粒之尺寸(流體動力直徑)係藉由DLS，利用Zetasizer 3000 HS(Malvern)測量。
    樣品(5 mg/ml)過濾(1.2 μm PVDF過濾器)後置於毛細管單元中。在25℃下利用90℃之偵測角實施測量。所使用之波長係633 nm。
    於以下實例中，(mPEG)m及(PLA)n中之指數m及n係重量平均分子量。n係自SEC分析所獲得之重量實驗上確定。 5-甲基-2-苯基-1,3-二氧雜環己烷-5-羧酸(Bn-Bis-MPA)(I)之合成
    將2,2'-雙(羥甲基)丙酸(Bis-MPA)(10 g，74.6 mmol)、苯甲醛(8.3 g，78.2 mmol)及甲磺酸(MSA)(1.5 g，15.6 mmol)溶於100 ml甲苯中。在室溫下將反應介質攪拌5小時。隨後真空蒸發溶劑及然後添加10% NaHCO3溶液(300 ml)及醚(300 ml)直至殘餘物完全溶解。回收水相及添加數滴冰乙酸。氣體劇烈逸出之後，形成白色沈澱物。將其濾出，以20 ml水沖洗及真空乾燥過夜。W得到=13.3 g，Y=80%。
    1 H NMR(d6-丙酮,300 MHz): δ(ppm) 1.04(s,3H,-C-CH 3 ),3.73(d,2H,1a,J 2 Ha-Hb =11.4 Hz),4.57(d,2H,1b,J 2 Ha-Hb =11.3 Hz),5.52(s,1H,O2-CH-),7.32(m,3H,ArH),7.42(m,2H,ArH)。
    13 C NMR(d6-丙酮,75.5 MHz): δ(ppm) 18.4(-CH3),42.8(Cq),74.2(-CH2-),102.1(-O2-CH-),127.3(芳基CH),128.8(芳基CH),129.5(芳基CH),140.0(芳基Cq),176.2(-COOH)。
    C12H14O4[M+NH4]+之DCI計算值240.12；實驗值=239.90 甲氧基-聚乙二醇-苯亞甲基(mPEG 2000-O 2B n)(II)之合成
    於一250 ml Schlenk容器中，將甲氧基-聚乙二醇(平均分子量：2000 g/mol，文中稱為mPEG2000)(10 g，5 mmol)及經保護之雙-MPA(I)(1.35 g，6.1 mmol)溶於45 ml無水DCM中。隨後將1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二醯亞胺(EDCI)(0.96 g，5 mmol)及4-(二甲胺基)-吡啶鎓對甲苯磺酸鹽(DPTS)(0.6 g，2 mmol)添加至介質中。在40℃下，於氬氣中將反應介質攪拌48小時。隨後以20 ml 1M HCl溶液、20 ml 10% NaHCO3溶液及20 ml H2O萃取反應介質。
    有機相經Na2SO4乾燥、過濾及蒸發溶劑之後，殘餘物在0℃下自醚沈澱出來。隨後濾出沈澱物及真空乾燥過夜。獲得白色固體。W得到=9.68 g，Y=88%。
    1 H NMR(CDCl3,300 MHz): δ 1.05(s,3H,6),3.37(s,3H,1),3.63(bs,180H,2,2' & 7b),4.36(t,2H,3,J 3 H-H =4.8 Hz),4.66(d,2H,7a,J 2 Ha-Hb =11.5 Hz),5.44(s,1H,8),7.32(m,3H,ArH),7.42(m,2H,ArH)。
    13 C NMR(CDCl3,75.5 MHz): δ(ppm) 17.8(C6),42.3(C5),58.9(C1),64.1(C3),68.9(C7),70.5(C2),71.8(C2'),73.4(C2"),101.2(C8),126.1(芳基CH),128.0(芳基CH),128.8(芳基CH),137.8(芳基Cq),173.8(C4)。
    SEC: Mn=2867 g/mol,PI=1.06。 甲氧基-聚乙二醇-二醇(mPEG 2000-(OH) 2)(III)之合成
    於一配備有一充滿氫氣(H2)之球之250 ml二頸圓底Schlenk燒瓶中將化合物(II)(9.5 g，4.3 mmol)及炭載鈀(10% Pd/C)(0.95 g，10重量/重量%)混合，然後進行真空-氬氣偱環。隨後添加40 ml DCM及40 ml甲醇(MeOH)。實施一次真空-H2循環。在At下於靜態H2中將反應介質攪拌4小時。隨後經矽藻土過濾混合物。在真空下蒸發溶劑及在真空下將殘餘物乾燥過夜。獲得淡黃色固體。W得到=8.7 g，Y=95%。
    1 H NMR(CDCl3,300 MHz): δ 1.11(s,3H,6),3.37(s,3H,1),3.63(bs,180H,),3.69-3.78(m,4H,7a & 7b),4.33(t,2H,3,J 3 H-H=4.8 Hz)。
    13 C NMR(CDCl3,125.7 MHz): δ 16.9(C6),49.5(C5),58.8(C1),63.2(C3),67.1(C7),68.7(C2'),70.4(C2),71.8(C2'''),72.6(C2"),175.5(C4)。 mPEG 2000-(OH)-Y-(OTBDPS)(IV)之合成
    於一100 ml Schlenk容器中將化合物(III)(4 g，1.90 mmol)溶於18 ml無水DCM中。隨後添加經KOH蒸餾之三乙胺(TEA)(0.4 g，3.95 mmol)及然後在0℃下逐滴添加第三丁基二苯基氯矽烷(TBDPSiCl)(1.1 g，3.92 mmol)。在40℃下，於氬氣中攪拌反應介質。24小時後，濾出所形成之鹽及隨後以1M HCl溶液(15 ml)，接著NaHCO3溶液(15 ml)及最後H2O(15 ml)萃取有機相。有機相經Na2SO4乾燥。過濾後，真空濃縮混合物及隨後在0℃下使殘餘物自醚沈澱出來。隨後濾出所獲得之白色沈澱物，清洗及真空乾燥。隨後利用甲苯共沸液乾燥產物。將產物保存於一手套箱中。W得到=4.1 g，Y=90%。
    RMN 1 H(CDCl3,300 MHz): δ 1.02(s,9H,10),1.19(s,3H,6),3.37(s,3H,1),3.63(br,180H,2/2'/2"/2'''),3.73-3.80(m,4H,7 & 8),4.26(t,2H,3,J 3 H-H=4.8 Hz),7.35-7.64(m,10H,11)。
    RMN 13 C(CDCl3,75.5 MHz): δ 16.9(C6),19.1(C9),26.5(C10),50.3(C5),58.7(C1),63.1(C3),65.6(C7),66.4(C8),68.6(C2'),70.3(C2),71.7(C2'''),72.3(C2"),127.5(CH芳基),129.5(CH芳基),132.9(Cq芳基),135.3(CH芳基),174.8(C4)。
    RMN 29 Si(CDCl3,59.6 MHz): δ-4.33(-O-Si-)。 mPEG 2000-PLA 14000-Y-OTBDPS共聚物(V)之合成
    將巨引發劑(IV)(0.8 g，0.34 mmol)及DL-丙交酯(5 g，35 mmol，DP 100)溶於25 ml無水DCM中。隨後添加觸媒溶液(10 ml，4當量硫脲(N-環己基-N'-[3,5-雙(三氟甲基)苯基]硫脲)及4當量(-)-金雀花鹼。在35℃下於氬氣中攪拌反應介質直至丙交酯完全消耗，藉由1H NMR監控此反應。6小時後，將乙酸酐(166 μl，1.71 mmol)及4-二甲胺基吡啶(DMAP)(4.5 mg，0.35 mmol)添加至反應介質中。將反應介質再攪拌1小時。隨後真空濃縮混合物及然後在0℃下自150 ml MeOH沈澱出來。濾出所形成之白色沈澱物，以20 ml MeOH清洗及隨後真空乾燥過夜。
    RMN 1 H(CDCl3,500 MHz): δ 1.02(s,9H,10),1.19(s,3H,6),1.58(br,595H,14),2.12(s,3H,PLA: 16),3.37(s,3H,1),3.63(br,180H,2/2'/2"/2'''),3.73-3.80(m,2H,8),4.20-4.40(m,4H,3 & 7),5.16(br,192H,13),7.35-7.64(m,10H,11)。
    RMN 13 C(CDCl3,125.7 MHz): δ 16.6(C14 & C6),20.4(C9),26.6(C10),48.5(C5),58.8(C1),63.5(C3),65.0(C7),66.6(C8),68.9(C13),68.2(C2'),70.1(C2),71.7(C2'''),72.2(C2"),127.7,129.8,132.8,135.5(C11),169.50(C12 & C15),174.82(C4)。
    平均分子量(藉由NMR獲得)：M=16150 g/mol。
    亦藉由35及150當量丙交酯類似地實施開環聚合(ROP)反應，獲得mPEG2000-PLA5000及mPEG2000-PLA21000共聚物。 mPEG 2000-PLA 14000-Y-OH共聚物(IV)之合成
    將共聚物(V)(3.96 g，0.28 mmol)溶於40 ml無水THF中。隨後逐滴添加氟化四丁基銨(TBAF)於THF(1.5 ml，1.5 mmol)中之1M溶液。在30℃下，於氬氣中將反應介質攪拌7小時。隨後真空蒸發THF。將殘餘物溶於15 ml DCM中及然後在0℃下自800 ml醚沈澱出來。濾出白色沈澱物及隨後真空乾燥過夜。W得到=2.14 g，Y=55%。
    RMN 1 H(CDCl3,300 MHz): δ 1.57(br,590H,PLA: 11),2.12(s,3H,PLA: 13),3.37(s,3H,1),3.63(br,180H,8,2/2'/2"/2'''),4.33(m,4H,3 & 7),5.15(br,186H,PLA: 10)。
    RMN 13 C(CDCl3,75.5 MHz): δ 16.5(PLA: C11),48.5(C5),58.7(C1),63.4(C3),64.2(C7),66.5(C8),68.8(PLA: C10),68.2(C2'),70.1(C2),71.7(C2'''),72.2(C2"),169.5(PLA: C9),174.8(PEG: C4)。
    平均分子量(藉由NMR獲得)：M=15495 g/mol。
    如下藉由三異丙基氯矽烷(TIPSCI)實施保護。
    mPEG 2000-(OH)-Y-(OTIPS)之合成
    於一25 ml Schlenk中，將mPEG-二醇衍生物(0.5 g，0.24 mmol)溶於5 ml無水DCM中。隨後添加三乙胺(TEA)(經KOH蒸餾)(0.2 g，2.01 mmol)，及在0℃下逐滴添加三異丙基氯矽烷(TIPSCI)(0.40 g，2 mmol)。在40℃下，於氬氣中攪拌反應混合物。24小時後，過濾所形成之鹽及以HCl 1M溶液(5 ml)及NaHCO3溶液(5 ml)及H2O(5 ml)萃取有機相。有機相經Na2SO4乾燥。過濾後，真空濃縮混合物及在0℃下使殘餘物自醚沈澱出來。隨後過濾白色沈澱、清洗及真空乾燥。隨後藉由甲苯共沸液乾燥產物。將產物保存於一密封箱中。M得道=0.4 g，R=74%。
    NMR 1 H(CDCl3,500 MHz): δ 0.98-1.03(br,21H),1.16(s,3H),3.37(s,3H),3.63(m,180H),3.73-3.80(m,4H),4.26(t,2H,J3 H-H=4.8 Hz)。 共聚物mPEG 2000-PLA 10000-Y-OTIPS(V')之合成
    將巨引發劑(0.18 g，79.6 μmol)及DL-丙交酯(0.8 g，5.6 mmol，70當量)溶於7 ml無水DCM中。隨後添加觸媒溶液(1 ml，4當量硫脲(N,N'-環己基-3,5-雙[三氟甲基]苯基硫脲)及2當量(+)-金雀花鹼。在35℃下，於氬氣中攪拌反應混合物直至丙交酯完全消耗，此由1H NMR控制。3小時之後，將乙酸酐(39 μl，0.40 mmol)及4-二甲胺基吡啶(DMAP)(10 mg，82 μmol)添加至反應混合物中。將此混合物再攪拌1小時。隨後真空濃縮該混合物，然後在0℃下自50 ml醚沈澱出來。隨後過濾白色沈澱物，以20 ml MeOH清洗，隨後真空乾燥過夜。
    M得到=1 g，R~75%。
    NMR 1 H(CDCl3,500 MHz): δ 0.98-1.03(br,21H),1.16(s,3H),1.58(m,423H),2.12(s,3H),3.37(s,3H,1),3.63(m,180H),3.73-3.80(m,2H),4.20-4.40(m,4H),5.16(m,141H,13)。
    SEC: Mw=13628 g/mol,Mn=11850 g/mol,IP=1.15。 共聚物mPEG 2000-PLA 10000-Y-OH(VI')之合成
    將經保護之共聚物(1 g，71 μmol)溶於10 ml無水DCM中。隨後在0℃下逐滴添加BF3.Et2O(0.5 g，3.56 mmol)。在0℃下，於氬氣中將反應混合物攪拌1小時及隨後在30℃下攪拌19小時。然後，真空蒸發DCM。將殘餘物溶於5 ml DCM中，及隨後在0℃下自50 ml醚沈澱出來，以20 ml MeOH及接著以20 ml戊烷清洗。過濾白色沈澱物及真空乾燥過夜。
    M得到=0.85 g，R~85%。
    NMR 1 H(CDCl3,500 MHz): δ 1.58(m,425H),2.12(s,3H),3.37(s,3H),3.63(m,180H),4.33(m,4H),5.16(m,142H)。
    SEC: Mw=13925 g/mol,Mn=11800 g/mol,IP=1.18。 卡巴他賽-2'-琥珀醯(VII)之合成
    將卡巴他賽(0.2 g，0.24 mmol)溶於4 ml經KOH蒸餾之吡啶中。隨後添加琥珀酸酐(0.2 g，2 mmol)。在30℃下，於氬氣中攪拌反應介質。藉由薄層層析(TLC)(DCM/MeOH：9/1)監控反應。8小時之後，真空蒸發吡啶及藉由層析柱(溶離劑：CHCl3/MeOH：梯度自99/1降至97/3)純化殘餘物。隨後蒸發各溶離份並在真空下乾燥以獲得白色粉末。W得到=0.180 g，Y=80%。
    RMN 1 H(CDCl3,300 MHz): δ 1.19(s,3H,16),1.20(s,3H,17),1.35(s,9H,7'),1.63(s,1H,-OH第三),1.70(s,3H,19),1.78(m,1H,6a),1.86(s,3H,18),2.15(s,6H,-CH 3 丙酮),2.18-2.33(m,2H,14a & 14b),2.34(s,3H,4之-CH 3 乙醯基),2.65(m,5H,-CH 2 琥珀酸a,a' & 6b),3.28(s,3H,-OCH 3 en 7),3.44(s,3H,-OCH 3 en 10),3.80(d,1H,3,J=7.5 Hz),3.84(dd,1H,7.J=6.5 & 10.5 Hz),4.16(d,1H,20a,J=8.5 Hz),4.28(d,1H,20b,J=8.5 Hz),4.80(s,1H,10),4.95(d,1H,5.J=10 Hz),5.28-5.44(br,2H,2'/4'),5.61(d,1H,2,J=7.5 Hz),6.19(b,1H,13),7.31,7.38. 7.47. 7.59.(m,9H,ArH),8.10(d,2H,H原苯甲酸酯)。
    RMN 13 C(CDCl3,75.5 MHz): δ 10.8(C19),15.1(C18),21.2(C16),23.2(CH3乙醯基),27.3(C17),28.35. 28.62(-CH2琥珀酸a & a') 28.7(C7'),32.6(C6),35.7(C14),43.8(C15),47.9(C3),56.7(C3'),57.4(C8),57.5(OCH3 en C7),57.8(OCH3 en C10),73.1(C13),74.7(C2'),75.0(C2),77.0(C20),79.2(C1),80.7(C6'),81.2(C7),82.3(C4),83.1(C10),84.6(C5),127.3-138.9(Ar),136.2(C11),139.1(C12),155.8(C5'),167.5(CO苯甲酸酯),168.7(4之CO乙醯基),170.0-174.0(C1',-COO-琥珀酸),205.4(C9)。 mPEG 2000-PLA 14000-Y-琥珀醯-2'-卡巴他賽共軛物(VIII)之合成
    將共聚物(VI)(2 g，163 μmol)及卡巴他賽-2'-琥珀醯(VII)(0.33 g，353 μmol)溶於40 ml無水DCM中。隨後添加N,N'-二異丙基碳化二醯亞胺(DIPC)(45 mg，357 μmol)及隨後之DMAP(45 mg，368 μmol)。在35℃下，於氬氣中將反應介質攪拌24小時。隨後利用1M HCl溶液(30 ml)、10% NaHCO3溶液(30 ml)及水(30 ml)萃取有機相。然後有機相經Na2SO4乾燥及接著過濾。真空濃縮及隨後殘餘物自400 ml MeOH沈澱出來。過濾後，真空乾燥沈澱物過夜。W得到=1.5 g，Y=75%。
    1 H NMR(CDCl3,500 MHz)：粗產物自MeOH沈澱出來之後，偶合完全(100%)。在比1/1下檢測到化合物(VI)與(VII)具有相同化學位移。
    13 C NMR：除化合物(VI)及(VII)之化學位移外，亦存在琥珀酸連接子-(CH2)-之訊號位移：28.13及26.71 ppm。
    平均分子量(藉由NMR獲得)：M=16430 g/mol。
    奈米顆粒調配物：
    將以上獲得之共軛物(VIII)(20 mg)溶於2 ml丙酮(10 mg/ml)中。在攪拌下，將所獲得之溶液逐滴添加至4 ml去離子水中。例如，利用旋轉蒸發器蒸發丙酮。藉此獲得5 mg/ml之共軛物最終濃度。
    藉此獲得之奈米顆粒特徵如下：
    TEM：圖1顯示藉此所獲得之照片。觀察到27 nm之平均直徑。
    DLS：過濾(1.2 μm)樣品：獲得62 nm之平均直徑。分佈在3週內保持不變。結果顯示於圖2中。 mPEG 2000-PLA 10000-Y-琥珀醯-2'-卡巴他賽共軛物(VIII')之合成
    將14 g共聚物(VI')(Mw 12700 g/mol)及2.24 g琥珀醯-卡巴他賽溶於無水二氯甲烷中及添加呈粉末形式之7 g活化分子篩4A。在RT下將溶液攪拌10分鐘及添加310 mg DMAP及305 mg DIPC。在35℃下將溶液攪拌24小時。過濾之後，在40℃下將溶液真空濃縮至乾。在0℃下將殘餘物與2.8升甲醇及1 ml二氯甲烷一起攪拌2小時。過濾懸浮液及以100 ml甲醇清洗固體。在RT下乾燥過夜之後，獲得14 g白色粉末。在RT下藉由在749 ml甲醇中攪拌過夜使7.5 g固體再純化以於過濾及乾燥後獲得7.1 g白色粉末。
    1 H NMR頻譜(600 MHz,d ppm,CDCl 3 -d 1 )：1.21(m,9H);1.36(s,9H);1.42至1.72(m,468 H);1.79(m,1H);1.98(寬s,3H);2.13(s,3H);2.18(m,1H);2.29(m,1H);2.43(寬s,3H);2.54至2.77(m,5H);3.31(s,3H);3.38(s,3H);3.44(s,3H);3.50至3.78(m,180H);3.84(d,J=6.5 Hz,1H);3.89(dd,J=6.5 & 10.6 Hz,1H);4.08至4.41(m,8H);4.82(s,1H);4.99(d,J=9.8 Hz,1H);5.01至5.31(m,156 H);5.32(m,1H);5.47(m,2H);5.64(d,J=6.5 Hz,1H);6.24(寬t,J=9.0 Hz,1H);7.31(m,3H);7.40(t,J=7.9 Hz,2H);7.50(t,J=7.9 Hz,2H);7.61(t,J=7.9 Hz,1H);8.11(d,J=7.7 Hz,2H)。
    SEC Mw=13530 g/mol,Mn=11770 g/mol,IP=1.15。
    奈米顆粒調配物：
    1)將30 mg PLA-PEG-Y-琥珀醯-卡巴他賽(VIII')溶於1.5 ml丙酮中。在攪拌(500 rpm，20分鐘)下將該溶液逐滴添加至3 ml WFI中。隨後在37℃下，利用旋轉蒸發器(300至45 mbar，30分鐘)真空蒸發丙酮。
    隨後將奈米分散液之最終體積調整為3 ml，以補償蒸發期間損失之水。
    奈米分散液之最終濃度：10 mg/ml
    平均直徑(利用DLS)=43 nm，PDI=0.14
    2)在室溫下，將1 g PLA-PEG-Y-琥珀醯卡巴他賽(VIII')攪拌溶於50 ml丙酮中。有機溶液經一0.45 μm耐綸過濾器過濾，隨後導入一50 ml哈密頓(Hamilton)注射器中。將0.2 g Solutol HS15(聚乙二醇15羥基硬脂酸酯)及0.04 g去氧膽酸鈉攪拌溶於450 ml WFI中。此水性溶液經一0.22 μm過濾器過濾。利用注射器唧筒以20 ml/小時之速率將有機溶液傾入水相中。為了獲得均質分散液，將連接至注射器之一鐵氟龍管浸入該水相中。則藉由奈米分散獲得尺寸100 nm之奈米顆粒(平均尺寸30 nm，PDI=0.14)，利用Malvern Nanosizer(Quasi Elastic Light Scattering)測量。
    藉由使用一旋轉蒸發器，在37℃下，真空除去丙酮及一些水。最終奈米分散液濃度為10至200 mg/g。所截留之奈米顆粒之尺寸100 nm(對於所有濃度而言，平均尺寸係30 nm)。可經0.45 μm過濾分離更大顆粒。 mPEG-PLA-琥珀醯-拉羅他賽(IX)之合成琥珀醯拉羅他賽之製備
    在氮氣下，將2.36 g(2.72 mmol)拉羅他賽二水合物、47 ml二氯甲烷、2.72 g(27.19 mmol)琥珀酸酐及33 mg(0.27 mmol)DMAP添加至一燒瓶中。將溶液加熱至30℃，加熱過夜隨後以47 ml水清洗兩次。有機溶液經MgSO4乾燥後，在40℃下，使溶液減壓濃縮至乾。以3體積之二異丙基醚處理乾萃取物及將懸浮液攪拌2小時，過濾及以2體積二異丙基醚清洗固體兩次。在40℃下，減壓乾燥之後，獲得2.28 g白色粉末。
    NMR 1 H頻譜(500 MHz,δ ppm,CDCl3-d)：1.26(s,3H);1.28(s,3H);1.32(s,9H);1.38(m,1H);1.68(m,1H);1.93(s,3H);2.11(d,J=15.9 Hz,1H);2.19(寬s,4H);2.25(dd,J=4.8 & 10.3 Hz,1H);2.35(m,1H);2.38(s,3H);2.49(td,J=4.8 & 15.9 Hz,1H);2.61至2.82(m,4H);4.07(d,J=8.6 Hz,1H);4.12(d,J=7.5 Hz,1H);4.31(d,J=8.6 Hz,1H);4.75(寬d,J=4.8 Hz,1H);5.35至5.51(m,2H);5.69(d,J=7.5 Hz,1H);6.23(寬t,J=9.4 Hz,1H);6.34(s,1H);7.30(m,3H);7.39(t,J=7.8 Hz,2H);7.51(t,J=7.8 Hz,2H);7.60(t,J=7.8 Hz,1H);8.16(d,J=7.8 Hz,2H)。 琥珀醯-拉羅他賽與共聚物(VI')之共軛
    在氮氣下，將0.2 g mPEG-PLA-Y-OH共聚物(VI')(0.0157 mmol)、31.6 mg(2.2 eq)琥珀醯-拉羅他賽之4 ml de DCM溶液，及100 mg呈粉末形式之活化分子篩4A添加至一25 ml燒瓶中。攪拌10分鐘之後，添加4.4 mg(2.3 eq)DMAP及4.3 mg(2.2 eq.)DIPC。在35℃下將懸浮液攪拌24小時，隨後過濾(0.22微米)。將有機相濃縮至乾，及以40 ml甲醇及2滴二氯甲烷處理萃取物。在RT下將懸浮液攪拌2小時，隨後過濾及在RT下，減壓乾燥固體以獲得174 mg預期化合物。
    NMR 1 H頻譜(500 MHz,δ ppm,CDCl3-d)：1.22(m,3H);1.24(s,3H);1.27(s,3H);1.29(s,9H);1.35至1.85(m,512H);1.91(寬s,3H);2.08至2.75(m,9H);2.13(s,3H);2.20(s,3H);2.41(寬s,3H);3.39(s,3H);3.48至3.81(m,192H);4.02至4.39(m,8H);4.75(寬d,J=4.0 Hz,1H);5.01至5.33(m,169H);5.34(m,1H);5.40至5.52(m,2H);5.68(d,J=7.6 Hz,1H);6.26(寬t,J=9.0 Hz,1H);6.34(s,1H);7.30(m,3H);7.39(t,J=7.7 Hz,2H);7.51(t,J=7.7 Hz,2H);7.61(t,J=7.7 Hz,1H);8.18(d,J=7.7 Hz,2H)。
    SEC Mw=14140 g/mol Mn=11260 g/mol,D=1.25。
    奈米顆粒調配物：
    將30 mg PLA-PEG-Y-琥珀醯-拉羅他賽溶於1.5 ml丙酮中。在攪拌(500 rpm，20分鐘)下，將該溶液逐滴添加至3 ml注射用水(WFI)中。然後，在37℃下，利用旋轉蒸發器真空蒸發丙酮。
    隨後將奈米分散液之最終體積調整為3 ml，以補償蒸發期間損失之水。
    奈米分散液之最終濃度：10 mg/ml
    平均直徑(利用DLS)=48 nm，PDI=0.17 mPEG-PLA-戊二醯基-卡巴他賽(X)之合成戊二醯基-卡巴他賽之製備
    於氮氣下，將10 g(11.24 mmol)卡巴他賽丙酮溶劑化物、200 ml二氯甲烷、13.51 g(112.45 mmol)戊二酸酐及0.14 g(1.12 mmol)DMAP添加至一500 ml燒瓶中。將該溶液加熱至30℃並過夜，隨後以100 ml水清洗數次。有機溶液經MgSO4乾燥之後，在40℃下，將該溶液減壓濃縮至乾。以10體積二異丙基醚處理該乾萃取物及過濾該懸浮液及以2體積二異丙基醚清洗固體兩次。在RT下，減壓乾燥之後，獲得6.75 g白色粉末。
    NMR 1 H頻譜(500 MHz,δ ppm,CDCl3-d): 0.97(s,3H);0.98(s,3H);1.38(s,9H);1.50(m,5H);1.79(m,6H);2.24(s,3H);2.28(t,J=7.3 Hz,2H);2.46(t,J=7.4 Hz,2H);2.66(m,1H);3.21(s,3H);3.29(s,3H);3.59(d,J=7.1 Hz,1H);3.75(dd,J=6.6 et 10.7 Hz,1H);4.02(s,2H);4.47(s,1H);4.70(s,1H);4.95(寬d,J=10.7 Hz,1H);5.02至5.12(m,2H);5.37(d,J=7.1 Hz,1H);5.81(寬t,J=9.0 Hz,1H);7.18(t,J=7.7 Hz,1H);7.36(d,J=7.7 Hz,2H);7.43(t,J=7.7 Hz,2H);7.66(t,J=7.7 Hz,2H);7.74(t,J=7.7 Hz,1H);7.85(d大,J=9.1 Hz,1H);7.98(d,J=7.7 Hz,2H);12.13(極寬s,1H)。 戊二醯基-卡巴他賽與共聚物(VI')之共軛
    於氮氣下，將0.2 g mPEG-PLA-Y-OH共聚物(VI')(0.0157 mmol)、31.6 mg(2.2 eq.)戊二醯基-卡巴他賽於4 ml de DCM中之溶液及隨後之100 mg呈粉末形式之活化分子篩4A添加至一25 ml燒瓶中。攪拌10分鐘之後，添加4.4 mg(2.3 eq.)DMAP及4.3 mg(2.2 eq.)DIPC。在35℃下，將懸浮液攪拌24小時，隨後過濾(0.22微米)。將有機相濃縮至乾及以40 ml甲醇及2滴二氯甲烷處理萃取物。在RT下，將懸浮液攪拌2小時，隨後過濾及在RT下，減壓乾燥固體以獲得170 mg預期化合物。
    NMR 1 H頻譜(500 MHz,δ ppm,CDCl3-d): 1.21(s,3H);1.22(s,3H);1.25(m,3H);1.35(s,9H);1.40至1.70(m,452H);1.72(s,3H);1.80(m,1H);1.87(m,2H);2.00(s,3H);2.13(s,3H);2.15至2.51(m,6H);2.45(寬s,3H);2.71(m,1H);3.32(s,3H);3.39(s,3H);3.45(s,3H);3.48至3.81(m,172H);3.86(d,J=7.3 Hz,1H);3.91(dd,J=6.3 & 11.0 Hz,1H);4.10至4.40(m,8H);4.83(s,1H);5.00(d,J=10.7 Hz,1H);5.01至5.33(m,152H);5.35(m,1H);5.44至5.63(m,2H);5.66(d,J=7.3 Hz,1H);6.27(寬t,J=9.0 Hz,1H);7.32(m,3H);7.40(t,J=7.7 Hz,2H);7.50(t,J=7.7 Hz,2H);7.61(t,J=7.7 Hz,1H);8.12(d,J=7.7 Hz,2H)。
    SEC Mw=14140 g/mol Mn=11210 g/mol,D=1.26。
    奈米顆粒調配物：
    將30 mg PLA-PEG-Y-戊二醯基-卡巴他賽溶於1.5 ml丙酮中。在攪拌(500 rpm，20分鐘)下，將該溶液逐滴添加至3 ml WFI中。隨後在37℃下，利用旋轉蒸發器真空蒸發丙酮。
    隨後將奈米分散液之最終體積調整至3 ml，以補償蒸發期間損失之水。
    奈米分散液之最終濃度：10 mg/ml
    平均直徑(利用DLS)=60 nm，PDI=0.21 mPEG-PLA-二乙醇醯基-卡巴他賽(XI)之合成二乙醇醯基-卡巴他賽之製備
    於氮氣下，將5 g(5.62 mmol)卡巴他賽丙酮溶劑化物、100 ml二氯甲烷、6.53 g(56.22 mmol)二乙醇酸酐及0.107 g(0.56 mmol)DMAP添加至一250 ml燒瓶中。將該溶液加熱至22℃並過夜，隨後以50 ml水清洗兩次。有機溶液經MgSO4乾燥之後，在40℃下，將溶液減壓濃縮至乾燥。以4體積二異丙基醚處理乾萃取物及將懸浮液攪拌30分鐘，隨後過濾及以2體積二異丙基醚清洗固體兩次。在40℃下，減壓乾燥之後，獲得5.04 g白色粉末。
    1 H NMR頻譜(500 MHz,δ ppm,CDCl3-d): 0.96(s,3H);0.98(s,3H);1.37(m,9H);1.44至1.58(m,2H);1.51(s,3H);1.80(寬s,4H);2.23(s,3H);2.67(m,1H);3.21(s,3H);3.28(s,3H);3.58(d,J=7.3 Hz,1H);3.75(dd,J=6.8 & 10.5 Hz,1H);4.02(s,2H);4.13(s,2H);4.31(d,J=17.0 Hz,1H);4.38(d,J=17.0 Hz,1H);4.51(s,1H);4.70(s,1H);4.95(d,J=10.5 Hz,1H);5.06(m,1H);5.16(d,J=8.5 Hz,1H);5.37(d,J=7.3 Hz,1H);5.82(寬t,J=9.4 Hz,1H);7.19(t,J=7.8 Hz,1H);7.36(d,J=7.8 Hz,2H);7.43(t,J=7.8 Hz,2H);7.66(t,J=7.8 Hz,2H);7.73(t,J=7.8 Hz,1H);7.88(d,J=9.3 Hz,1H);7.97(d,J=7.8 Hz,2H);12.78(極寬s,1H)。 二乙醇醯基-卡巴他賽與共聚物(VI')之共軛
    於氮氣下，將0.2 g mPEG-PLA-Y-OH共聚物(VI')(0.0157 mmol)、32.3 mg(2.2 eq)二乙醇醯基-卡巴他賽於4 ml de DCM中之溶液，及100 mg呈粉末形式之活化分子篩4A添加至一25 ml燒瓶中。攪拌10分鐘之後，添加4.4 mg(2.3 eq)DMAP及4.3 mg(2.2 eq)DIPC。在35℃下，將懸浮液攪拌24小時，隨後過濾(0.22微米)。將有機相濃縮至乾及以40 ml甲醇及2滴二氯甲烷處理萃取物。在RT下，將懸浮液攪拌2小時，隨後過濾及在RT下，減壓乾燥固體以獲得184 mg預期化合物。
    NMR 1 H頻譜(500 MHz,δ ppm,CDCl3-d): 1.21(s,3H);1.22(s,3H);1.26(m,3H);1.35(s,9H);1.40至1.70(m,486H);1.72(s,3H);1.80(m,1H);2.01(寬s,3H);2.13(s,3H);2.21(m,1H);2.32(m,1H);2.45(寬s,3H);2.71(m,1H);3.31(s,3H);3.38(s,3H);3.45(s,3H);3.48至3.81(m,180 H);3.86(d,J=7.3 Hz,1H);3.91(dd,J=6.6 & 11.0 Hz,1H);4.08至4.40(m,8H);4.83(s,1H);5.02(d,J=10.7 Hz,1H);5.03至5.33(m,162H);5.40至5.57(m,3H);5.67(d,J=7.3 Hz,1H);6.29(寬t,J=9.0 Hz,1H);7.31(m,3H);7.40(t,J=7.7 Hz,2H);7.50(t,J=7.7 Hz,2H);7.60(t,J=7.7 Hz,1H);8.11(d,J=7.7 Hz,2H)。
    SEC Mw=14830 g/mol,Mn=11920 g/mol,D=1.24。
    奈米顆粒調配物：
    將30 mg PLA-PEG-Y-二乙醇醯基-卡巴他賽溶於1.5 ml丙酮中。在攪拌(500 rpm，20分鐘)下，將該溶液逐滴添加至3 ml WFI中。隨後在37℃下，利用旋轉蒸發器(300至45 mbar，30分鐘)真空蒸發丙酮。
    隨後將奈米分散液之最終體積調整為3 ml，以補償蒸發期間損失之水。
    奈米分散液之最終濃度：10 mg/ml
    平均直徑(利用DLS)=52 nm，PDI=0.18 卡巴他賽共軛物奈米顆粒調配物之體外釋放研究
    利用高效液體層析(HPLC)技術對獲自Sprague Dawley大鼠之血漿(事先經500 mM磷酸鹽緩衝液緩衝至10 mM之最終血漿濃度)評價自由卡巴他賽自三種卡巴他賽共軛物奈米顆粒調配物(即，PLA-PEG-Y-琥珀醯-卡巴他賽、PEG-Y-戊二醯基-卡巴他賽及PLA-PEG-Y-二乙醇醯基-卡巴他賽)之體外釋放動力學。利用一微量吸移管將標準卡巴他賽或卡巴他賽共軛物奈米顆粒調配物(1 mg/ml)添加至含有血漿樣液之小瓶中直至達到800 μl之最終體積。隨後在37℃下，將該等小瓶置於一攪拌機(攪拌速度250 rpm)上。在0小時、1小時、2小時、4小時、16小時及24小時處進行樣品分析。
    於每個時間間隔處，將100 μl樣品收集至裝有0.3 ml乙腈：水85:15體積/體積之一小瓶中，及攪拌5分鐘以使蛋白質沈澱及萃取自由卡巴他賽。隨後使內容物在10,000 rpm下離心10分鐘，及收集澄清上清液並利用HPLC進行量化。
    所採用之HPLC條件如下：
    管柱：150 mm Zorbax SB苯基3.5 μm
    通量：1 mL min；管柱溫度係30℃
    在230 nm(主要用於滴定)及210 nm下進行紫外(UV)雙檢測模式
    等度流動相：乙腈60%/水40%/三氟乙酸0.006%
    卡巴他賽之滯留時間=4.1 min
    結果概述於下表中：
    表：卡巴他賽共軛物奈米顆粒調配物(即，PLA-PEG-Y-琥珀醯-卡巴他賽、PLA-PEG-Y-戊二醯基-卡巴他賽及PLA-PEG-Y-二乙醇醯基-卡巴他賽)於大鼠血漿中之體外數據
    在大鼠血漿中之體外釋放研究已揭示，所有卡巴他賽共軛物調配物展現持續藥物釋放概況，且利用不同連接子合成之共軛物產生不同釋放概況(圖3)。含琥珀醯連接子之共軛物展現最緩慢釋放概況(在24小時內釋放~17%自由卡巴他賽)，其次為含戊二醯基連接子之共軛物(24小時內釋放~27%自由卡巴他賽)，而在含有二乙醇醯基連接子之共軛物情況中觀察到相對快速的釋放(在24小時內釋放~47%自由卡巴他賽)。特定言之，於PLA-PEG-Y-琥珀醯-卡巴他賽之情況中，利用HPLC量化琥珀醯-卡巴他賽之釋放。結果揭示，可忽略濃度之琥珀醯-卡巴他賽自調配物釋放(於奈米顆粒中卡巴他賽之初始量<1%)。總而言之，藥物釋放之順序如下：PLA-PEG-Y-二乙醇醯基-卡巴他賽>PLA-PEG-Y-戊二醯基-卡巴他賽>PLA-PEG-Y-琥珀醯-卡巴他賽奈米顆粒。此等結果說明，具有不同連接子之卡巴他賽共軛物展現不同的體外釋放概況。
    圖1出示藉由依照本發明所獲得之奈米顆粒之透射電子顯微術而獲得之圖。
    圖2出示藉由T0及T+3週時之DLS(動態光散射)測定之奈米顆粒之尺寸分佈。
    圖3出示卡巴他賽共軛物奈米顆粒調配物(即，PLA-PEG-Y-琥珀醯基-卡巴他賽、PLA-PEG-Y-戊二醯基-卡巴他賽及PLA-PEG-Y-二乙醇醯基-卡巴他賽)在大鼠血漿中之體外概況分析。
    (無元件符號說明)
    权利要求:
    Claims (17)
    [1] 一種包含聚乙二醇與聚乳酸之共聚物及活性成份之如式(I)之共軛物，及其等醫藥可接受鹽： 其中：mPEG係甲氧基-聚乙二醇；PLA係聚乳酸；m係聚乙二醇片段(mPEG)之平均分子量及係於100與15 000(以Da表示)之間；n係聚乳酸片段之平均分子量且係於1000與50 000(以Da表示)之間；AP係活性成份殘基；L係連接子，X係氫原子或視需要經選自鹵素原子、OR、CN、CF3、NRR'及COOR基團之一或多個取代基取代之烷基，其中R及R'彼此相同或不同地係氫原子或烷基。
    [2] 如請求項1之共軛物，其中該AP殘基係藉由該AP中存在之OH基鍵結至L。
    [3] 如請求項1或2之共軛物，其中該AP係紫杉醇。
    [4] 如請求項3之共軛物，其中該紫杉醇係選自太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)、卡巴他賽(cabazitaxel)及拉羅他賽(larotaxel)。
    [5] 如請求項1或2之共軛物，其中該活性成份係在2'位置接枝之卡巴他賽。
    [6] 如請求項1或2之共軛物，其中該PLA在其視需要保留之自由羥基末端展現保護基。
    [7] 如請求項1或2之共軛物，其對應於式(Ia)： 其中L、AP及X係如請求項1至6中任一項所定義及p係於1與340之間，且q係於10與700之間。
    [8] 如請求項1或2之共軛物，其對應於下式(Ib)： 其中L及AP係如請求項1至6中任一項所定義及p係於1與340之間，且q係於10與700之間。
    [9] 如請求項1或2之共軛物，其中L表示琥珀酸、戊二酸或二乙醇酸之二羧酸酯衍生物。
    [10] 一種製備如請求項1至9中任一項之共軛物之方法，其包含將如式(III)之化合物： 與對應於下式之該活性成份之衍生物偶合：AP-L-H其中mPEG、m、PLA、n、X、AP及L係如請求項1至9中任一項所定義。
    [11] 一種如式(III)之化合物： 其中mPEG、PLA、m、n及X係如請求項1至9中任一項所定義。
    [12] 一種製備如請求項11之式(III)化合物之方法，其包含：1.藉由適宜保護基對如式(IV)之化合物中之羥基進行選擇性單保護之步驟： 2.將藉此獲得之經單保護之化合物與(PLA)n基團之前驅物偶合，及3.將步驟1中所導入之保護基去保護，其中mPEG、m、PLA、n及X係如請求項1至9中任一項所定義。
    [13] 如請求項12之方法，其中該單保護係藉由以下基團實施： 其中Lg表示離去基團，如鹵素原子或三氟甲烷磺酸酯基。
    [14] 如請求項12或13之方法，其中步驟2係利用前驅物3,6-二甲基-[1,4]-二氧雜環己烷-2,5-二酮藉由開環聚合(ROP)實施。
    [15] 一種奈米顆粒，其包含如請求項1至9中任一項之共軛物。
    [16] 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至9中任一項之共軛物。
    [17] 如請求項1或2之共軛物，其係用於治療及/或預防癌症。
    类似技术:
    公开号 | 公开日 | 专利标题
    JP6165920B2|2017-07-19|活性成分のポリマーコンジュゲート、その製造方法及びそのポリマー中間体
    Wu et al.2012|Core-crosslinked pH-sensitive degradable micelles: a promising approach to resolve the extracellular stability versus intracellular drug release dilemma
    Shahin et al.2010|Novel self-associating poly |-b-poly | based drug conjugates and nano-containers for paclitaxel delivery
    Zhang et al.2005|Synthesis and characterization of the paclitaxel/MPEG-PLA block copolymer conjugate
    Hua et al.2008|Synthesis and characterization of linear-dendron-like poly |-b-poly | copolymers via the combination of ring-opening polymerization and click chemistry
    Kim et al.2011|Thermoresponsive nanostructured polycarbonate block copolymers as biodegradable therapeutic delivery carriers
    Chan et al.2014|Dual location disulfide degradable interlayer-crosslinked micelles with extended sheddable coronas exhibiting enhanced colloidal stability and rapid release
    JP6624603B2|2019-12-25|抗菌性のカチオン性ポリカーボネート
    Dhanikula et al.2007|Influence of molecular architecture of polyether-co-polyester dendrimers on the encapsulation and release of methotrexate
    Kim et al.2010|Novel pH-sensitive polyacetal-based block copolymers for controlled drug delivery
    KR20120039564A|2012-04-25|순수 ｐｅｇ-지질 컨쥬게이트
    JPH10513187A|1998-12-15|高分子量のポリマーを基剤とするプロドラッグ
    Kang et al.2015|pH-responsive dendritic polyrotaxane drug-polymer conjugates forming nanoparticles as efficient drug delivery system for cancer therapy
    JP2019123878A|2019-07-25|新規な陽イオン性ポリホスファゼン化合物、ポリホスファゼン−薬物コンジュゲート化合物およびその製造方法
    Buwalda et al.2018|Stabilization of poly |-poly | star block copolymer micelles via aromatic groups for improved drug delivery properties
    Namazi et al.2011|Synthesis of new functionalized citric acid-based dendrimers as nanocarrier agents for drug delivery
    Lancelot et al.2017|Nanostructures based on ammonium-terminated amphiphilic Janus dendrimers as camptothecin carriers with antiviral activity
    Wang et al.2012|Bioreducible and core‐crosslinked hybrid micelles from trimethoxysilyl‐ended poly |‐S‐S‐poly | block copolymers: Thiol‐ene click synthesis and properties
    CN101199857A|2008-06-18|mPEG-PLA-喜树碱类药物的结合物
    Ramesh et al.2018|Supramolecular poly |-b-poly | pseudo-block copolymer via host-guest interaction for drug delivery
    He et al.2016|Design and synthesis of redox and oxidative dual responsive block copolymer micelles for intracellular drug delivery
    Wang et al.2017|Dynamic covalent linked triblock copolymer micelles for glutathione-mediated intracellular drug delivery
    Hua et al.2007|Synthesis, characterization, effect of architecture on crystallization of biodegradable poly |‐b‐poly | copolymers with different arms and nanoparticles thereof
    JP3538606B2|2004-06-14|パクリタキセルまたはその誘導体の残基を含む水溶性プロドラッグ化合物、その製造方法及びそれを含む薬剤組成物
    Yang et al.2007|Crystallization behavior and micelle formation of star-shaped amphiphilic block copolymer based on dendritic poly |
    同族专利:
    公开号 | 公开日
    UY33741A|2012-03-30|
    FR2967581B1|2012-12-28|
    HRP20170691T1|2018-05-18|
    FR2967581A1|2012-05-25|
    EP2640422B1|2017-03-01|
    ES2625173T3|2017-07-18|
    WO2012066117A1|2012-05-24|
    DK2640422T3|2017-05-22|
    CY1119115T1|2018-02-14|
    JP6013354B2|2016-10-25|
    SI2640422T1|2017-10-30|
    US20130243719A1|2013-09-19|
    AR084728A1|2013-06-05|
    HUE032590T2|2017-10-30|
    US9278137B2|2016-03-08|
    JP6165920B2|2017-07-19|
    PT2640422T|2017-05-23|
    JP2016172858A|2016-09-29|
    RS56021B1|2017-09-29|
    JP2013542972A|2013-11-28|
    PL2640422T3|2017-09-29|
    EP2640422A1|2013-09-25|
    LT2640422T|2017-06-26|
    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    US5766635A|1991-06-28|1998-06-16|Rhone-Poulenc Rorer S.A.|Process for preparing nanoparticles|
    GB9721069D0|1997-10-03|1997-12-03|Pharmacia & Upjohn Spa|Polymeric derivatives of camptothecin|
    CZ2006207A3|2006-03-28|2008-01-16|Zentiva, A. S.|Micelární nosiče léčiv s protinádorovou aktivitou|
    CN101701068B|2009-10-30|2011-09-21|北京化工大学|一种pH响应性的Y型药物输送材料及其制备方法|
    US20110237686A1|2010-03-26|2011-09-29|Cerulean Pharma Inc|Formulations and methods of use|
    CN103408710B|2013-06-19|2015-12-23|北京化工大学|一种生物可降解及糖响应性的y型高分子药物输送材料及制备|US5451558A|1994-02-04|1995-09-19|Goal Line Environmental Technologies|Process for the reaction and absorption of gaseous air pollutants, apparatus therefor and method of making the same|
    WO2014015422A1|2012-07-27|2014-01-30|Ontario Institute For Cancer Research|Cellulose-based nanoparticles for drug delivery|
    JP6118914B2|2012-12-28|2017-04-19|ターベダ セラピューティクス インコーポレイテッドＴａｒｖｅｄａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．|放出制御型の固体ポリマーナノ粒子|
    MX370490B|2013-09-16|2019-12-16|Astrazeneca Ab|Nanopartículas poliméricas terapéuticas y métodos para su elaboración y uso.|
    KR20180112060A|2016-02-23|2018-10-11|타베다 세라퓨틱스, 인코포레이티드|Hsp90 표적화된 접합체 및 이의 입자 및 제형|
    法律状态:
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
    FR1059561A|FR2967581B1|2010-11-19|2010-11-19|Conjugues polymeriques de principes actifs, leur procede de preparation et leurs intermediaires polymeriques|
    [返回顶部]