 分子の高感度検出の方法および組成物
专利摘要:
本発明は、分子の高感度検出を用いて被験体における状態を検出及びモニタリングする方法を開示している。本発明は、被験体における状態を検出またはモニタリングする方法を提供し、その方法は、被験体からの第１試料中の第１マーカーの検出、および第２マーカーの検出を含み、第１マーカーには、バイオマーカー、例えば心筋トロポニン−Ｉ（ｃＴｎＩ）または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が含まれ、第１マーカーの検出限界は１０ｐｇ／ｍｌ約より小さい。第２マーカーは、バイオマーカー、生理学的マーカー、分子マーカーまたは遺伝子マーカーであり得る。 公开号:JP2011513753A 申请号:JP2010549864 申请日:2009-03-04 公开日:2011-04-28 发明作者:サラ・リ；ジョン・トッド；ダグラス・ヘルド；フィリップ・ジェイ・ゴイックス；リチャード・エイ・リビングストン；ロバート・プスカス 申请人:シンギュレックス・インコーポレイテッド； IPC主号:G01N33-68
专利说明:
[0001] ［相互参照］ 本出願は、米国特許仮出願第６１／０３３，８９７号（２００８年３月５日出願、発明の名称「Ｍｅｔｈｏｄｓａｎｄ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｈｉｇｈｌｙ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」）および米国特許仮出願第６１／０３８，７１４号（２００８年３月２１日出願、発明の名称「Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ａｓｓａｙｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｕｓｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆＶＥＧＦ」）に対する、米国特許法３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９に基づく優先権の利益を主張する；その出願の両方は、それらの全体を引用することによって本明細書に組み込まれる。] 背景技術 [0002] 生物医学研究、医療診断、予後診断、モニタリングおよび治療の選択、バイオテロの検出、および体積が小さく低濃度の被分析物の多数の試料の分析を伴う他の分野における進歩によって、かつてないほど低濃度で、試料中の粒子を高感度に検出できる試料分析システムの開発がもたらされた。米国特許第４，７９３，７０５号および第５，２０９，８３４号において、極めて高感度の検出が達成された従来のシステムが記載されている。本発明は、この分野における更なる発展を提供する。] [0003] 一の態様において、本発明は、被験体における状態を検出またはモニタリングする方法を提供し、この方法は、被験体からの第１試料における第１マーカーを検出すること、および第２マーカーを検出することを含み、ここで第１マーカーには、心筋トロポニン−Ｉ（ｃＴｎＩ）または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が含まれ、第１マーカーの検出限界は約２０ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、少なくとも１つのマーカーの検出は、マーカーに対するラベルに試料を接触させること、およびラベルの有無を検出することを含み、ラベルの存在の検出は、対応するマーカーの存在を意味する。いくつかの態様において、ラベルは蛍光部分を含み、検出は、ラベルが単一分子検出器を通過することを含み、単一分子検出器は以下のものを含んでなる：（ａ）蛍光部分を刺激するための電磁放射線源；（ｂ）電磁波源から放射される電磁放射線を受容するためのインタロゲーション・スペース；および（ｃ）刺激された蛍光部分の電磁気学的特性を決定するために、インタロゲーション・スペースに操作可能に接続される電磁放射線検出器。] [0004] いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約１０ｐｇ／ｍｌ〜約０．０１ｐｇ／ｍｌの範囲である。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約１０ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約０．５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約０．１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約０．０５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約０．０１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約０．００５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第１マーカーの検出限界は約０．００１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約２０％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約１００％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約７５％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約５０％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約２５％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約２０％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約１５％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約１０％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、検出限界の変動係数（ＣＶ）は約５％〜約１％の範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約１０μｌ〜約０．１μｌの範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約１００μｌ〜約０．１μｌの範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約７５μｌ〜約０．１μｌの範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約５０μｌ〜約０．１μｌの範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約２５μｌ〜約０．１μｌの範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約２０μｌ〜約０．１μｌの範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約５μｌ〜約０．１μｌの範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約１μｌ〜約０．１μｌの範囲である。いくつかの態様において、試料サイズは約１００μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約７５μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約５０μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約２５μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約２０μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約１５μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約１０μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約５μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約２μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約１μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約０．５μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約０．１μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約０．０５μｌより小さい。いくつかの態様において、試料サイズは約０．０１μｌより小さい。] [0005] いくつかの態様において、本方法は、第１試料を２つ又はそれより多くのアリコートに分割すること、およびその２つ又はそれより多くのアリコート中の少なくとも１つのマーカーを検出することを更に含む。いくつかの態様において、試料には血漿、血清、細胞溶解物または組織試料が含まれる。いくつかの態様において、試料には、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）、血液、血清、血漿、尿、鼻腔スワブ、脳脊髄液、胸膜液、滑液、腹水、羊水、胃液、リンパ液、間質液、組織ホモジネート、細胞抽出物、唾液、痰、便、生理学的分泌物、涙液、粘液、汗、母乳、精液、精漿、膣分泌物、潰瘍および他の表面皮疹からの液体、水疱、および膿瘍、ならびに正常組織、悪性組織および疑わしい組織、または目標とする件の粒子を含有し得る他の何らかの身体構成要素の生検を含む組織抽出物が含まれる。細胞もしくは組織培養物または培養ブロス等の他の同様の検体も対象となる。] [0006] いくつかの態様において、第２マーカーにはバイオマーカー、生理学的マーカーまたは遺伝子マーカーが含まれる。いくつかの態様において、第２マーカーにはタンパク質が含まれる。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、１０ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、１００ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、７５ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、５０ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、２５ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、２０ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、１５ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、１０ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、５ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、２ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、１ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、０．５ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、０．１ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、０．０５ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。いくつかの態様において、第１マーカーおよび第２マーカーの少なくとも１つが、正常者からの試料において、０．０１ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される。] [0007] いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約１０ｐｇ／ｍｌ〜約０．０１ｐｇ／ｍｌの範囲である。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約１０ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約０．５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約０．１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約０．０５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約０．０１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約０．００５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、第２マーカーの検出限界は約０．００１ｐｇ／ｍｌより小さい。] [0008] いくつかの態様において、第２マーカーにはＢ型ナトリウム利尿ペプチド、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ｃＴｎＩ、ＶＥＧＦ、インスリン、ＧＬＰ−１（活性型）、ＧＬＰ−１（ｔｏｔａｌ）、ＴＲＥＭ１、ロイコトリエンＥ４、Ａｋｔ１、Ａβ−４０、Ａβ−４２、ＦａｓリガンドまたはＰＳＡが含まれる。いくつかの態様において、第２マーカーはサイトカインである。いくつかの態様において、サイトカインはＧ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１α、ＩＬ−１０、ＩＬ−２２、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−２１、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−１５、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１α、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７α、ＩＬ−１β、ＭＣＰ、ＩＬ−３２またはＲＡＮＴＥＳである。いくつかの態様において、サイトカインはＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−７、ＩＬ−１αまたはＩＬ−１βである。いくつかの態様において、第２マーカーにはアポリポタンパク質、虚血修飾アルブミン（ＩＭＡ）、フィブロネクチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）またはミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）が含まれる。] [0009] いくつかの態様において、本発明の方法は、第１マーカーの濃度を決定すること、および、第２マーカーがタンパク質を含む場合、第２マーカーの濃度を決定することを更に含む。いくつかの態様において、本発明の方法は、第２マーカーがタンパク質を含む場合、第２マーカーの濃度に対する第１マーカーの濃度の比を決定することを含む。] [0010] いくつかの態様において、第２マーカーには生理学的マーカーが含まれる。いくつかの態様において、生理学的マーカーには心電図（ＥＫＧ）、ストレス試験、放射性映像（ｎｕｃｌｅａｒ ｉｍａｇｉｎｇ）、超音波、インスリン耐性、ボディマス指数、血圧、年齢、性別または睡眠時無呼吸が含まれる。] [0011] いくつかの態様において、第２マーカーには分子マーカーが含まれる。いくつかの態様において、分子マーカーにはコレステロール、ＬＤＬ／ＨＤＬ／Ｑ−ＬＤＬ、トリグリセリド、尿酸、クレアチニン、血中ブドウ糖（または血糖）またはビタミン−Ｄが含まれる。いくつかの態様において、分子マーカーにはトリグリセリドまたはＬＤＬ／ＨＤＬ／Ｑ−ＬＤＬの亜分画が含まれる。] [0012] いくつかの態様において、第２マーカーには遺伝子マーカーが含まれる。いくつかの態様において、遺伝子マーカーには、ＡｐｏＥ等のアポリポタンパク質をエンコードする遺伝子の変異が含まれる。いくつかの態様において、遺伝子マーカーには一塩基多型（ＳＮＰ）が含まれる。いくつかの態様において、遺伝子マーカーには挿入、欠失、融合または他の変異が含まれる。いくつかの態様において、遺伝子マーカーにはＤＮＡメチル化またはインプリンティング等のエピジェネティックマーカーが含まれる。] [0013] 本発明の方法のいくつかの態様において、病態には、心臓障害、炎症性疾患、増殖性疾患、代謝異常、血管形成、アテローム性動脈硬化または糖尿病が含まれる。いくつかの態様において、心臓障害には、心筋梗塞、壊死、心筋機能障害、不安定狭心症、斑、心不全、冠動脈疾患またはリウマチ性心疾患が含まれる。いくつかの態様において、増殖性疾患には癌が含まれる。いくつかの態様において、癌には乳癌、前立腺癌またはリンパ腫が含まれる。] [0014] いくつかの態様において、本発明の方法は、被験体からの第１試料と第２試料との間でマーカーの濃度変化を測定することを更に含み、それにより、その変化は、病態を検出またはモニタリングするのに用いられる。いくつかの態様において、本発明の方法は、被験体からの第１試料と第２試料との間で、第１マーカーおよび第２マーカーの濃度比における変化を測定することを更に含み、それにより、その変化は、病態を検出またはモニタリングするのに用いられる。いくつかの態様において、被験体からの第１試料の採取と第２試料の採取との間に医療処置を行う。いくつかの態様において、医療処置には、外科的処置、ストレス試験または治療的介入が含まれる。いくつかの態様において、被験体からの一連の試料が、病態を検出またはモニタリングするのに用いられる。いくつかの態様において、一連の試料を時間と共に収集し、一連の試料における濃度変化を評価する。] [0015] いくつかの態様において、本発明によるモニタリングは、病気の進行、病気の再発、リスク評価、治療効果または外科的効果のモニタリングを含む。] [0016] 一の態様において、本発明は、試料中の単一粒子を検出する方法を提供し、その方法は、（ａ）粒子が存在する場合、その粒子をラベルでラベリングすること；および（ｂ）ラベルの有無を検出することを含み、ラベルの存在の検出は試料中に単一粒子が存在することを意味し、単一粒子の検出限界は２０ｐｇ／ｍｌより小さく、単一粒子には、心筋トロポニン−Ｉ（ｃＴｎＩ）、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰまたはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、ＴＲＥＭ−１、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ロイコトリエンＥ４（ＬＴＥ４）、形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）、Ａｋｔ１、Ａβ−４０、Ａβ−４２、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の単一分子、フラグメントまたは複合体が含まれる。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約１０ｐｇ／ｍｌ〜約０．０１ｐｇ／ｍｌの範囲である。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約１０ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約０．５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約０．１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約０．０５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約０．０１ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約０．００５ｐｇ／ｍｌより小さい。いくつかの態様において、単一粒子の検出限界は約０．００１ｐｇ／ｍｌより小さい。] [0017] 一の態様において、本発明は、２つ又はそれより多くのバイオマーカーに対する２つ又はそれより多くの抗体を含有する組成物を含むキットを提供し、ここで、２つ又はそれより多くの抗体は蛍光色素部分に結合し、２つ又はそれより多くのバイオマーカーは上述の粒子を含み、当該部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、少なくとも約２００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下であり、組成物は、適切なパッケージングの中に包まれている。] [0018] ［引用による組み込み］ 本明細書において言及する全ての出版物、特許および特許出願は、各個別の出版物、特許または特許出願が引用により組み込まれたと具体的かつ個別に示されたのと同程度に、引用することにより本明細書に組み込まれる。] [0019] 本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲において詳細に明記される。本発明の原理が用いられている例示的態様を明記する以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することによって、本発明の特徴および利点のより良い理解が得られるだろう。] 図面の簡単な説明 [0020] 図１Ａおよび１Ｂは、単一粒子分析器の構成要素の配置の概略図を示す。図１Ａは１つの電磁波源および１つの電磁波検出器を有する分析器を示す。 図１Ｂは、２つの電磁波源および１つの電磁波検出器を有する分析器を示す。 図２Ａおよび２Ｂは、単一粒子分析器のためのキャピラリーフローセルの概略図を示す。図２Ａは、１つの電磁波源を有する分析器のフローセルを示す。 図２Ｂは、２つの電磁波源を有する分析器のフローセルを示す。 図３Ａおよび３Ｂは、単一粒子分析器のレーザーおよび検出器の光学機器構成の、常套的（Ａ）および共焦点（Ｂ）配置を示す概略図を示す。図３Ａは、１つの電磁波源および１つの電磁波検出器を有する分析器の配置を示す。 図３Ｂは、２つの電磁波源および２つの電磁波検出器を有する分析器の配置を示す。 図４は、複数のマーカー検出または状態のモニタリングのフローチャートを示す。 図５は、顧客のワークステーションがリモート・コンピュータからの分析結果を受け取るコンピュータシステムを示す。 図６は、ｃＴｎＩの濃度範囲に対する線形化された検量線を示す。 図７Ａは、０．１〜０．２ｐｇ／ｍｌのＬｏＤにおける、１００μｌ試料および５０μｌ試料のｃＴｎＩ分析感度を示すグラフである。 図７Ｂは、検量線信号の下端を示すグラフである。 図８は、対応する１０％の変動係数（ＣＶ）によって９９パーセンタイルにおいて設定される、７ｐｇ／ｍｌのｃＴｎＩ濃度におけるｃＴｎＩに対する生物学的閾値（カットオフ濃度）を示す。 図９は、 本発明の分析器システムを用いて規定されるｃＴｎＩの分析結果の、米国標準技術局（ＮＩＳＴ）によって提供される標準測定との相関関係を示す（Ｒ２＝０．９９９９）。 図１０は、緊急治療室において胸の痛みを示す患者からの一連の血清試料中のｃＴｎＩの検出を示す。本発明の分析器システムを用いて行われる測定を、市販のアッセイを用いて行われる測定と比較した。 図１１は、ｃＴｎＩの正常な生物学的濃度、および胸の痛みを示している患者からの血清試料中のｃＴｎＩ濃度の分布を示す。 図１２はＬＴＥ４に関する競合曲線を示す。ＬＯＤは１．５ｐｇ（ＬＴＥ４）／ｍｌであると決定された。 図１３は、Ａｋｔ１濃度に関する検量線を示すグラフを図示する。ＬＯＤは２５ｐｇ（Ａｋｔ１）／ｍｌであると計算された。 図１４は、ＴＧＦβ濃度に関する検量線を示すグラフを図示する。ＬＯＤは、３５０ｐｇ（ＴＧＦβ）／ｍｌであると計算された。 図１５は、試料中の単一タンパク質分子、ならびに蛍光部分およびタンパク質分子に対する結合パートナーを含む少なくとも１つのラベルを検出するための分析器システムを有するキットの配置図を示し、分析器は、蛍光部分を刺激するための電磁放射線源；ラベルを通すためのキャピラリーフローセル；キャピラリーフローセルにおいてラベルを移動させるための駆動力源；電磁波源から放射される電磁放射線を受け取るための、キャピラリーフローセル内に規定されたインタロゲーション・スペース；および刺激された蛍光部分の電磁気学的特性を測定するための、インタロゲーション・スペースに操作可能に接続された電磁放射線検出器を含んでなり、蛍光部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、少なくとも約２００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下である。 図１６は、単一粒子分析器システムに対して開発されたサンドウィッチ分子免疫測定において測定されたＴＲＥＭ−１の検量線を示す。分析の線形範囲は１００〜１５００ｆＭである。 図１７Ａ〜ＦはＩＬ−６およびＩＬ−８の検出を図示する。Ａ）市場で入手可能なキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス）によって希釈されたＩＬ−標準物質は、０．１〜１０ｐｇ／ｍｌの間で線形応答をもたらした。 Ｂ）１ｐｇ／ｍｌより低濃度のＩＬ−６検量線。 Ｃ）血液バンクドナーのＥＤＴＡ標本において同定されたＩＬ−６の分布。 Ｄ）血液バンクドナーのＥＤＴＡ標本において同定されたＩＬ−８の分布。 Ｅ）任意の被分析物の低濃度における検出範囲は、分析器の検出を、分子のカウント（デジタル信号）から、より高濃度の被分析物において発生する光子の総数（アナログ信号）の検出に切り替えることによって、より高濃度に拡張し得る。単一粒子分析器は、６ｌｏｇの拡張された線形ダイナミックレンジを有する。６−ｌｏｇの検出レンジは、デジタル検出からアナログ検出への切り替えに基づいている。 Ｆ）個別の粒子によって放出される光子をカウントする（デジタル信号）ことによって決定される、ＩＬ−６の低濃度範囲（０．１ｆｇ／ｍｌ〜１０ｆｇ／ｍｌ）、およびＩＬ−６の高濃度範囲（１０ｆｇ／ｍｌ〜１ｐｇ／ｍｌ）を示す非線形検量線。 図１８は、本発明の分析の、常套的分析との比較を示す。 図１９Ａは、ヒトＶＥＧＦ分析の性能を示すグラフである。 図１９Ｂは、最も低い濃度における分析性能のグラフである。 図２０Ａは、マウスＶＥＧＦ分析の性能を示すグラフである。 図２０Ｂは、最も低い濃度における分析性能のグラフである。 図２１は、本発明のＶＥＧＦ分析と、ヒト血漿のＥＬＩＳＡ分析とを比較するグラフである。 図２２Ａは、細胞溶解物において検出されるＶＥＧＦのレベルと、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１胸腺癌細胞を用いた培地とを比較するグラフである。 図２２Ｂは、細胞溶解物において検出されるＶＥＧＦのレベルと、ＨＴ−２９結腸腺癌細胞を用いた培地とを比較するグラフである。 図２３は、本発明のＶＥＧＦ分析と、マウス血漿試料に対するＥＬＩＳＡ分析との比較である。 図２４Ａは、細胞溶解物、およびＢ１６黒色腫マウス細胞株を用いた培地において検出されたマウスＶＥＧＦの濃度を示すグラフである。 図２４Ｂは、細胞溶解物、および４Ｔ１乳癌を用いた培地において検出されたマウスＶＥＧＦの濃度を示すグラフである。 図２４Ｃは、細胞溶解物、およびＣＴ２６結腸癌細胞株を用いた培地において検出されたマウスＶＥＧＦの濃度を示すグラフである。 図２５Ａは、ＶＥＧＦの高感度検出を示すグラフを図示する。 図２５Ｂは、下端における検量線信号を示す。 図２６は、３つの異なる免疫測定フォーマット：１）磁性微粒子をベースとする単一分子カウント（ＭＰ−ＳＭＣ）；２）３８４−ウェルプレートをベースとする単一分子カウント（Ｐｌａｔｅ−ＳＭＣ）；および３）西洋ワサビペルオキシダーゼをベースとする酵素免疫吸着法（ＨＲＰ−ＥＬＩＳＡ）を用いたヒトＶＥＧＦ検出の、予測されたレベルに対する測定されたレベルを示す。 図２７Ａは、健康な患者および乳癌患者の血漿試料１０μｌにおいて検出されたヒトＶＥＧＦのレベルを示す。標準的なＥＬＩＳＡフォーマット（ＬＯＤ＝３１．２ｐｇ／ｍｌ）に対する、本発明の方法（Ｅｒｒｅｎａ；ＬＯＤ＝３．５ｐｇ／ｍｌ）を用いた検出限界（ＬＯＤ）を示す。 図２７Ｂは、１０μｌ溶解物試料における同様のデータを示す。 図２８Ａ〜Ｃは、ＶＥＧＦのアナログおよびデジタル測定を組み合わせたものを示す。 図２９Ａは、Ａβ−４０分析の選択性（または特異性）および線形性を示すグラフである。 図２９Ｂは、Ａβ−４２分析の選択性および線形性を示すグラフである。 図３０Ａは、ＩＬ−１αに関する分析のカーブフィッティングを示すグラフである。 図３０Ｂは、ＩＬ−１α分析の検量線信号の下端を示すグラフである。 図３１Ａは、ＩＬ−１β分析のカーブフィッティングを示すグラフである。 図３１Ｂは、ＩＬ−１βカーブ信号の下端検量線を示す。 図３２Ａは、ＩＬ−４分析のカーブフィッティングを示すグラフである。 図３２Ｂは、下端におけるＩＬ−４分析の検量線信号である。 図３３Ａは、ＩＬ−６分析のカーブフィッティングを示すグラフである。 図３３Ｂは、下端におけるＩＬ−６分析の検量線信号である。] 図１０ 図１１ 図１２ 図１３ 図１４ 図１５ 図１６ 図１７Ａ 図１７Ｂ 図１７Ｃ [0021] ［概要］ Ｉ．緒言 ＩＩ．本発明の方法および組成物による高感度検出に関する分子 Ａ．総則 Ｂ．マーカー ＩＩＩ．ラベル Ａ．結合パートナー １．抗体 Ｂ．蛍光部分 １．色素 ２．量子ドット Ｃ．結合パートナー−蛍光部分組成物 ＩＶ．分子の高感度分析 Ａ．試料 Ｂ．試料調製 Ｃ．件の分子の検出および濃度の測定 Ｖ．分子の高感度分析に適した機器およびシステム Ａ．装置／システム Ｂ．単一粒子分析器 １．電磁放射線源 ２．キャピラリーフローセル ３．駆動力 ４．検出器 Ｃ．サンプリングシステム Ｄ．試料調製システム Ｅ．試料の回収 ＶＩ．分子の高感度分析を用いる方法 Ａ．方法 Ｂ．例示的マーカー １．心臓障害 ２．感染症 ３．サイトカイン ａ．インターロイキン１ ｂ．インターロイキン４ ｃ．インターロイキン６ ４．炎症マーカー ａ．ロイコトリエンＥ４ ｂ．ＴＧＦβ ５．Ａｋｔ１ ６．Ｆａｓリガンド ７．ＶＥＧＦ ８．アミロイドベータタンパク質 Ｃ．多重マーカーパネル １．多重バイオマーカーパネル ２．混合マーカーパネル Ｄ．検出およびモニタリング Ｅ．臨床的方法 ＶＩＩ．キット ＶＩＩＩ．実施例] [0022] ［Ｉ．緒言］ 本発明は、単一分子の高感度検出のための、および試料中の分子濃度の測定のための機器、キット、組成物および方法を提供する。いくつかの態様において、本発明の機器、組成物、方法およびキットの感度および精度は、以下のものから選択される要素の組み合わせによって達成され得るが、これらの要素に限定されない。適切な波長および出力を有する電磁波源、適切なインタロゲーション・スペース寸法、高開口数のレンズ、単一光子を検出できる検出器、ならびに単一分子をカウントするためのデータ分析システム。本発明の機器は、「単一分子検出器」または「単一粒子検出器」と呼ばれ、用語「単一分子分析器」および「単一粒子分析器」によっても包含される。いくつかの態様において、本発明のキットおよび方法の感度および精度は、本発明の機器を、以下のものから選択される要素の組み合わせと一緒に用いることによって達成されるが、これらの要素に限定されない。単一分子のレベルでの分子の検出を可能にする特性を示す、分子に対するラベル、および本明細書に記載の機器においてラベルを分析する方法。] [0023] 本発明の機器、キットおよび方法は、単一分子または少数の分子の高感度かつ高精度の検出において、および試料中の分子濃度の決定に関して特に有用である。] [0024] いくつかの態様において、本発明は、単一分子の検出による分子濃度の高感度検出および測定のための機器およびキット、そのような検出および測定のためのラベル、ならびにそのような機器およびラベルを試料分析において用いる方法を提供する。特に、本発明の機器、キットおよび方法の感度および精度により、極めて低い濃度、例えば、約１００、１０、１、０．１、０．０１または０．００１フェムトモル濃度より低い濃度における、分子（例えば生物学的状態に関するマーカー）の濃度の検出および測定が可能となる。更なる態様において、本発明の機器およびキットは、試料の希釈または他の処理を必要とすることなく広いダイナミックレンジの濃度にわたって、例えば１０５倍、１０６倍または１０７倍より大きい濃度範囲にわたって、試料中の種の濃度、例えば分子の濃度を測定することができる。] [0025] 本発明の機器、キットおよび方法の高感度により、検出感度が不足しているので従来は有用でなかったマーカー、例えば生物学的マーカーの使用が可能となる。本発明の機器、キットおよび方法の高感度は、新規のマーカーの確立も容易にし得る。生物学的状態を決定するのに有用であり得るが、マーカーの低濃度範囲の測定における現在の限界により、現在のところ実用的でない、現在入手可能な多数のマーカーが存在する。いくつかの場合において、異常に高レベルのマーカーは現在の方法によって検出可能であるが、正常範囲は知られていない。いくつかの場合において、異常に高いレベルのマーカーは現在の方法によって検出可能であるが、正常範囲は確立されていなかった。いくつかの場合において、マーカーの上方正常範囲は検出可能であるが、下方正常範囲または正常範囲より下のレベルは検出不可能である。いくつかの場合、例えば癌または感染症のマーカーにおいて、いずれのレベルのマーカーも、生物学的状態の存在を示し得、増大した検出感度は早期診断に対する利点である。いくつかの場合において、複数の時点にわたるマーカー濃度における変化速度（または変化率）または変化の欠如は、最も有用な情報を提供するが、現在の分析方法は、通常は最も処理し易い病態の初期段階におけるタイムポイントサンプリングを許容しない。いくつかの場合において、複雑な試料処理および時間を要する分析を必要とする方法のように、臨床状況において実用的または有用でない煩雑な方法によってのみ、マーカーは臨床的に有用なレベルで検出され得る。更に、十分に低濃度で現在の方法によって存在を検出することが依然として極めて困難または不可能である、生物学的状態の潜在的マーカーが存在する。] [0026] 本発明の分析方法および組成物は、生物学的状態に関するマーカーの、従来はマーカーを検出できなかった濃度での検出を可能にする、従って、確認マーカーまたは限られた研究状況でのみ有用なマーカーから、診断マーカー、予後診断マーカー、治療向けマーカー、または臨床状況および／もしくは臨床試験を含む大規模臨床状況において有用な他の種類のマーカーへと、そのようなマーカーの「再目的化」を可能にするレベルの感度、精度およびロバスト性を提供する。そのような方法により、そのようなマーカーに対する正常および異常範囲の決定が可能となる。] [0027] そのように再目的化されたマーカーは、例えば、正常状態（正常範囲）の検出、（例えば、薬の投与等の処置に対する）レスポンダー（または応答者）／ノンレスポンダー（または非応答者）の検出；早期疾患または病理学的発現の検出（例えば、癌の早期検出、心虚血の早期検出）；病期（例えば癌）；疾患のモニタリング（例えば、糖尿病のモニタリング、治療後の癌の再発に関するモニタリング）；疾患のメカニズムの研究；および薬物治療の毒性等の治療毒性の研究に用いられ得る。] [0028] 従って、本発明は、マーカーの高感度検出のための方法および組成物、ならびにマーカーの正常および異常レベルに関する値を確立する更なる方法を提供する。更なる態様において、本発明は、マーカーに対して確立された値に基づく、診断、予後診断および／または治療の選択の方法を提供する。本発明は、そのような方法において用いるための組成物、例えば、マーカーの超高感度検出のための検出試薬も提供する。] [0029] ［ＩＩ．本発明の方法および組成物による高感度検出に関する分子］ 本発明の機器、キットおよび方法は、複数の異なる種類の単一分子の濃度の高感度検出および決定に使用可能である。特に、機器、キットおよび方法は、生物学的状態のマーカー濃度の高感度検出および決定において有用である。「単一分子の検出」は、本明細書においてその用語を用いる場合、直接的検出および間接的検出の両方を指す。例えば、単一分子を蛍光ラベルでラベリングしてよく、分子−ラベル複合体を明細書に記載の機器において検出する。別法として、単一分子を蛍光ラベルでラベリングしてよく、その後、蛍光ラベルを単一分子から分離し、ラベルを本明細書に記載の機器において検出する。用語「単一分子の検出」は、両方の検出形態を包含する。] [0030] ［Ａ．総則］ 本発明の分析器および関連する方法を用いて検出され得る分子の例として以下のものが挙げられる：タンパク質、核酸、炭水化物等の生体高分子および有機および無機の小分子。本明細書に記載の機器、キットおよび方法は特に、生物学的試料中のタンパク質および小分子の単一分子の検出、ならびに試料中のそのような分子の濃度の決定において有用である。] [0031] 用語「タンパク質」、「ポリペプチド」、「ペプチド」および「オリゴペプチド」は、本明細書において互いに置き換え得るように用いられ、それらの用語には、ペプチド結合によって結合した２つ又はそれより多くのアミノ酸を含む任意の組成物が含まれる。ポリペプチドには、２０種の天然に存在するアミノ酸と一般に呼ばれる２０種のアミノ酸以外のアミノ酸が含まれ得ることが理解され得る。また、ポリペプチドには、末端アミノ酸を含む１つまたはそれより多くのアミノ酸が含まれ得、これらは、当該技術分野において公知の方法によって（自然に、あるいは人工的に）修飾される。ポリペプチド修飾の例として、例えばグリコシル化による修飾、または他の翻訳後修飾が挙げられる。本発明のポリペプチドにおいて存在してよい修飾には以下のものが含まれるがこれらに限定されない。アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、糖化、グリコシル化、ＧＰＩアンカーの形成、水酸化、ヨウ素（またはヨード）化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニン化およびユビキチン化等の、タンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ仲介付加。] [0032] 本発明の機器、キットおよび方法によって検出された分子は遊離していてよく、または複合体の一部、例えば抗体−抗原複合体、もしくはより一般的にはタンパク質−タンパク質複合体、例えばトロポニンもしくは前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の複合体の一部であってよい。タンパク質に言及する場合、本発明は断片（またはフラグメント）、ポリペプチド、突然変異体、変異型またはそれらの複合体を検出し得ることを、当業者は理解するであろう。] [0033] ［Ｂ．生物学的状態のマーカー］ いくつかの態様において、本発明は、生物学的マーカーの高感度検出、ならびに診断、予後診断および／または治療方法の決定におけるそのようなマーカーの使用のための組成物および方法を提供する。] [0034] 本発明のマーカーは、例えば、生物の生物学的状態（例えば、病気の状態または病気でない状態等の病態）に関連する組成物および／もしくは分子、または組成物および／もしくは分子の複合体のいずれかであってよい。マーカーは、例えば、小分子、ポリペプチド、ＤＮＡおよびＲＮＡ等の核酸、リン脂質またはミセル等の脂質、ミトコンドリアまたは葉緑体等の細胞成分等であり得る。本発明で意図されるマーカーは、既に公知であり得、または未知であり得る。例えば、いくつかの態様において、本発明の方法は、件の生物学的状態または件の状態に関するマーカーとして使用可能である新規のポリペプチドを同定してよく、一方、他の態様において、既知のポリペプチドが、件の生物学的状態または状態に関するマーカーとして同定される。本発明のシステムを用いると、それらのマーカー、例えば生物の生物学的状態の決定に用いられる高い可能性を有するが低濃度でのみ存在するポリペプチド（病変組織から「漏れた」ポリペプチド等）を観測し得ることが可能である。有用性に関して高い可能性を有する他のマーカーまたはポリペプチドは、疾患に関連するマーカーまたはポリペプチド、例えば、腫瘍−宿主環境において発生するマーカーまたはポリペプチドであってよい。生物学的状態に関する情報を提供するいずれの適切なマーカーも、本発明の方法および組成物において使用してよい。「マーカー」には、本明細書においてその用語を用いる場合、生物からの試料において検出してよい分子であって、それらの検出または定量が生物の生物学的状態に関する情報を提供するいずれの分子も含まれる。] [0035] 生物学的状態には以下のものが含まれるが、それらに限定されない。表現型の状態；生物に影響を及ぼす状態；進行状態；年齢；健康状態；病理；疾患の検出、治療、または病期；感染；毒性；または化学的要因、環境因子、または薬物因子（薬物反応の表現型検査、薬物毒性の表現型検査、または薬物の有効性の表現型検査等）に対する応答。] [0036] 用語「生物」は、本明細書において用いる場合、少なくとも１つの細胞からなる生物を指す。生物は、単細胞生物と同じくらい単純であり得、または哺乳類と同じくらい複雑であり得る。本発明の生物は、好ましくは哺乳類である。そのような哺乳類は、例えばヒト、または霊長類（例えば、サル、チンパンジー等）、飼い慣らされた動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ等）、家畜（例えば、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ等）もしくは実験動物（例えば、マウス、ラット等）等の動物であり得る。好ましくは、生物はヒトである。] [0037] いくつかの態様において、本発明の方法および組成物は、複数の種類のマーカー、例えばサイトカイン、成長因子、腫瘍マーカー、炎症マーカー、内分泌マーカー、自己免疫マーカー、甲状腺マーカー、心血管マーカー、糖尿病マーカー、感染症マーカー、神経マーカー、呼吸器マーカー、消化管マーカー、筋骨格マーカー、皮膚疾患および代謝マーカーを対象としている。] [0038] 表１は、本発明の方法および組成物によって測定された、これらの種類のマーカーの例を提示し、本発明の方法および組成物によって検出されたマーカーの例示的濃度、および本発明の単一粒子分析器システムによって特定のマーカーに関してカウントされる粒子の数を提示する。] [0039] ] [0040] ] [0041] ] [0042] ［１．サイトカイン］ 研究および診断の両方に対して、サイトカインは、多数の状態、疾患、病理等のマーカーとして有用であり、本発明の組成物および方法は、サイトカインを検出および定量するためのラベル、ならびにサイトカインの正常レベルおよび異常レベルを決定するためにそのようなラベルを用いる方法、ならびにそのようなレベルに基づく診断、予後診断および／または治療の決定の方法を含む。] [0043] 現在のところ、調節の調和または不一致が臨床的に興味深い１００種類を超えるサイトカイン／ケモカインが存在する。特定の疾患過程をサイトカインのレベルにおける変化と関連付けるために、理想的なアプローチは、試料を、所定の１つのサイトカインまたは複数のサイトカインに関して高い感度で分析することを必要とする。現在マーカーパネルにおいて使用されており、かつ本発明の方法および組成物において使用してよい例示的サイトカインには以下のものが含まれるが、これらに限定されない。ＢＤＮＦ、ＣＲＥＢ ｐＳ１３３、ＣＲＥＢ Ｔｏｔａｌ、ＤＲ−５、ＥＧＦ、ＥＮＡ−７８、エオタキシン、脂肪酸結合タンパク質、塩基性ＦＧＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＧＣＰ−２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子ＧＭ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、成長関連癌遺伝子−ケラチノサイト（ＧＲＯ−ＫＣ）、ＨＧＦ、ＩＣＡＭ−１、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、インターロイキンＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１２ ｐ４０、ＩＬ−１２ ｐ４０／ｐ７０、ＩＬ−１２ ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１Ｆ３、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、インターフェロン誘導タンパク質（１０ ＩＰ−１０）、ＪＥ／ＭＣＰ−１、ケラチノサイト（ＫＣ）、ＫＣ／ＧＲＯａ、ＬＩＦ、リンホタクチン、Ｍ−ＣＳＦ、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＭＣＰ−１（ＭＣＡＦ）、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−５、ＭＤＣ、ＭＩＧ、炎症性マクロファージ（ＭＩＰ−１α）、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１γ、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−３β、ＯＳＭ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｕｐｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｎｏｒｍａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ（ＲＡＮＴＥＳ）、Ｒｂ（ｐＴ８２１）、Ｒｂ（ｔｏｔａｌ）、Ｒｂ ｐＳｐＴ２４９／２５２、Ｔａｕ（ｐＳ２１４）、Ｔａｕ（ｐＳ３９６）、Ｔａｕ（ｔｏｔａｌ）、組織因子、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、ＴＮＦ−β、ＴＮＦ−ＲＩ、ＴＮＦ−ＲＩＩ、ＶＣＡＭ−１ならびにＶＥＧＦ。いくつかの態様において、サイトカインはＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−３、ＩＬ−１２ ｐ４０、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、ＩＬ−４、ＩＬ−１８、ＩＬ−１０、ＩＬ−５、エオタキシン、ＩＬ−１６、ＭＩＧ、ＩＬ−８、ＩＬ−１７、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２Ｒ（可溶性）、ＩＬ−２、ＬＩＦ／ＨＩＬＤＡ、ＩＬ−１β、Ｆａｓ／ＣＤ９５／Ａｐｏ−１またはＭＣＰ−１である。] [0044] ［２．成長因子］ 成長因子には以下のものが含まれる。アンフィレグリン、ＬＲＩＧ３、ベータセルリン、ニューレグリン−１／ＮＲＧ１、ＥＧＦ、ニューレグリン−３／ＮＲＧ３、エピゲン、ＴＧＦ−α、エピレグリン、ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン−１、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＭＥＦＦ２、ＬＲＩＧ１等のＥＧＦリガンド；ＥＧＦ Ｒ、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４等のＥＧＦ Ｒ／ＥｒｂＢ受容体ファミリー；ＦＧＦリガンドである酸性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１２、塩基性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−１７、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−２０、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−２１、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−２２、ＦＧＦ−１０、ＦＧＦ−２３、ＦＧＦ−１１、ＫＧＦ／ＦＧＦ−７、ＦＧＦ受容体であるＦＧＦ Ｒ１−４、ＦＧＦ Ｒ３、ＦＧＦ Ｒ１、ＦＧＦ Ｒ４、ＦＧＦ Ｒ２、ＦＧＦ Ｒ５、ＦＧＦ調節因子であるＦＧＦ−ＢＰ等のＦＧＦファミリー；ヘッジホッグファミリーであるデザートヘッジホッグ、ソニックヘッジホッグ、インディアンヘッジホッグ；ヘッジホッグ関連分子および調節因子であるＢＯＣ、ＧＬＩ−３、ＣＤＯ、ＧＳＫ−３α／β、ＤＩＳＰ１、ＧＳＫ−３α、Ｇａｓ１、ＧＳＫ−３β、ＧＬＩ−１、Ｈｉｐ、ＧＬＩ−２；ＩＧＦファミリーであるＩＧＦリガンドのＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ受容体（ＣＤ２２１）ＩＧＦ−Ｉ Ｒ、およびＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）ファミリーであるＡＬＳ、ＩＧＦＢＰ−５、ＣＴＧＦ／ＣＣＮ２、ＩＧＦＢＰ−６、Ｃｙｒ６１／ＣＣＮ１、ＩＧＦＢＰ−Ｌ１、エンドカン、ＩＧＦＢＰ−ｒｐ１／ＩＧＦＢＰ−７、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−ｒＰ１０、ＩＧＦＢＰ−２、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＩＧＦＢＰ−３、ＷＩＳＰ−１／ＣＣＮ４、ＩＧＦＢＰ−４；受容体型チロシンキナーゼであるＡｘｌ、ＦＧＦ Ｒ４、Ｃ１ｑ Ｒ１／ＣＤ９３、ＦＧＦ Ｒ５、ＤＤＲ１、Ｆｌｔ−３、ＤＤＲ２、ＨＧＦＲ、Ｄｔｋ、ＩＧＦ−Ｉ Ｒ、ＥＧＦ、Ｒ ＩＧＦ−ＩＩ Ｒ、Ｅｐｈ、ＩＮＳＲＲ、ＥｐｈＡ１、インスリンＲ／ＣＤ２２０、ＥｐｈＡ２、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＥｐｈＡ３、Ｍｅｒ、ＥｐｈＡ４、ＭＳＰ Ｒ／Ｒｏｎ、ＥｐｈＡ５、ＭｕＳＫ、ＥｐｈＡ６、ＰＤＧＦ Ｒα、ＥｐｈＡ７、ＰＤＧＦ Ｒβ、ＥｐｈＡ８、Ｒｅｔ、ＥｐｈＢ１、ＲＴＫ様オーファン受容体１／ＲＯＲ１、ＥｐｈＢ２、ＲＴＫ様オーファン受容体２／ＲＯＲ２、ＥｐｈＢ３、ＳＣＦ Ｒ／ｃ−ｋｉｔ、ＥｐｈＢ４、Ｔｉｅ−１、ＥｐｈＢ６、Ｔｉｅ−２、ＥｒｂＢ２、ＴｒｋＡ、ＥｒｂＢ３、ＴｒｋＢ、ＥｒｂＢ４、ＴｒｋＣ、ＦＧＦ、Ｒ１−４ＶＥＧＦ Ｒ、ＦＧＦ Ｒ１、ＶＥＧＦ Ｒ１／Ｆｌｔ−１、ＦＧＦ Ｒ２、ＶＥＧＦ Ｒ２／ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１、ＦＧＦ Ｒ３、ＶＥＧＦ Ｒ３／Ｆｌｔ−４；プロテオグリカンおよびプロテオグリカン調節因子であるアグリカン、ミメカン、アグリン、ＮＧ２／ＭＣＳＰ、バイグリカン、オステオアドヘリン（Ｏｓｔｅｏａｄｈｅｒｉｎ）、デコリン、ポドカン、ＤＳＰＧ３、δ−サルコグリカン、エンドカン、シンデカン−１／ＣＤ１３８、エンドグリカン、シンデカン−２、エンドレペリン／パールカン、シンデカン−３、グリピカン２、シンデカン−４、グリピカン３、テスチカン（Ｔｅｓｔｉｃａｎ）１／ＳＰＯＣＫ１、グリピカン５、テスチカン２／ＳＰＯＣＫ２、グリピカン６、テスチカン３／ＳＰＯＣＫ３、ルミカン、バーシカン、プロテオグリカン調節因子、アリールスルファターゼＡ／ＡＲＳＡ、グルコサミン（Ｎ−アセチル）−６−スルファターゼ／ＧＮＳ、エキソストシン−ライク２／ＥＸＴＬ２、ＨＳ６ＳＴ２、エキソストシン−ライク３／ＥＸＴＬ３、イズロン酸２−スルファターゼ／ＩＤＳ、ＧａｌＮＡｃ４Ｓ−６ＳＴ；ＳＣＦ、Ｆｌｔ−３リガンドおよびＭ−ＣＳＦ Ｆｌｔ−３、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、Ｆｌｔ−３リガンド、ＳＣＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ Ｒ／ｃ−ｋｉｔ；ＴＧＦ−βスーパーファミリー（炎症マーカーに関して列挙されるものと同様）；ＶＥＧＦ／ＰＤＧＦファミリーであるニューロピリン−１、ＰｌＧＦ、ニューロピリン−２、ＰｌＧＦ−２、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ Ｒα、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ Ｒβ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＰＤＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＶＥＧＦ Ｒ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ Ｒ１／Ｆｌｔ−１、ＰＤＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ Ｒ２／ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１、ＰＤＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ Ｒ３／Ｆｌｔ−４；Ｗｎｔ関連分子、ディックコップ（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ）タンパク質およびＷｎｔ阻害因子であるＤｋｋ−１、Ｄｋｋ−４、Ｄｋｋ−２、Ｓｏｇｇｙ−１、Ｄｋｋ−３、ＷＩＦ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄおよび関連タンパク質であるＦｒｉｚｚｌｅｄ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−８、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−２、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−９、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−３、ｓＦＲＰ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４、ｓＦＲＰ−２、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−５、ｓＦＲＰ−３、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−６、ｓＦＲＰ−４、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−７、ＭＦＲＰ；ＷｎｔリガンドであるＷｎｔ−１、Ｗｎｔ−８ａ、Ｗｎｔ−２ｂ、Ｗｎｔ−８ｂ、Ｗｎｔ−３ａ、Ｗｎｔ−９ａ、Ｗｎｔ−４、Ｗｎｔ−９ｂ、Ｗｎｔ−５ａ、Ｗｎｔ−１０ａ、Ｗｎｔ−５ｂ、Ｗｎｔ−１０ｂ、Ｗｎｔ−７ａ、Ｗｎｔ−１１、Ｗｎｔ−７ｂ；他のＷｎｔ関連分子であるＡＰＣ、クレメン−２、アキシン−１、ＬＲＰ−１、β−カテニン、ＬＲＰ−６、ディシブルド（Ｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ）−１、ノリン（Ｎｏｒｒｉｎ）、ディシブルド−３、ＰＫＣβ１、グリピカン３、ピゴパス（Ｐｙｇｏｐｕｓ）−１、グリピカン５、ピゴパス−２、ＧＳＫ−３α／β、Ｒ−スポンジン（Ｓｐｏｎｄｉｎ）１、ＧＳＫ−３α、Ｒ−スポンジン２、ＧＳＫ−３β、Ｒ−スポンジン３、ＩＣＡＴ、ＲＴＫ様オーファン受容体１／ＲＯＲ１、クレメン−１、ＲＴＫ様オーファン受容体２／ＲＯＲ、および他の成長因子であるＣＴＧＦ／ＣＣＮ２、β−ＮＧＦ、Ｃｙｒ６１／ＣＣＮ１、ノリン、ＤＡＮＣＥ、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＥＧ−ＶＥＧＦ／ＰＫ１、オステオクリン、ヘパソシン、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＨＧＦ、プログラヌリン、ＬＥＣＴ２、トロンボポエチン、ＬＥＤＧＦ、ＷＩＳＰ−１／ＣＣＮ４。] [0045] ［３．炎症マーカー］ 炎症マーカーにはＩＣＡＭ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１−β、ＭＩＰ−１−αおよびＭＭＰ−３が含まれる。更なる炎症マーカーには、インテグリンであるα１β１、α２β１、α３β１、α４β１、α５β１、α６β１、α７β１、α８β１、α９β１、αＶβ１、α４β７、α６β４、αＤβ２、αＬβ２、αＭβ２、αＶβ３、αＶβ５、αＶβ６、αＶβ８、αＸβ２、αＩＩｂβ３、αＩＥＬｂβ７、β−２インテグリン、β−３インテグリン、β−２インテグリン、β−４インテグリン、β−５インテグリン、β−６インテグリン、β−７インテグリン、β−８インテグリン、α−１インテグリン、α−２インテグリン、α−３インテグリン、α−４インテグリン、α−５インテグリン、α−６インテグリン、α−７インテグリン、α−８インテグリン、α−９インテグリン、α−Ｄインテグリン、α−Ｌインテグリン、α−Ｍインテグリン、α−Ｖインテグリン、α−Ｘインテグリン、α−ＩＩｂインテグリン、αＩＥＬｂインテグリン等の接着分子；βＩＧ−Ｈ３、メルシン（Ｍｅｌｕｓｉｎ）、ＣＤ４７、ＭＥＰＥ、ＣＤ１５１、オステオポンチン、ＩＢＳＰ／シアロタンパク質ＩＩ、ＲＡＧＥ、ＩＧＳＦ８等のインテグリン関連分子；Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン等のセレクチン；ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＰＳＧＬ−１、ビトロネクチック、ビトロネクチン受容体、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲン、ラミニン、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＢＬ−ＣＡＭ、ＬＦＡ−２、ＶＣＡＭ−１、ＮＣＡＭ、ＰＥＣＡＭ等のリガンドが含まれる。更なる炎症マーカーには、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ε、−κ、−τ、−ζ、ＩＦＮ−ω、ＩＦＮ−γ、ＩＬ２９、ＩＬ２８ＡおよびＩＬ２８Ｂ、ＩＬ−１、ＩＬ−１αおよびβ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１等のサイトカインが含まれる。更なる炎症マーカーには、共通β鎖、ＩＬ−３Ｒα、ＩＬ−３Ｒβ、ＧＭ−ＣＳＦＲ、ＩＬ−５Ｒα、共通γ鎖／ＩＬ−２Ｒγ、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−２Ｒβ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−７Ｒα／ＣＤ１２７、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１Ｆ３、ＩＬ−１Ｒ８、ＩＬ−１ＲＩ、ＩＬ−１Ｒ９、ＩＬ−１ＲＩＩ、ＩＬ−１８Ｒα／ＩＬ−１Ｒ５、ＩＬ−１Ｒ３／ＩＬ−１Ｒ ＡｃＰ、ＩＬ−１８Ｒβ／ＩＬ−１Ｒ７、ＩＬ−１Ｒ４／ＳＴ２ ＳＩＧＩＲＲ、ＩＬ−１Ｒ６／ＩＬ−１Ｒ ｒｐ２、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−３１ＲＡ、ＣＮＴＦ Ｒα、レプチンＲ、Ｇ−ＣＳＦ Ｒ、ＬＩＦ Ｒα、ＩＬ−６Ｒ、ＯＳＭＲβ、ＩＦＮ−α／βＲ１、ＩＦＮ−α／βＲ２、ＩＦＮ−γＲ１、ＩＦＮ−γＲ２、ＩＬ−１０Ｒα、ＩＬ−１０Ｒβ、ＩＬ−２０Ｒα、ＩＬ−２０Ｒβ、ＩＬ−２２Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７ＲＤ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７Ｂ Ｒ、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−２３Ｒ、ＩＬ−１２Ｒβ１、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＬ−１３Ｒα１等のサイトカイン受容体が含まれる。更なる炎症マーカーには、ＣＣＬ−１、ＣＣＬ−２、ＣＣＬ−３、ＣＣＬ−４、ＣＣＬ−５、ＣＣＬ−６、ＣＣＬ−７、ＣＣＬ−８、ＣＣＬ−９、ＣＣＬ−１０、ＣＣＬ−１１、ＣＣＬ−１２、ＣＣＬ−１３、ＣＣＬ−１４、ＣＣＬ−１５、ＣＣＬ−１６、ＣＣＬ−１７、ＣＣＬ−１８、ＣＣＬ−１９、ＣＣＬ−２０、ＣＣＬ−２１、ＣＣＬ−２２、ＣＣＬ−２３、ＣＣＬ−２４、ＣＣＬ−２５、ＣＣＬ−２６、ＣＣＬ−２７、ＣＣＬ−２８、ＭＣＫ−２、ＭＩＰ−２、ＣＩＮＣ−１、ＣＩＮＣ−２、ＫＣ、ＣＩＮＣ−３、ＬＩＸ、ＧＲＯ、胸腺ケモカイン−１、ＣＸＣＬ−１、ＣＸＣＬ−２、ＣＸＣＬ−３、ＣＸＣＬ−４、ＣＸＣＬ−５、ＣＸＣＬ−６、ＣＸＣＬ−７、ＣＸＣＬ−８、ＣＸＣＬ−９、ＣＸＣＬ−１０、ＣＸＣＬ−１１、ＣＸＣＬ−１２、ＣＸＣＬ−１３、ＣＸＣＬ−１４、ＣＸＣＬ−１５、ＣＸＣＬ−１６、ＣＸＣＬ−１７、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ケメリン（Ｃｈｅｍｅｒｉｎ）等のケモカインが含まれる。更なる炎症マーカーには、ＣＣＲ−１、ＣＣＲ−２、ＣＣＲ−３、ＣＣＲ−４、ＣＣＲ−５、ＣＣＲ−６、ＣＣＲ−７、ＣＣＲ−８、ＣＣＲ−９、ＣＣＲ−１０、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ２、Ｃｈｅｍ Ｒ２３等のケモカイン受容体が含まれる。更なる炎症マーカーには、ＴＮＦ−α、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＡＰＲＩＬ／ＴＮＦＳＦ１３、リンホトキシン、ＢＡＦＦ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、リンホトキシンβ／ＴＮＦＳＦ３、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦ−α／ＴＮＦＳＦ１Ａ、ＥＤＡ、ＴＮＦ−β／ＴＮＦＳＦ１Ｂ、ＥＤＡ−Ａ２、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦＳＦ１０、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＲＡＮＣＥ／ＴＮＦＳＦ１１、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦＳＦ１２等の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）が含まれる。更なる炎症マーカーには、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＮＧＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１６、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、オステオプロテジェリン／ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＢＣＭＡ／ＴＮＦＲＳＦ１７、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＤｃＲ３／ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦ ＲＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ２３、ＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ２２、ＴＲＡＩＬ Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＴＲＡＩＬ Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＤＲ６／ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＲＡＩＬ Ｒ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＥＤＡＲ、ＴＲＡＩＬ Ｒ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＲＯＹ／ＴＮＦＲＳＦ１９、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＷＥＡＫ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１２、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＸＥＤＡＲ等のＴＮＦスーパーファミリー受容体が含まれる。更なる炎症マーカーには、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ−２、ＲＩＰ１、ＴＲＡＦ−３、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ−４、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−６等のＴＮＦスーパーファミリー調節因子が含まれる。更なる炎症マーカーには急性期反応物質および急性期タンパク質が含まれる。更なる炎症マーカーには、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、ＢＭＰ（骨形成タンパク質）、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−３、ＢＭＰ−８、ＢＭＰ−３ｂ／ＧＤＦ−１０、ＢＭＰ−９、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−１０、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−１５／ＧＤＦ−９Ｂ、ＢＭＰ−６、デカペンタプレジック、成長／分化因子（ＧＤＦ）、ＧＤＦ−１、ＧＤＦ−８、ＧＤＦ−３、ＧＤＦ−９ ＧＤＦ−５、ＧＤＦ−１１、ＧＤＦ−６、ＧＤＦ−１５、ＧＤＦ−７、ＧＤＮＦファミリーリガンド、アルテミン、ニュールツリン、ＧＤＮＦ、ペルセフィン（Ｐｅｒｓｅｐｈｉｎ）、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β５、ＬＡＰ（ＴＧＦ−β１）、潜在型ＴＧＦ−β ｂｐ１、潜在型ＴＧＦ−β１、潜在型ＴＧＦ−β ｂｐ２、ＴＧＦ−β１．２、潜在型ＴＧＦ−β ｂｐ４、ＴＧＦ−β２、レフティ（Ｌｅｆｔｙ）、ＭＩＳ／ＡＭＨ、レフティ−１、ノーダル（Ｎｏｄａｌ）、レフティ−Ａ、アクチビンＲＩＡ／ＡＬＫ−２、ＧＦＲα−１／ＧＤＮＦ Ｒα−１、アクチビンＲＩＢ／ＡＬＫ−４、ＧＦＲα−２／ＧＤＮＦ Ｒα−２、アクチビンＲＩＩＡ、ＧＦＲα−３／ＧＤＮＦ Ｒα−３、アクチビンＲＩＩＢ、ＧＦＲα−４／ＧＤＮＦ Ｒα−４、ＡＬＫ−１、ＭＩＳ ＲＩＩ、ＡＬＫ−７、Ｒｅｔ、ＢＭＰＲ−ＩＡ／ＡＬＫ−３、ＴＧＦ−βＲＩ／ＡＬＫ−５、ＢＭＰＲ−ＩＢ／ＡＬＫ−６、ＴＧＦ−β ＲＩＩ、ＢＭＰＲ−ＩＩ、ＴＧＦ−β ＲＩＩｂ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＴＧＦ−β ＲＩＩＩ等のＴＧＦ−βスーパーファミリーリガンドが含まれる。更なる炎症マーカーには、アムニオンレス（Ａｍｎｉｏｎｌｅｓｓ）、ＮＣＡＭ−１／ＣＤ５６、ＢＡＭＢＩ／ＮＭＡ、ノギン（Ｎｏｇｇｉｎ）、ＢＭＰ−１／ＰＣＰ、ＮＯＭＯ、カロンテ（Ｃａｒｏｎｔｅ）、ＰＲＤＣ、ケルベロス（Ｃｅｒｂｅｒｕｓ）１、ＳＫＩ、コーディン、Ｓｍａｄ１、コーディン−ライク１、Ｓｍａｄ２、コーディン−ライク２、Ｓｍａｄ３、ＣＯＣＯ、Ｓｍａｄ４、ＣＲＩＭ１、Ｓｍａｄ５、クリプト、Ｓｍａｄ７、クロスベインレス（Ｃｒｏｓｓｖｅｉｎｌｅｓｓ）−２、Ｓｍａｄ８、クリプティック（Ｃｒｙｐｔｉｃ）、ＳＯＳＴ、ＤＡＮ、潜在型ＴＧＦ−β ｂｐ１、デコリン、潜在型ＴＧＦ−β ｂｐ２、ＦＬＲＧ、潜在型ＴＧＦ−β ｂｐ４、フォリスタチン、ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン−１、フォリスタチン−ライク１、ＴＭＥＦＦ２、ＧＡＳＰ−１／ＷＦＩＫＫＮＲＰ、ＴＳＧ、ＧＡＳＰ−２／ＷＦＩＫＫＮ、ＴＳＫ、グレムリン、バソリン（Ｖａｓｏｒｉｎ）等のＴＧＦ−βスーパーファミリー調節因子が含まれる。更なる炎症マーカーには、アンフィレグリン、ＬＲＩＧ３、ベータセルリン、ニューレグリン−１／ＮＲＧ１、ＥＧＦ、ニューレグリン−３／ＮＲＧ３、エピゲン、ＴＧＦ−α、エピレグリン、ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン−１、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＭＥＦＦ２、ＬＲＩＧ１等のＥＧＦリガンドが含まれる。更なる炎症マーカーには、ＥＧＦ Ｒ、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４等のＥＧＦ Ｒ／ＥｒｂＢ受容体ファミリーが含まれる。更なる炎症マーカーにはフィブリノゲンが含まれる。更なる炎症マーカーにはＳＡＡが含まれる。更なる炎症マーカーには、α．１−抗トリプシン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、α．２−マクログロブリン、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、Ｍａｃ−１、Ｆ４／８０等のグリアマーカーが含まれる。更なる炎症マーカーにはミエロペルオキシダーゼが含まれる。更なる炎症マーカーには、Ｃ３ｄ、Ｃ１ｑ、Ｃ５、Ｃ４ｄ、Ｃ４ｂｐおよびＣ５ａ−Ｃ９等の補体マーカーが含まれる。更なる炎症マーカーには、ＨＬＡ−ＤＲおよびＨＬＡ−Ａ、Ｄ、Ｃ等の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）糖タンパク質が含まれる。更なる炎症マーカーには、ＣＲ３受容体、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、ＣＤ３１、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＤ、ＣＤ１８、ＣＤ５９、ＣＲ４、ＣＤ４５、ＣＤ６４およびＣＤ４４等のミクログリアマーカーが含まれる。更なる炎症マーカーには、α．２マクログロブリン受容体、線維芽細胞成長因子、Ｆｃ γ ＲＩ、Ｆｃ γ ＲＩＩ、ＣＤ８、ＬＣＡ（ＣＤ４５）、ＣＤ１８、ＣＤ５９、Ａｐｏ Ｊ、クラスタリン、２型プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、ＣＤ４４、マクロファージコロニー刺激因子受容体、ＭＲＰ１４、２７Ｅ１０、４−ヒドロキシノネナール−タンパク質共役（または複合体）、Ｉ．κ．Ｂ、ＮＦ．κ．Ｂ、ｃＰＬＡ．ｓｕｂ．２、ＣＯＸ−２、マトリクス・メタロプロテイナーゼ、膜脂質過酸化およびＡＴＰアーゼ活性、ＨＳＰＣ２２８、ＥＭＰ１、ＣＤＣ４２、ＴＬＥ３、ＳＰＲＹ２、ｐ４０ＢＢＰ、ＨＳＰＣ０６０もしくはＮＡＢ２、またはＨＳＰＡ１Ａ、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＭＡＰＲＥ２およびＯＡＳ１発現のダウンレギュレーション、ＴＡＣＥ／ＡＤＡＭ１７、α−１−酸性糖タンパク質、アンジオポエチン−１、ＭＩＦ、アンジオポエチン−２、ＣＤ１４、β−ディフェンシン２、ＭＭＰ−２、ＥＣＦ−Ｌ／ＣＨＩ３Ｌ３、ＭＭＰ−７、ＥＧＦ、ＭＭＰ−９、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＭＳＰ、ＥＮ−ＲＡＧＥ、酸化窒素、エンドセリン−１、オステオアクチビン ／ＧＰＮＭＢ、ＦＰＲ１、ＰＤＧＦ、ＦＰＲＬ１、ペントラキシン３／ＴＳＧ−１４、ＦＰＲＬ２、Ｇａｓ６、ＰＬＵＮＣ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＧＥ、Ｓ１００Ａ１０、Ｓ１００Ａ８、Ｓ１００Ａ９、ＨＩＦ−１α、Ｐ物質、ＴＦＰＩ、ＴＧＦ−β１、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ＴＩＭＰ−４、ＴＬＲ４、ＬＢＰ、ＴＲＥＭ−１、ロイコトリエンＡ４、加水分解酵素ＴＳＧ−６、リポカリン−１、ｕＰＡ、Ｍ−ＣＳＦ、ならびにＶＥＧＦが含まれる。] [0046] ［４．多岐にわたるマーカー］ 腫瘍マーカーには、ＥＧＦ、ＴＮＦ−α、ＰＳＡ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−β１、ＦＧＦｂ、ＴＲＡＩＬおよびＴＮＦ−ＲＩ（ｐ５５）が含まれる。] [0047] 内分泌機能マーカーには、１７β−エストラジオール（Ｅ２）、ＤＨＥＡ、ＡＣＴＨ、ガストリンおよび成長ホルモン（ｈＧＨ）が含まれる。] [0048] 自己免疫マーカーには、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｃ−反応性タンパク質およびＧ−ＣＳＦが含まれる。] [0049] 甲状腺機能マーカーには、環状ＡＭＰ、カルシトニンおよび副甲状腺ホルモンが含まれる。] [0050] 心血管マーカーには、心筋トロポニンＩ、心筋トロポニンＴ、Ｂ−ナトリウム利尿ペプチド、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、Ｃ−反応性タンパク質ＨＳおよびβ−トロンボグロブリンが含まれる。] [0051] 糖尿病マーカーには、Ｃ−ペプチドおよびレプチンが含まれる。] [0052] 感染症マーカーには、ＩＦＮ−γおよびＩＦＮ−αが含まれる。] [0053] 代謝マーカーには、Ｂｉｏ−ｉｎｔａｃｔＰＴＨ（１−８４）およびＰＴＨが含まれる。] [0054] ［５．生物学的状態のマーカー］ マーカーは、件の特定の表現型の状態の存在を示し得る。表現型の状態の例として以下のものが挙げられる。環境の変化に起因する表現型、薬物治療、遺伝子操作もしくは遺伝子変異、傷害、食物の変化、加齢、または１つの生物または生物の網もしくは亜網の他の何らかの（１つまたは複数の）特性。] [0055] いくつかの態様において、件の表現型の状態は、臨床的に診断された疾患の状態である。そのような疾患の状態には、例えば、癌、循環器疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、感染症、妊娠に関連する障害が含まれる。別法として、健康状態がマーカーを用いて検出可能である。] [0056] 癌表現型は、本発明のいくつかの要旨に含まれる。癌の例として以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：乳癌、皮膚癌、骨肉腫、前立腺癌、肝臓癌、肺癌、脳腫瘍、喉頭癌、胆嚢癌、膵臓癌、直腸癌、副甲状腺癌、甲状腺癌、副腎癌、神経組織癌、頭部および頸部癌、結腸癌、胃癌、気管支癌、腎臓癌、基底細胞癌、潰瘍性および乳頭型の扁平上皮癌、転移性皮膚癌、骨肉腫、ユーイング肉腫、細網肉腫（ｖｅｔｉｃｕｌｕｍ ｃｅｌｌ ｓａｒｃｏｍａ）、骨髄腫、巨細胞腫、小細胞肺腫瘍、非小細胞肺癌結石、島細胞腫、原発性脳腫瘍、急性および慢性のリンパ球性および顆粒球性腫瘍、有毛細胞腫瘍、腺腫、過形成、髄様癌、褐色細胞腫、粘膜神経腫、腸神経節細胞腫、過形成角膜神経腫、マルファン症候群様体質腫瘍、ウィルムス腫瘍、精上皮腫、卵巣腫瘍、平滑筋腫瘍、子宮頸部形成異常および上皮内癌、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、軟部組織肉腫、悪性カルチノイド、局所性皮膚病変、菌状息肉腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、骨肉腫および他の肉腫、悪性高カルシウム血症、腎細胞腫、真性多血症、腺癌、多形神経膠芽腫、白血病、リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ならびに他の癌腫および肉腫。] [0057] 本発明は癌を検出する方法を提供する。いくつかの態様において、がんには急性リンパ性白血病が含まれる。他の態様において、癌には急性骨髄性白血病が含まれる。他の態様において、癌には副腎皮質癌が含まれる。他の態様において、癌にはＡＩＤＳに関連する癌が含まれる。他の態様において、癌にはＡＩＤＳに関連するリンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には肛門癌が含まれる。他の態様において、癌には虫垂癌が含まれる。他の態様において、癌には小児小脳星細胞腫が含まれる。他の態様において、癌には小児大脳星細胞腫が含まれる。他の態様において、癌には中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には、基底細胞癌または他の皮膚癌（非黒色腫）が含まれる。他の態様において、癌には肝外胆管癌が含まれる。他の態様において、癌には膀胱癌が含まれる。他の態様において、癌には、骨肉腫または悪性線維性組織球腫等の骨癌が含まれる。他の態様において、癌には脳幹部神経膠腫が含まれる。他の態様において、癌には成人脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には、中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍を含む脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫を含む脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には頭蓋咽頭腫脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には上衣芽細胞腫脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には上衣腫脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には髄芽腫脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には髄様上皮腫脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には、中間分化型松果体実質腫瘍を含む脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には、テント上原始神経外胚葉性腫瘍および松果体芽腫を含む脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には、視経路および視床下部膠腫を含む脳腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には脳および脊髄腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には乳癌が含まれる。他の態様において、癌には気管支腫瘍が含まれる。他の態様において、癌にはバーキットリンパ腫が含まれる。他の態様において、癌にはカルチノイド腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には消化管カルチノイド腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には原発不明癌が含まれる。他の態様において、癌には中枢神経系非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には中枢神経系胚芽腫が含まれる。他の態様において、癌には中枢神経系原発リンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には小脳星細胞腫が含まれる。他の態様において、癌には大脳星細胞腫／悪性神経膠腫が含まれる。他の態様において、癌には子宮頸癌が含まれる。他の態様において、癌には小児癌が含まれる。他の態様において、癌には脊索腫が含まれる。他の態様において、癌には慢性リンパ性白血病が含まれる。他の態様において、癌には慢性骨髄性白血病が含まれる。他の態様において、癌には慢性骨髄増殖性疾患が含まれる。他の態様において、癌には結腸癌が含まれる。他の態様において、癌には結腸直腸癌が含まれる。他の態様において、癌には頭蓋咽頭腫が含まれる。他の態様において、癌には、菌状息肉腫およびセザリー症候群を含む皮膚Ｔ細胞リンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には中枢神経系胚芽腫が含まれる。他の態様において、癌には子宮内膜癌が含まれる。他の態様において、癌には上衣芽細胞腫が含まれる。他の態様において、癌には上衣腫が含まれる。他の態様において、癌には食道癌が含まれる。他の態様において、癌にはユーイング腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には頭蓋外胚細胞腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には性腺外胚細胞腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には肝外胆管癌が含まれる。他の態様において、癌には眼内黒色腫眼癌が含まれる。他の態様において、癌には網膜芽細胞腫眼癌が含まれる。他の態様において、癌には胆嚢癌が含まれる。他の態様において、癌には胃癌（Ｇａｓｔｒｉｃ（Ｓｔｏｍａｃｈ）Ｃａｎｃｅｒ）が含まれる。他の態様において、癌には消化管カルチノイド腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）が含まれる。他の態様において、癌には消化管間質細胞腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には頭蓋外胚細胞腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には性腺外胚細胞腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には卵巣胚細胞腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には妊娠性絨毛腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には神経膠腫が含まれる。他の態様において、癌には脳幹部神経膠腫が含まれる。他の態様において、癌には大脳星細胞腫神経膠腫が含まれる。他の態様において、癌には視経路または視床下部膠腫が含まれる。他の態様において、癌には有毛細胞白血病が含まれる。他の態様において、癌には頭部および頸部癌が含まれる。他の態様において、癌には肝細胞（肝臓）癌が含まれる。他の態様において、癌にはホジキンリンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には下咽頭癌が含まれる。他の態様において、癌には眼内黒色腫が含まれる。他の態様において、癌には島細胞腫（内分泌膵臓（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｐａｎｃｒｅａｓ））が含まれる。他の態様において、癌にはカポジ肉腫が含まれる。他の態様において、癌には腎臓（腎細胞）癌が含まれる。他の態様において、癌には喉頭癌が含まれる。他の態様において、癌には急性リンパ性白血病が含まれる。他の態様において、癌には急性骨髄性白血病が含まれる。他の態様において、癌には慢性リンパ性白血病が含まれる。他の態様において、癌には慢性骨髄性白血病が含まれる。他の態様において、癌には有毛細胞白血病が含まれる。他の態様において、癌には口唇癌が含まれる。他の態様において、癌には口腔癌が含まれる。他の態様において、癌には原発性肝癌が含まれる。他の態様において、癌には非小細胞肺癌が含まれる。他の態様において、癌には小細胞肺癌が含まれる。他の態様において、癌にはＡＩＤＳ関連リンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には菌状息肉腫が含まれる。他の態様において、癌には皮膚Ｔ細胞リンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には菌状息肉腫およびセザリー症候群が含まれる。他の態様において、癌にはホジキンリンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には非ホジキンリンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には中枢神経系原発リンパ腫が含まれる。他の態様において、癌にはワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症が含まれる。他の態様において、癌には、骨の悪性線維性組織球腫または骨肉腫が含まれる。他の態様において、癌には髄様上皮腫が含まれる。他の態様において、癌には黒色腫が含まれる。他の態様において、癌には眼内（眼球）黒色腫が含まれる。他の態様において、癌にはメルケル細胞癌が含まれる。他の態様において、癌には中皮腫が含まれる。他の態様において、癌には原発不明の転移性頸部扁平上皮癌が含まれる。他の態様において、癌には口腔（ｍｏｕｔｈ）癌が含まれる。他の態様において、癌には多発性内分泌腫瘍症候群が含まれる。他の態様において、癌には多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には菌状息肉腫が含まれる。他の態様において、癌には骨髄異形成症候群が含まれる。他の態様において、癌には骨髄異形成または骨髄増殖性疾患が含まれる。他の態様において、癌には慢性骨髄性白血病が含まれる。他の態様において、癌には急性骨髄性白血病が含まれる。他の態様において、癌には多発性骨髄腫が含まれる。他の態様において、癌には慢性骨髄増殖性疾患が含まれる。他の態様において、癌には鼻腔または副鼻腔癌が含まれる。他の態様において、癌には上咽頭癌が含まれる。他の態様において、癌には上咽頭癌が含まれる。他の態様において、癌には神経芽細胞腫が含まれる。他の態様において、癌には非ホジキンリンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には非小細胞肺癌が含まれる。他の態様において、癌には口腔（ｏｒａｌ）癌が含まれる。他の態様において、癌には口腔（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ）癌が含まれる。他の態様において、癌には口腔咽頭癌が含まれる。他の態様において、癌には骨肉腫が含まれる。他の態様において、癌には骨の悪性線維性組織球腫が含まれる。他の態様において、癌には卵巣癌が含まれる。他の態様において、癌には上皮性卵巣癌が含まれる。他の態様において、癌には卵巣胚細胞腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には卵巣低悪性度腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には膵臓癌が含まれる。他の態様において、癌には島細胞腫膵臓癌が含まれる。他の態様において、癌には乳頭腫症が含まれる。他の態様において、癌には副鼻腔癌が含まれる。他の態様において、癌には鼻腔癌が含まれる。他の態様において、癌には副甲状腺癌が含まれる。他の態様において、癌には陰茎癌が含まれる。他の態様において、癌には咽頭癌が含まれる。他の態様において、癌には褐色細胞腫が含まれる。他の態様において、癌には中間分化型松果体実質腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には松果体芽腫またはテント上原始神経外胚葉性腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には下垂体部腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫が含まれる。他の態様において、癌には胸膜肺芽腫が含まれる。他の態様において、癌には中枢神経系原発リンパ腫が含まれる。他の態様において、癌には前立腺癌が含まれる。他の態様において、癌には直腸癌が含まれる。他の態様において、癌には腎細胞（腎臓）癌が含まれる。他の態様において、癌には腎盂および尿管の移行上皮癌が含まれる。他の態様において、癌には、１５番染色体におけるＮＵＴ遺伝子に関連する呼吸器癌が含まれる。他の態様において、癌には網膜芽細胞腫が含まれる。他の態様において、癌には筋肉腫が含まれる。他の態様において、癌には唾液腺癌が含まれる。他の態様において、癌にはユーイング肉腫ファミリーの腫瘍が含まれる。他の態様において、癌にはカポジ肉腫が含まれる。他の態様において、癌には軟部組織肉腫が含まれる。他の態様において、癌には子宮肉腫が含まれる。他の態様において、癌にはセザリー症候群が含まれる。他の態様において、癌には非黒色腫皮膚癌が含まれる。他の態様において、癌には黒色腫皮膚癌が含まれる。他の態様において、癌にはメルケル細胞皮膚癌が含まれる。他の態様において、癌には小細胞肺癌が含まれる。他の態様において、癌には小腸癌が含まれる。他の態様において、癌には扁平上皮癌、例えば非黒色腫皮膚癌が含まれる。他の態様において、癌には原発不明の転移性頸部扁平上皮癌が含まれる。他の態様において、癌には胃癌（Ｓｔｏｍａｃｈ（Ｇａｓｔｒｉｃ）Ｃａｎｃｅｒ）が含まれる。他の態様において、癌にはテント上原始神経外胚葉性腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には皮膚Ｔ細胞リンパ腫、例えば菌状息肉腫およびセザリー症候群が含まれる。他の態様において、癌には精巣癌が含まれる。他の態様において、癌には咽頭癌が含まれる。他の態様において、癌には胸腺腫または胸腺癌が含まれる。他の態様において、癌には甲状腺癌が含まれる。他の態様において、癌には腎盂および尿管の移行上皮癌が含まれる。他の態様において、癌には妊娠性絨毛腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には原発不明癌が含まれる。他の態様において、癌には小児に特有の癌が含まれる。他の態様において、癌には尿管および腎盂の移行上皮癌が含まれる。他の態様において、癌には尿道癌が含まれる。他の態様において、癌には子宮内膜癌が含まれる。他の態様において、癌には子宮肉腫が含まれる。他の態様において、癌には膣癌が含まれる。他の態様において、癌には視経路および視床下部膠腫が含まれる。他の態様において、癌には外陰癌が含まれる。他の態様において、癌にはワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症が含まれる。他の態様において、癌にはウィルムス腫瘍が含まれる。他の態様において、癌には女性の癌が含まれる。] [0058] 循環器疾患は本発明の他の用途に含まれてよい。循環器疾患の例として以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。鬱血性心不全、高血圧、不整脈、アテローム性動脈硬化、コレステロール、ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群、ＱＴ延長症候群、狭心症、頻脈、徐脈、心房細動、心室細動、鬱血性心不全、心筋虚血、心筋梗塞、心タンポナーデ、心筋炎、心膜炎、催不整脈性右心室異形成、肥大型心筋症、ウイリアムズ症候群、心臓弁膜症、心内膜炎、細菌性の肺動脈閉鎖、大動脈弁狭窄症、レイノー病、コレステロール塞栓症、ワレンベルグ症候群、ヒッペル・リンダウ病および毛細血管拡張症。] [0059] 炎症性疾患および自己免疫疾患は本発明の他の態様に含まれてよい。炎症性疾患および自己免疫疾患の例としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。関節リウマチ、非特異的関節炎、喉頭の炎症性疾患、炎症性腸疾患、乾癬、甲状腺機能低下症（例えば橋本甲状腺機能低下症）、結腸炎（または大腸炎）、１型糖尿病、骨盤内炎症性疾患、中枢神経系の炎症性疾患、側頭動脈炎、リウマチ性多発筋痛、強直性脊椎炎、結節性多発動脈炎、ライター症候群、強皮症、全身性紅斑性狼瘡およびエリテマトーデス。] [0060] 本発明の方法および組成物は、以下のもののマーカーを含む感染症マーカーに関する実験情報も提供し得る。アデノウイルス、百日咳菌、クラミジア肺炎、クラミジア・トラコマチス、コレラ毒素、コレラ毒素β、カンピロバクター・ジェジュニ、サイトメガロウイルス、ジフテリア毒素、エプスタイン・バーＮＡ、エプスタイン・バーＥＡ、エプスタイン・バーＶＣＡ、ヘリコバクター・ピロリ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）コア、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）エンベロープ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）サーフェス（Ａｙ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）コア、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ３、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ４、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５、Ａ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）ｏｒｆ２ ３ＫＤ、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）ｏｒｆ２ ６ＫＤ、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）ｏｒｆ３ ３ＫＤ、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）−１ ｐ２４、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）−１ ｇｐ４１、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）−１ ｇｐ１２０、ヒト・パピローマウイルス（ＨＰＶ）、単純ヘルペスウイルスＨＳＶ−１／２、単純ヘルペスウイルスＨＳＶ−１ ｇＤ、単純ヘルペスウイルスＨＳＶ−２ ｇＧ、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）−１／２、Ａ型インフルエンザ、Ａ（Ｈ３Ｎ２）型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、ドノバン・リーシュマニア、ライム病、おたふく風邪、肺炎マイコプラズマ、結核菌、１型パラインフルエンザ、２型パラインフルエンザ、３型パラインフルエンザ、ポリオウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、風疹、麻疹、ストレプトリジンＯ、破傷風毒素、梅毒トレポネーマ１５ｋｄ、梅毒トレポネーマｐ４７、クルーズトリパノソーマ、トキソプラズマおよび水疱帯状ヘルペス。] [0061] ［ＩＩＩ．ラベル］ いくつかの態様において、本発明は、分子（例えばマーカー）の高感度検出および定量のためのラベルを含む方法および組成物を提供する。] [0062] 粒子混合物中の目標とする分子の検出または識別を可能にするために、その目標とする分子をラベリングすることに関して、多数の戦略が使用可能であることを、当業者は理解するであろう。ラベルは、任意の公知手法によって取り付けてよく、その手法として、ラベルとターゲットとの非特異的または特異的相互作用を利用する方法が挙げられる。ラベルは検出可能な信号を提供してよく、または電場における粒子の移動度に影響を及ぼしてよい。更に、ラベリングは直接的に又は結合パートナーを通じて達成され得る。] [0063] いくつかの態様において、ラベルは件の分子に対する結合パートナーを含み、ラベルにおいて、結合パートナーは蛍光部分に結合されている。本発明の組成物および方法は、高度に蛍光を発する部分、例えば、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると少なくとも約２００個の光子を放出することができる部分を使用してよく、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下である。本発明の組成物および方法に適した部分を、以下により詳細に記載する。] [0064] いくつかの態様において、本発明は、生物学的分子を検出するためのラベルであって、蛍光部分に結合された、生物学的分子に対する結合パートナーを含むラベルを提供し、蛍光部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、少なくとも約２００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、蛍光部分は複数の蛍光成分、例えば、約２〜４、２〜５、２〜６、２〜７、２〜８、２〜９、２〜１０、または約３〜５、３〜６、３〜７、３〜８、３〜９もしくは３〜１０の蛍光成分を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は約２〜４の蛍光成分を含む。いくつかの態様において、生物学的分子はタンパク質または小分子である。いくつかの態様において、生物学的分子はタンパク質である。蛍光成分は蛍光色素分子であり得る。いくつかの態様において、蛍光色素分子は、少なくとも１つの置換インドリウム環系であって、インドリウム環の３位の炭素における置換基が化学反応性基または共役物質を含む置換インドリウム環系を有する。いくつかの態様において、色素分子は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００からなる群から選択されるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ分子である。いくつかの態様において、色素分子は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００からなる群から選択されるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ分子である。いくつかの態様において、色素分子はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７色素分子である。いくつかの態様において、色素分子は、第１の種類および第２の種類の色素分子、例えば２種類の異なるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ分子を含有し、例えば、第１の種類および第２の種類の色素分子は異なる放射スペクトルを有する。第２の種類の色素分子に対する第１の種類の色素分子の数の比は、例えば４対１、３対１、２対１、１対１、１対２、１対３または１対４であり得る。結合パートナーは、例えば抗体であり得る。] [0065] いくつかの態様において、本発明はマーカーを検出するためのラベルを提供し、そのラベルはマーカーに対する結合パートナーおよび蛍光部分を含有し、その蛍光部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、少なくとも約２００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、蛍光部分は蛍光分子を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は、複数の蛍光分子、例えば約２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４、３〜１０、３〜８または３〜６の蛍光分子を含む。いくつかの態様において、ラベルは約２〜４の蛍光分子を含む。いくつかの態様において、蛍光色素分子は、少なくとも１つの置換インドリウム環系であって、インドリウム環の３位の炭素における置換基が化学反応性基または共役物質を含む置換インドリウム環系を有する。いくつかの態様において、蛍光分子は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００からなる群から選択される。いくつかの態様において、蛍光分子は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００からなる群から選択される。いくつかの態様において、蛍光分子はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子である。いくつかの態様において、結合パートナーには抗体が含まれる。いくつかの態様において、抗体はモノクローナル抗体である。他の態様において、抗体ポリクローナル抗体である。] [0066] 抗体は適切なマーカーに対して特異的であってよい。いくつかの態様において、抗体は、サイトカイン、成長因子、腫瘍マーカー、炎症マーカー、内分泌マーカー、自己免疫マーカー、甲状腺マーカー、心血管マーカー、糖尿病マーカー、感染症マーカー、神経学的マーカー、呼吸器マーカー、消化管マーカー、筋骨格マーカー、皮膚疾患および代謝マーカーからなる群から選択されるマーカーに対して特異的である。] [0067] いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるサイトカインに対して特異的である。いくつかの態様において、サイトカインは、以下のものからなる群から選択される。ＢＤＮＦ、ＣＲＥＢ ｐＳ１３３、ＣＲＥＢ Ｔｏｔａｌ、ＤＲ−５、ＥＧＦ、ＥＮＡ−７８、エオタキシン、脂肪酸結合タンパク質、塩基性ＦＧＦ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＧＣＰ−２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子ＧＭ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、成長関連癌遺伝子−ケラチノサイト（ＧＲＯ−ＫＣ）、ＨＧＦ、ＩＣＡＭ−１、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、インターロイキン（ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１２ ｐ４０、ＩＬ−１２ ｐ４０／ｐ７０、ＩＬ−１２ ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１Ｆ３、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９等）、インターフェロン誘導タンパク質（１０ ＩＰ−１０）、ＪＥ／ＭＣＰ−１、ケラチノサイト（ＫＣ）、ＫＣ／ＧＲＯａ、ＬＩＦ、リンホタクチン、Ｍ−ＣＳＦ、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＭＣＰ−１（ＭＣＡＦ）、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−５、ＭＤＣ、ＭＩＧ、炎症性マクロファージ（ＭＩＰ−１α）、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１γ、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−３β、ＯＳＭ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｕｐｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｎｏｒｍａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ（ＲＡＮＴＥＳ）、Ｒｂ（ｐＴ８２１）、Ｒｂ（ｔｏｔａｌ）、Ｒｂ ｐＳｐＴ２４９／２５２、Ｔａｕ（ｐＳ２１４）、Ｔａｕ（ｐＳ３９６）、Ｔａｕ（ｔｏｔａｌ）、組織因子、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、ＴＮＦ−β、ＴＮＦ−ＲＩ、ＴＮＦ−ＲＩＩ、ＶＣＡＭ−１、およびＶＥＧＦ。] [0068] いくつかの態様において、サイトカインは以下のものからなる群から選択される。ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−３、ＩＬ−１２ ｐ４０、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、ＩＬ−４、ＩＬ−１８、ＩＬ−１０、ＩＬ−５、エオタキシン、ＩＬ−１６、ＭＩＧ、ＩＬ−８、ＩＬ−１７、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−１３、ＩＬ−２Ｒ（可溶性）、ＩＬ−２、ＬＩＦ／ＨＩＬＤＡ、ＩＬ−１β、Ｆａｓ／ＣＤ９５／Ａｐｏ−１およびＭＣＰ−１。] [0069] いくつかの態様において、抗体は、マーカーである成長因子に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである成長因子、即ちＴＧＦ−βに対して特異的である。いくつかの態様において、成長因子は、アンフィレグリン、ＬＲＩＧ３、ベータセルリン、ニューレグリン−１／ＮＲＧ１、ＥＧＦ、ニューレグリン−３／ＮＲＧ３、エピゲン、ＴＧＦ−α、エピレグリン、ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン−１、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＭＥＦＦ２、ＬＲＩＧ１等のＧＦリガンド；ＥＧＦ Ｒ、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４等のＥＧＦ Ｒ／ＥｒｂＢ受容体ファミリー；ＦＧＦリガンド、酸性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１２、塩基性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−１７、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−２０、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−２１、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−２２、ＦＧＦ−１０、ＦＧＦ−２３、ＦＧＦ−１１、ＫＧＦ／ＦＧＦ−７、ＦＧＦ受容体であるＦＧＦ Ｒ１−４、ＦＧＦ Ｒ３、ＦＧＦ Ｒ１、ＦＧＦ Ｒ４、ＦＧＦ Ｒ２、ＦＧＦ Ｒ５、ＦＧＦ調節因子であるＦＧＦ−ＢＰ等のＦＧＦファミリー；ヘッジホッグファミリーであるデザートヘッジホッグ、ソニックヘッジホッグ、インディアンヘッジホッグ；ヘッジホッグ関連分子および調節因子であるＢＯＣ、ＧＬＩ−３、ＣＤＯ、ＧＳＫ−３α／β、ＤＩＳＰ１、ＧＳＫ−３α、Ｇａｓ１、ＧＳＫ−３β、ＧＬＩ−１、Ｈｉｐ、ＧＬＩ−２；ＩＧＦファミリーＩＧＦリガンドであるＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ受容体（ＣＤ２２１）ＩＧＦ−Ｉ Ｒ、およびＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）ファミリーＡＬＳ、ＩＧＦＢＰ−５、ＣＴＧＦ／ＣＣＮ２、ＩＧＦＢＰ−６、Ｃｙｒ６１／ＣＣＮ１、ＩＧＦＢＰ−Ｌ１、エンドカン、ＩＧＦＢＰ−ｒｐ１／ＩＧＦＢＰ−７、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−ｒＰ１０、ＩＧＦＢＰ−２、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＩＧＦＢＰ−３、ＷＩＳＰ−１／ＣＣＮ４、ＩＧＦＢＰ−４；受容体型チロシンキナーゼであるＡｘｌ、ＦＧＦ Ｒ４、Ｃ１ｑ Ｒ１／ＣＤ９３、ＦＧＦ Ｒ５、ＤＤＲ１、Ｆｌｔ−３、ＤＤＲ２、ＨＧＦＲ、Ｄｔｋ、ＩＧＦ−Ｉ Ｒ、ＥＧＦ、Ｒ ＩＧＦ−ＩＩ Ｒ、Ｅｐｈ、ＩＮＳＲＲ、ＥｐｈＡ１、インスリンＲ／ＣＤ２２０、ＥｐｈＡ２、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＥｐｈＡ３、Ｍｅｒ、ＥｐｈＡ４、ＭＳＰ Ｒ／Ｒｏｎ、ＥｐｈＡ５、ＭｕＳＫ、ＥｐｈＡ６、ＰＤＧＦ Ｒα、ＥｐｈＡ７、ＰＤＧＦ Ｒβ、ＥｐｈＡ８、Ｒｅｔ、ＥｐｈＢ１、ＲＴＫ様オーファン受容体１／ＲＯＲ１、ＥｐｈＢ２、ＲＴＫ様オーファン受容体２／ＲＯＲ２、ＥｐｈＢ３、ＳＣＦ Ｒ／ｃ−ｋｉｔ、ＥｐｈＢ４、Ｔｉｅ−１、ＥｐｈＢ６、Ｔｉｅ−２、ＥｒｂＢ２、ＴｒｋＡ、ＥｒｂＢ３、ＴｒｋＢ、ＥｒｂＢ４、ＴｒｋＣ、ＦＧＦ、Ｒ１−４ＶＥＧＦ Ｒ、ＦＧＦ Ｒ１、ＶＥＧＦ Ｒ１／Ｆｌｔ−１、ＦＧＦ Ｒ２、ＶＥＧＦ Ｒ２／ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１、ＦＧＦ Ｒ３、ＶＥＧＦ Ｒ３／Ｆｌｔ−４；プロテオグリカンおよび調節因子プロテオグリカンであるアグリカン、ミメカン、アグリン、ＮＧ２／ＭＣＳＰ、バイグリカン、オステオアドヘリン、デコリン、ポドカン、ＤＳＰＧ３、δ−サルコグリカン、エンドカン、シンデカン−１／ＣＤ１３８、エンドグリカン、シンデカン−２、エンドレペリン／パールカン、シンデカン−３、グリピカン２、シンデカン−４、グリピカン３、テスチカン１／ＳＰＯＣＫ１、グリピカン５、テスチカン２／ＳＰＯＣＫ２、グリピカン６、テスチカン３／ＳＰＯＣＫ３、ルミカン、バーシカン、プロテオグリカン調節因子、アリールスルファターゼＡ／ＡＲＳＡ、グルコサミン（Ｎ−アセチル）−６−スルファターゼ／ＧＮＳ、エキソストシン−ライク２／ＥＸＴＬ２、ＨＳ６ＳＴ２、エキソストシン−ライク３／ＥＸＴＬ３、イズロン酸２−スルファターゼ／ＩＤＳ、ＧａｌＮＡｃ４Ｓ−６ＳＴ；ＳＣＦ、Ｆｌｔ−３リガンドおよびＭ−ＣＳＦであるＦｌｔ−３、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、Ｆｌｔ−３リガンド、ＳＣＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＳＣＦ Ｒ／ｃ−ｋｉｔ；ＴＧＦ−βスーパーファミリー（炎症マーカーに関して列挙したものと同じ）；ＶＥＧＦ／ＰＤＧＦファミリーであるニューロピリン−１、ＰｌＧＦ、ニューロピリン−２、ＰｌＧＦ−２、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ Ｒα、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ Ｒβ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＰＤＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＶＥＧＦ Ｒ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ Ｒ１／Ｆｌｔ−１、ＰＤＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ Ｒ２／ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１、ＰＤＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ Ｒ３／Ｆｌｔ−４；Ｗｎｔ関連分子、ディックコップ（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ）タンパク質およびＷｎｔ阻害因子であるＤｋｋ−１、Ｄｋｋ−４、Ｄｋｋ−２、Ｓｏｇｇｙ−１、Ｄｋｋ−３、ＷＩＦ−１ Ｆｒｉｚｚｌｅｄおよび関連タンパク質であるＦｒｉｚｚｌｅｄ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−８、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−２、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−９、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−３、ｓＦＲＰ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４、ｓＦＲＰ−２、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−５、ｓＦＲＰ−３、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−６、ｓＦＲＰ−４、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−７、ＭＦＲＰ ＷｎｔリガンドであるＷｎｔ−１、Ｗｎｔ−８ａ、Ｗｎｔ−２ｂ、Ｗｎｔ−８ｂ、Ｗｎｔ−３ａ、Ｗｎｔ−９ａ、Ｗｎｔ−４、Ｗｎｔ−９ｂ、Ｗｎｔ−５ａ、Ｗｎｔ−１０ａ、Ｗｎｔ−５ｂ、Ｗｎｔ−１０ｂ、Ｗｎｔ−７ａ、Ｗｎｔ−１１、Ｗｎｔ−７ｂ；他のＷｎｔ関連分子であるＡＰＣ、クレメン−２、アキシン−１、ＬＲＰ−１、β−カテニン、ＬＲＰ−６、ディシブルド−１、ノリン、ディシブルド−３、ＰＫＣβ１、グリピカン３、ピゴパス−１、グリピカン５、ピゴパス−２、ＧＳＫ−３α／β、Ｒ−スポンジン１、ＧＳＫ−３α、Ｒ−スポンジン２、ＧＳＫ−３β、Ｒ−スポンジン３、ＩＣＡＴ、ＲＴＫ様オーファン受容体１／ＲＯＲ１、クレメン−１、ＲＴＫ様オーファン受容体２／ＲＯＲ、および他の成長因子であるＣＴＧＦ／ＣＣＮ２、β−ＮＧＦ、Ｃｙｒ６１／ＣＣＮ１、ノリン、ＤＡＮＣＥ、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＥＧ−ＶＥＧＦ／ＰＫ１、オステオクリン、ヘパソシン、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＨＧＦ、プログラヌリン、ＬＥＣＴ２、トロンボポエチン、ＬＥＤＧＦ、またはＷＩＳＰ−１／ＣＣＮ４である。] [0070] いくつかの態様において、抗体はマーカーである癌マーカー（腫瘍マーカー）に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体はマーカーである癌マーカー、即ちＥＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである癌マーカー、即ちＴＮＦ−αに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである癌マーカー、即ちＰＳＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである癌マーカー、即ちＶＥＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである癌マーカー、即ちＴＧＦ−βに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである癌マーカー、即ちＦＧＦｂに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである癌マーカー、即ちＴＲＡＩＬに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである癌マーカー、即ちＴＮＦ−ＲＩ（ｐ５５）に対して特異的である。] [0071] 別の態様において、抗体は、癌マーカーであるα−フェトプロテインに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＥＲβ／ＮＲ３Ａ２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＥｒｂＢ２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるカリクレイン３／ＰＳＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＥＲ α／ＮＲ３Ａ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるプロゲステロンＲ／ＮＲ３Ｃ３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＡ３３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＭＩＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるオーロラＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＭＭＰ−２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＢｃｌ−２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＭＭＰ−３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるカドヘリン−１３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＭＭＰ−９に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＥ−カドヘリンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＮＥＫ２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーである炭酸脱水酵素ＩＸに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるネスチンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるβ−カテニンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＮＧ２／ＭＣＳＰに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるカテプシンＤに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるオステオポンチンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＣＤ４４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるｐ２１／ＣＩＰ１／ＣＤＫＮ１Ａに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＣＥＡＣＡＭ−６に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるｐ２７／Ｋｉｐ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるコルヌリン（Ｃｏｒｎｕｌｉｎ）に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるｐ５３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＤＰＰＡ４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるプロラクチンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＥＣＭ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＰＳＰ９４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＥＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＳ１００Ｂに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＥＧＦ Ｒに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＳ１００Ｐに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＳＣＦ Ｒ／ｃ−ｋｉｔに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーである線維芽細胞活性化タンパク質α／ＦＡＰに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるセルピンＥ１／ＰＡＩ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーである酸性ＦＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーである血清アミロイドＡ４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーである塩基性ＦＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるスルビビン（Ｓｕｒｖｉｖｉｎ）に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるガレクチン−３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＴＥＭ８に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるグリピカン３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＴＩＭＰ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＨＩＮ−１／セクレトグロブリン（Ｓｅｃｒｅｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）３Ａ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＴＩＭＰ−２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＩＧＦ−Ｉに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＴＩＭＰ−３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＩＧＦＢＰ−３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＴＩＭＰ−４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＩＬ−６に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＴＮＦ−α／ＴＮＦＳＦ１Ａに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるカリクレイン６／ニューロシンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＴＲＡＦ−４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＭ−ＣＳＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるｕＰＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるマトリプターゼ／ＳＴ１４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるｕＰＡＲに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるメソテリンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＶＣＡＭ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるメチオニンアミノペプチダーゼに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるＶＥＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、癌マーカーであるメチオニンアミノペプチダーゼ２に対して特異的である。] [0072] いくつかの態様において、抗体は、マーカーである炎症マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである炎症マーカー、即ちＩＣＡＭ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである炎症マーカー、即ちＲＡＮＴＥＳに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである炎症マーカー、即ちＭＩＰ−２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである炎症マーカー、即ちＭＩＰ−１βに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである炎症マーカー、即ちＭＩＰ−１αに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである炎症マーカー、即ちＭＭＰ−３に対して特異的である。] [0073] いくつかの態様において、抗体は、マーカーである内分泌機能マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである内分泌機能マーカー、即ち１７β−エストラジオール（Ｅ２）に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである内分泌機能マーカー、即ちＤＨＥＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである内分泌機能マーカー、即ちＡＣＴＨに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである内分泌機能マーカー、即ちガストリンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである内分泌機能マーカー、即ち成長ホルモンに対して特異的である。] [0074] いくつかの態様において、抗体は、マーカーである自己免疫疾患マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである自己免疫疾患マーカー、即ちＧＭ−ＣＳＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである自己免疫疾患マーカー、即ちＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである自己免疫疾患マーカー、即ちＧ−ＣＳＦに対して特異的である。] [0075] いくつかの態様において、抗体は、甲状腺機能マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、甲状腺機能マーカーである環状ＡＭＰに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、甲状腺機能マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、甲状腺機能マーカーであるカルシトニンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、甲状腺機能マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、甲状腺機能マーカーである副甲状腺ホルモンに対して特異的である。] [0076] いくつかの態様において、抗体は心血管機能マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、心血管機能マーカーであるＢ−ナトリウム利尿ペプチドに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、心血管機能マーカーであるＮＴ−ｐｒｏＢＮＰに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、心血管機能マーカーであるＣ反応性タンパク質、ＨＳに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、心血管機能マーカーであるβ−トロンボグロブリンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、心血管機能マーカーである心筋トロポニンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、心血管機能マーカーである心筋トロポニンＩに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、心血管機能マーカーである心筋トロポニンＴに対して特異的である。] [0077] いくつかの態様において、抗体は糖尿病マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、糖尿病マーカーであるＣ−ペプチドに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、糖尿病マーカーであるレプチンに対して特異的である。] [0078] いくつかの態様において、抗体は感染症マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、感染症マーカーであるＩＦＮγに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、感染症マーカーであるＩＦＮ αに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、感染症マーカーであるＴＲＥＭ−１に対して特異的である。] [0079] いくつかの態様において、抗体は代謝マーカーに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、代謝マーカーであるｂｉｏ−ｉｎｔａｃｔＰＴＨ（１−８４）に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、代謝マーカーであるＰＴＨに対して特異的である。] [0080] いくつかの態様において、抗体はマーカーであるＩＬ−１βに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＴＮＦ−αに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−６に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＴｎＩ（心筋トロポニンＩ）に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−８に対して特異的である。] [0081] いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＡβ４０に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＡβ４２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるｃＡＭＰに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＦＡＳリガンドに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである塩基性ＦＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＧＭ−ＣＳＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＦＮ−αに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＦＮ−γに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−１ａに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−５に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−７に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−１２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−１３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−１７に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＭＣＰ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＭＩＰ−１ａに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＲＡＮＴＥＳに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＶＥＧＦに対して特異的である。] [0082] いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＡＣＥに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるアクチビンＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるアディポネクチンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるアジプシンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＡｇＲＰに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＡＫＴ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるアルブミンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるベータセルリンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるボンベシンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＣＤ１４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＣＤ−２６に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＣＤ−３８に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＣＤ−４０Ｌに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＣＤ−４０ｓに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＣＤＫ５に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである補体Ｃ３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである補体Ｃ４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＣ−ペプチドに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＣＲＰに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＥＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＥ−セレクチンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＦＡＳに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＦＡＳＬＧに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるフェチュインＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるフィブリノゲンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるグレリンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるグルカゴンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである成長ホルモンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるハプトグロブリンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである肝細胞成長因子に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＨＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＣＡＭ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＦＮＧに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＧＦ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−１ＲＡに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩｌ−６ｓｒに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−８に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−１０に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−１８に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬＧＦＢＰ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬＧＦＢＰ３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるインスリン様成長因子１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＬＥＰに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＭ−ＣＳＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＭＭＰ２に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＭＭＰ９に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＮＧＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＰＡＩ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＲＡＧＥに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＲＳＰ４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるレジスチンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーである性ホルモン結合グロブリンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＳＯＣＸ３に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＴＧＦ βに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるトロンボプラスチンに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＴＮＦ Ｒ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＶＣＡＭ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＶＷＦに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＴＳＨに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＥＰＩＴＯＭＥに対して特異的である。] [0083] いくつかの態様において、抗体は、マーカーである心筋トロポニンＩに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＴＲＥＭ−１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−６に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＩＬ−８に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるロイコトリエンＴ４に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＡｋｔ１に対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＴＧＦ−βに対して特異的である。いくつかの態様において、抗体は、マーカーであるＦａｓリガンドに対して特異的である。] [0084] いくつかの態様において、蛍光部分は蛍光分子を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は複数の蛍光分子、例えば約２〜１０、２〜８、２〜６、２〜４、３〜１０、３〜８または３〜６の蛍光分子を含む。いくつかの態様において、ラベルは約２〜４の蛍光分子を含む。いくつかの態様において、蛍光分子には、少なくとも１つの置換インドリウム環系を有する分子であって、インドリウム環の３位の炭素における置換基が化学反応性基または共役物質基（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｇｒｏｕｐ）を含む分子が含まれる。いくつかの態様において、蛍光分子は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００からなる群から選択される。いくつかの態様において、蛍光分子は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００からなる群から選択される。いくつかの態様において、蛍光分子はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子である。] [0085] ［Ａ．結合パートナー］ 検出すべき分子、例えばマーカーの形態に対して必要な特異性（または選択性）を有する任意の適切な結合パートナーを用いてよい。分子、例えばマーカーがいくつかの異なる形態を有する場合、結合パートナーの様々な特異性が可能である。適切な結合パートナーは当該技術分野において公知であり、それには抗体、アプタマー、レクチンおよび受容体が含まれる。有用かつ多用途な結合パートナーの種類は抗体である。] [0086] ［１．抗体］ いくつかの態様において、結合パートナーは、検出すべき分子に対して特異的な抗体である。用語「抗体」は、本明細書において用いられる場合、幅広い意味を有する用語であり、その通常の意味で用いられ、その用語は、天然抗体および非天然抗体を意味することが含まれるがこれらに限定されず、例えば、一本鎖抗体、キメラ抗体、二機能性抗体およびヒト化抗体、ならびにそれらの抗原結合性フラグメントが含まれる。エピトープまたは抗体が取り上げられる分子領域の選択が、例えば分子（存在する場合）または全体（例えば、全て又は実質的に全ての分子）の様々な形態に対するその特異性を決定するであろうことが理解されるであろう。] [0087] 抗体を製造する方法は十分に確立されている。当業者は、例えば『Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ』（Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー）に記載されているように、多数の手法が抗体の製造に利用可能であることを理解するであろう。抗体に類似した結合性フラグメントまたはＦａｂフラグメントもまた、様々な手法によって遺伝情報から製造され得ることも、当業者は理解するであろう（『Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ』Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，Ｃ．編、１９９５、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、オクスフォード；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．第１４９巻、第３９１４〜３９２０頁（１９９２））。分子（例えばタンパク質）およびマーカーに対するモノクローナルおよびポリクローナル抗体もまた、商業的に入手可能である（Ｒ ａｎｄ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス；ＨｙＴｅｓｔ，ＨｙＴｅｓｔ Ｌｔｄ．、フィンランド、トゥルク；Ａｂｃａｍ Ｉｎｃ．、米国マサチューセッツ州ケンブリッジ；Ｌｉｆｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、米国ペンシルベニア州ウェストチェスター；Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、米国マサチューセッツ州０１７４２−３０４９コンコード；ＢｉｏｓＰａｃｉｆｉｃ、カリフォルニア州エメリービル）。] [0088] いくつかの態様において、抗体はポリクローナル抗体である。他の態様において、抗体はモノクローナル抗体である。] [0089] 捕捉結合パートナーと検出結合パートナーのペア、例えば捕捉および検出抗体のペアを、本発明の態様において用いてよい。従って、いくつかの態様において、通常は２つの結合パートナー、例えば２つの抗体を使用する不均一分析プロトコルを用いる。一方の結合パートナーは、通常は固体支持体に固定化された捕捉パートナーであり、他方の結合パートナーは、通常は検出可能なラベルが結合された検出結合パートナーである。そのような抗体ペアは、上述の供給源、例えばＢｉｏｓＰａｃｉｆｉｃ（カリフォルニア州エメリービル）から入手可能である。抗体ペアは、当該技術分野において公知の方法によっても設計および製造可能である。本発明の組成物には抗体ペアが含まれ、抗体ペアの一方の要素は本明細書に記載のラベルであり、他方の要素は捕捉抗体である。] [0090] いくつかの態様において、様々な種と公差反応する抗体を、捕捉抗体、検出抗体、またはその両方として用いることが有用である。そのような態様として、例えば心臓障害のマーカーとしての心筋トロポニンの血液中への放出を測定することによる、薬物毒性の測定が挙げられる。交差反応抗体は、一の種、例えばヒト以外の種において行われるべき毒性の研究を行うこと、およびアッセイの試薬中の同じ抗体または抗体ペアを用いて、従ってアッセイ間の変動を減少させて、結果を、別の種、例えばヒトの研究または臨床的観察に直接受け渡すことを可能にする。従って、いくつかの態様において、マーカー、例えば心筋トロポニン（心筋トロポニンＩ等）に対する結合パートナーとして使用するための抗体の１つまたはそれより多くは、交差反応抗体であってよい。いくつかの態様において、抗体は、ヒト、サル、イヌおよびマウスからなる群から選択される少なくとも２つの種からのマーカー、例えば心筋トロポニンと交差反応する。いくつかの態様において、抗体は、ヒト、サル、イヌおよびマウスからなる群の全てからのマーカー、例えば心筋トロポニンと交差反応する。] [0091] ［Ｂ．蛍光部分］ 本発明において用いられるラベルのいくつかの態様において、結合パートナー、例えば抗体を、蛍光部分に結合させる。蛍光部分の蛍光は、本明細書に記載の単一分子検出器等の単一分子検出器における検出を可能にするのに十分であろう。] [0092] 「蛍光部分」は、本明細書においてその用語を用いる場合、１つ又はそれより多くの蛍光成分であって、その全蛍光は、本明細書に記載の単一分子検出器において蛍光部分を検出し得るようなものである、蛍光成分を含む。従って、蛍光部分は、単一の成分（例えば量子ドットまたは蛍光分子）または複数の成分（例えば複数の蛍光分子）を含んでよい。「（蛍光）部分」が、本明細書においてその用語を用いる際に蛍光成分の群、例えば複数の蛍光色素分子を意味する場合、各個別の成分は、別々に結合パートナーと結合してよく、または成分は、それらの成分が検出されるべき十分な蛍光を１つの群として提供する限りは一緒に結合してよいことが、明らかであろう。] [0093] 通常、蛍光部分の蛍光は、単一分子検出器においてバックグラウンドレベルを超えて蛍光部分を検出し得るのに十分な量子効率および光退色の欠如と、分析の所望の検出限界、確度および精度に対して必要な整合性との組み合わせを伴う。例えば、いくつかの態様において、蛍光部分の蛍光は、本明細書に記載の機器において、約１０、５、４、３、２、１、０．１、０．０１、０．００１、０．００００１または０．０００００１ｐｇ／ｍｌより小さい検出限界、および約２０、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１％より小さい又はそれ未満の、例えば約１０％またはそれ未満の変動係数で、分子、例えばマーカーを検出および／または定量し得るようなものである。いくつかの態様において、蛍光部分の蛍光は、本明細書に記載の機器において、約５、１、０．５、０．１、０．０５、０．０１、０．００５、０．００１ｐｇ／ｍｌより小さい検出限界、および約１０％より小さい変動係数で、分子、例えばマーカーを検出および／または定量し得るようなものである。] [0094] 「検出限界」またはＬｏＤは、これらの用語を本明細書において用いる場合、試料が件の物質の分子を含有すると同定し得る最も低い濃度、例えば最初の非ゼロ値を含む。それは、ゼロ値の変動および検量線の傾きによって規定可能である。例えば、分析の検出限界は、検量線を引くこと、検量線のゼロ値を決定すること、およびその値に２標準偏差を加えることによって決定してよい。この値と等しい信号を生じる件の物質の濃度は、「検出下限」濃度である。] [0095] 更に、蛍光部分は、最適な分析におけるその使用に合致した特性を有する。いくつかの態様において、分析は免疫測定であり、その免疫測定において、蛍光部分は抗体に結合されている；当該部分は、他の抗体もしくはタンパク質と凝集しないような特性、または必要とされる分析確度および精度に合致するよりも多くの凝集を経験しないような特性を有しなければならない。いくつかの態様において、好ましい蛍光部分は、蛍光部分、例えば、１）高い吸収係数；２）高い量子収率；３）高い光安定性（低い光退色性）；および４）件の分子（例えばタンパク質）のラベリングとの適合性の組み合わせを有し、その結果、本発明の分析器およびシステムを用いて分析し得る（例えば、件のタンパク質の沈殿、または当該部分が結合しているタンパク質の沈殿を引き起こさない）色素分子である。] [0096] 本発明のいくつかの態様において有用な蛍光部分、例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子を、ＥＭ放射によって刺激される際のそれらの光子放出特性によって規定してよい。例えば、いくつかの態様において、本発明は蛍光部分、例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子を含む部分を使用し、蛍光部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。レーザーの出力と色素部分の曝露時間の長さとの多数の異なる組み合わせによって全エネルギーを達成してよいことが、理解されるであろう。例えば、出力１ｍＷのレーザーは３ｍｓの間使用してよく、出力３ｍＷのレーザーは１ｍｓの間使用してよく、出力６ｍＷのレーザーは０．５ｍｓの間使用してよく、出力１２ｍＷのレーザーは０．２５ｍｓの間使用してよいといったことである。] [0097] いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分、例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子を使用し、その蛍光色素部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約５０個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分、例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子を使用し、その蛍光色素部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約１００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分、例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子を使用し、その蛍光色素部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約１５０個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分、例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子を使用し、その蛍光色素部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約２００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分、例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子を使用し、その蛍光色素部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約３００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分、例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子を使用し、その蛍光色素部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約５００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。] [0098] いくつかの態様において、蛍光部分は平均で少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の蛍光成分、例えば蛍光分子を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は、平均で約２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１以下の蛍光成分、例えば蛍光分子を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は、平均で約１〜１１、または約２〜１０、または約２〜８、または約２〜６、または約２〜５、または約２〜４、または約３〜１０、または約３〜８、または約３〜６、または約３〜５、または約４〜１０、または約４〜８、または約４〜６、または約２、３、４、５、６、または約６より多くの蛍光成分を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は、平均で約２〜８の結合された蛍光部分を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は平均で約２〜６の蛍光成分を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は平均で約２〜４の蛍光成分を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は平均で約３〜１０の蛍光成分を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は平均で約３〜８の蛍光成分を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は平均で約３〜６の蛍光成分を含む。「平均」は、本発明のラベル群を代表する所定の試料であって、試料が複数の結合パートナー−蛍光部分ユニットを含有する試料において、標準的な分析方法によって測定すると、結合パートナーに対する特定の蛍光成分のモル比が、規定された数または数の範囲に一致することを意味する。例えば、ラベルが、抗体である結合パートナーと、固有の吸光度を有する複数の蛍光色素分子を含む蛍光部分とを含む態様において、ラベル溶液を適切なレベルに希釈し、タンパク質（抗体）のモル濃度を決定するために２８０ｎｍにおける吸光度を取得し、蛍光色素分子のモル濃度を決定するために、例えば（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７に対する）６５０ｎｍにおける吸光度を取得する分光光度分析が使用可能である。前者に対する後者のモル濃度の比は、各抗体に結合された蛍光部分における蛍光成分（色素分子）の平均数を表している。] [0099] ［１．色素］ いくつかの態様において、本発明は蛍光色素分子を含む蛍光部分を使用する。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素分子であって、その分子の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約５０個の光子を放出することができる蛍光色素分子を使用し、レーザーは、その分子を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素分子であって、その分子の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約７５個の光子を放出することができる蛍光色素分子を使用し、レーザーは、その分子を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素分子であって、その分子の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約１００個の光子を放出することができる蛍光色素分子を使用し、レーザーは、その分子を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素分子であって、その分子の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約１５０個の光子を放出することができる蛍光色素分子を使用し、レーザーは、その分子を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素分子であって、その分子の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約２００個の光子を放出することができる蛍光色素分子を使用し、レーザーは、その分子を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。] [0100] いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分（例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子）であって、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約５０個の光子を放出することができる蛍光色素部分を使用し、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分（例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子）であって、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約１００個の光子を放出することができる蛍光色素部分を使用し、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分（例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子）であって、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約１５０個の光子を放出することができる蛍光色素部分を使用し、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分（例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子）であって、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約２００個の光子を放出することができる蛍光色素部分を使用し、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分（例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子）であって、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約３００個の光子を放出することができる蛍光色素部分を使用し、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、本発明は、蛍光色素部分（例えば単一の蛍光色素分子または複数の蛍光色素分子）であって、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約５００個の光子を放出することができる蛍光色素部分を使用し、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。] [0101] 本発明の蛍光部分において用いる有用な蛍光成分の包括的でない一覧表を下記の表２に示す。いくつかの態様において、蛍光色素は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０、フルオレセイン、Ｂ−フィコエリトリン、アロフィコシアニン、ＰＢＸＬ−３およびＱｄｏｔ ６０５からなる群から選択される。いくつかの態様において、蛍光色素は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０、フルオレセイン、Ｂ−フィコエリトリン、アロフィコシアニン、ＰＢＸＬ−３およびＱｄｏｔ ６０５からなる群から選択される。] [0102] ] [0103] ] [0104] ] [0105] 本発明において用いるのに適した色素には修飾カルボシアニン色素が含まれる。そのような修飾において、カルボシアニン色素のインドリウム環の修飾が含まれ、それによって３位の位置における反応性基または共役物質が可能となる。インドリウム環の修飾は、タンパク質、核酸および他の生体高分子において、１位の位置における窒素原子を通じて結合される、構造的に類似したカルボシアニン色素でラベリングされた共役よりも、均一に、かなり多くの蛍光を発する色素共役（または複合体）を提供する。実質的に同一の波長において構造的に類似した色素より強度の大きい蛍光放射を有すること、および生体高分子と共役した際にそれらの吸収スペクトルにおいてアーチファクトが減少することに加えて、修飾カルボシアニン色素は、構造的に類似した色素よりも、優れた光安定性、およびピーク吸光度の波長における高い吸光度（減衰係数）を有する。従って、修飾カルボシアニン色素は、修飾色素およびそれらの共役を用いた分析において、より優れた感度をもたらす。好ましい修飾色素として、少なくとも１つの置換インドリウム環系を有する化合物であって、インドリウム環の３位の炭素における置換基が化学反応性基または共役物質を含む化合物が挙げられる。他の色素化合物として、アザベンズアゾリウム環部分および少なくとも１つのスルホネート部分を包含する化合物が挙げられる。本発明の種々の態様において個々の分子を検出するのに用いられ得る修飾カルボシアニン色素は、米国特許第６，９７７，３０５号に記載されており、これは、その全体を引用することによって本明細書に組み込まれる。従って、いくつかの態様において、本発明のラベルは、置換インドリウム環系を有する蛍光色素であって、インドリウム環の３位の炭素における置換基が化学反応性基または共役物質基を含む蛍光色素を利用する。] [0106] いくつかの態様において、ラベルは、１つ又はそれより多くのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、オレゴン州ユージーン）を含む蛍光部分を有する。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素は、米国特許第６，９７７，３０５号；第６，９７４，８７４号；第６，１３０，１０１号；および第６，９７４，３０５号に開示されており、これらは、その全体を引用することによって本明細書に組み込まれる。本発明のいくつかの態様は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６１０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０からなる群から選択される色素を使用する。本発明のいくつかの態様は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０からなる群から選択される色素を使用する。本発明のいくつかの態様は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６１０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０からなる群から選択される色素を使用する。本発明のいくつかの態様は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を使用し、これは、約６５０〜６６０ｎｍの間に吸収極大を有し、約６６０〜６７０ｎｍの間に放射極大を有する。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７色素は単独で使用し、または他のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素と組み合わせて使用する。] [0107] 現在入手可能な有機蛍光色素は、ポリエチレン等の親水性基を加えることによりそれらの疎水性を減じることによって、改良可能である。別法として、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７色素等の現時点でスルホン化されている有機ｆｌｕｏｒは、それらを両性イオンにすることによって酸性を減じることが可能である。修飾ｆｌｕｏｒでラベリングされた抗体等の粒子は、免疫測定において表面およびタンパク質に非特異的に結合する可能性が低く、従って、より高い感度およびより低いバックグラウンドを有する分析を可能にする。単一分子を検出するシステムの感度を高めるために、蛍光色素の特性を変更（または修飾）および改良する方法は、当該技術分野において公知である。好ましくは、修飾は、高い量子収率を保持しながらストークスシフトを改良する。] [0108] ［２．量子ドット］ いくつかの態様において、本発明の分析器システムを用いて試料中の分子を検出のに用いられる蛍光ラベル部分は量子ドットである。量子ドット（ＱＤ）は、半導体ナノ結晶または人工原子としても知られており、いずれの場所においても１００〜１０００の電子および２〜１０ｎｍの範囲を有する半導体結晶である。ＱＤの中には、直径が１０〜２０ｎｍであり得るものもある。ＱＤは高い量子収率を有し、それにより、それらのＱＤは光学的用途に対して特に有用である。ＱＤは、励起子の形成によって蛍光を発するフルオロフォアであり、これは、従来のフルオロフォアの励起状態に類似しているが、最大で２００ナノ秒のより長い寿命を有する。この特性は、ＱＤに低い光退色性を与える。ＱＤのエネルギーレベルは、ＱＤの寸法および形状、ならびにＱＤのポテンシャルの深さを変化させることによって制御可能である。小さい励起子ＱＤの光学的特徴の１つは着色であり、これは、ドット寸法によって決定される。ドットが大きいほど、蛍光はより赤くなり、またはより一層スペクトルの赤色端に向かう。ドットが小さいほど、スペクトルはより青くなり、またはより一層青色端に向かう。エネルギー、従って蛍光の色を規定するバンドギャップエネルギーは、ＱＤ寸法の２乗に反比例する。ＱＤが大きいほど、より狭い間隔の、より高いエネルギーレベルを有し、従って、ＱＤが、より小さいエネルギーを有する光子、即ちスペクトルの赤色端により近い光子を吸収することが可能となる。ドットの放射振動数がバンドギャップに依存するので、ドットの出力波長を非常に高精度に制御することが可能である。いくつかの態様において、単一分子分析器システムで検出されるタンパク質は、ＱＤでラベリングされる。いくつかの態様において、単一分子分析器は、１つのＱＤでラベリングされたタンパク質を検出するのに用いられ、フィルターを用いることにより、異なる波長で異なるタンパク質を検出することが可能となる。] [0109] ＱＤは、広い励起特性および狭い放射特性を有し、ＱＤは、カラーフィルタリングと共に用いられる場合、唯一つの電磁波源が、１つの試料における多数のターゲットの多重分析の間に、ここの信号を解像することを必要とする。従って、いくつかの態様において、分析器システムは、１つの連続波レーザー、および各々がＱＤでラベリングされた粒子を含む。コロイド状に調製されたＱＤは浮遊しており、金属配位官能基を介して種々の分子に結合し得る。これらの群には、チオール、アミン、ニトリル、ホスフィン、ホスフィンオキシド、ホスホン酸、カルボン酸または他のリガンドが含まれるが、これらに限定されない。適切な分子を表面に結合させることによって、量子ドットはほとんど全ての溶媒中に分散もしくは溶解し得、または様々な無機および有機フィルムの中に組み込まれ得る。量子ドット（ＱＤ）は、マレイミドエステルカップリング反応によってストレプトアビジンと直接カップリングし得、またはマレイミド−チオールカップリング反応によって抗体とカップリングし得る。これにより、表面に共有結合した生体分子を有する材料がもたらされ、比活性度の高い共役を形成する。いくつかの態様において、単一分子分析器で検出されるタンパク質は、１つの量子ドットでラベリングされる。いくつかの態様において、量子ドットは直径が１０〜２０ｎｍである。他の態様において、量子ドットは直径が２〜１０ｎｍである。他の態様において、量子ドットは直径が約２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、６ｎｍ、７ｎｍ、８ｎｍ、９ｎｍ、１０ｎｍ、１１ｎｍ、１２ｎｍ、１３ｎｍ、１４ｎｍ、１５ｎｍ、１６ｎｍ、１７ｎｍ、１８ｎｍ、１９ｎｍまたは２０ｎｍである。有用な量子ドットには、ＱＤ６０５、ＱＤ６１０、ＱＤ６５５およびＱＤ７０５が含まれる。好ましい量子ドットはＱＤ６０５である。] [0110] ［Ｃ．結合パートナー−蛍光部分組成物］ 一般に、本発明のラベルは、蛍光部分に結合された結合パートナー、例えば抗体を含有し、それによって、本明細書に記載の機器における検出および定量に必要な蛍光を提供する。本明細書に記載の単一分子検出器における検出に適した、結合パートナーと蛍光部分とのいずれの組み合わせも、本発明におけるラベルとして用いてよい。いくつかの態様において、本発明は、生物学的状態のマーカーに対するラベルを提供し、ラベルは、マーカーに対する抗体および蛍光部分を有する。マーカーは、上述のマーカーのいずれであってもよい。抗体は、上述のいずれの抗体であってもよい。蛍光部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、ラベルが平均で少なくとも約５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００個の光子を放出し得るように結合されてよく、レーザーは、ラベルを含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、蛍光部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、平均で少なくとも約５０、１００、１５０または２００個の光子を放出し得る蛍光部分であってよく、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。蛍光部分は、置換インドリウム環系を含む構造を有する１つ又はそれより多くの色素分子であって、インドリウム環の３位の炭素における置換基が化学反応性基または共役物質基を含む色素分子を有する蛍光部分であってよい。ラベル組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０からなる群から選択される１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。ラベル組成物には、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０からなる群から選択される１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。ラベル組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８である１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。ラベル組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５である１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。ラベル組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６１０である１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。ラベル組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。ラベル組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０である１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。ラベル組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００である１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。ラベル組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０である１つまたはそれより多くの色素分子を有する蛍光部分を含んでよい。] [0111] いくつかの態様において、本発明は、生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ分子、例えば、マーカーに対して特異的な抗体に結合されるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子等の記載された群から選択されるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ分子を含有する。いくつかの態様において、組成物は、平均で約１〜１１、または約２〜１０、または約２〜８、または約２〜６、または約２〜５、または約２〜４、または約３〜１０、または約３〜８、または約３〜６、または約３〜５、または約４〜１０、または約４〜８、または約４〜６、または約２、３、４、５、６、または約６より多くの、マーカーに対する抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。いくつかの態様において、本発明は、生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、平均で約１〜１１、または約２〜１０、または約２〜８、または約２〜６、または約２〜５、または約２〜４、または約３〜１０、または約３〜８、または約３〜６、または約３〜５、または約４〜１０、または約４〜８、または約４〜６、または約２、３、４、５、６、または約６より多くの、マーカーに対して特異的な抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。いくつかの態様において、本発明は生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、平均で約２〜１０の、マーカーに対して特異的な抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。いくつかの態様において、本発明は生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、平均で約２〜８の、マーカーに対して特異的な抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。いくつかの態様において、本発明は生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、平均で約２〜６の、マーカーに対して特異的な抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。いくつかの態様において、本発明は生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、平均で約２〜４の、マーカーに対して特異的な抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。いくつかの態様において、本発明は生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、平均で約３〜８の、マーカーに対して特異的な抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。いくつかの態様において、本発明は生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、平均で約３〜６の、マーカーに対して特異的な抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。いくつかの態様において、本発明は生物学的状態のマーカーを検出するための組成物を提供し、その組成物は、平均で約４〜８の、マーカーに対して特異的な抗体に結合されたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含有する。] [0112] 蛍光部分または蛍光部分を構成する蛍光成分の、結合パートナー（例えば抗体）との結合は、任意の適切な方法によるものであってよい；そのような方法は当該技術分野においてよく知られており、例示的方法は実施例において示される。いくつかの態様において、蛍光部分を結合パートナーに結合させて、本発明の方法において用いるためのラベルを形成した後に、かつ件のタンパク質をラベリングするのにそのラベルを使用する前に、濾過工程を行うことが有用である。例えば、抗体−色素ラベルを、使用前に、例えば０．２ミクロンのフィルターまたは凝集体を除去するための任意の適切なフィルターを用いて濾過してよい。本発明の分析において使用する他の試薬もまた、例えば０．２ミクロンのフィルターまたは任意の適切なフィルターを用いて濾過してよい。理論に拘束されることなく、そのような濾過によって、例えば抗体−色素ラベルの凝集体の一部が除去されると考えられる。そのような凝集体はユニットとして件のタンパク質に結合し得るが、溶出緩衝液に放出すると分散される（またはバラバラになる）可能性があるので、偽陽性が生じることがある；即ち、唯１つの件のタンパク質分子に結合した凝集体から、複数のラベルが検出されるだろう。理論にかかわらず、濾過によって、その後の分析における偽陽性が減少し、かつ確度および精度が改善されることがわかった。] [0113] 免疫測定はサンドウィッチ形式をしばしば採用し、そのサンドウィッチ形式において、同じ分子（例えばマーカー）に対する結合パートナーのペア（例えば抗体）が用いられることが理解されるであろう。本発明は、結合パートナーのペア（例えば抗体）も包含し、両方の抗体は同じ分子、例えば同じマーカーに対して特異的であり、ペアの少なくとも一方の要素は、本明細書に記載のラベルである。従って、結合パートナーおよび蛍光部分を有する任意のラベルに関して、本発明は、結合パートナーのペアであって、、第１の結合パートナー（例えば抗体）はラベルの一部であり、第２の結合パートナー（例えば抗体）は通常はラベリングされておらず、捕捉結合パートナーとしてはたらく結合パートナーのペアも包含する。更に、結合パートナーのペアは、ＦＲＥＴ分析において頻繁に用いられる。本発明において有用なＦＲＥＴ分析が米国特許出願第１１／０４８，６６０号に記載されており、その全体を引用することによって本明細書に組み込まれ、また、ならびに本発明は、各々がＦＲＥＴラベルを含む結合パートナーのペアも包含する。] [0114] ［ＩＶ．分子の高感度分析］ 一の要旨において、本発明は、試料中の単一分子、例えば生物学的状態のマーカー分子の有無を、ｉ）分子が存在する場合、その分子をラベルでラベリングすること；およびｉｉ）ラベルの有無を検出することによって決定する方法を提供し、ラベルの存在の検出は、試料中に単一分子が存在していることを示す。いくつかの態様において、本方法は、約１００、８０、６０、５０、４０、３０、２０、１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、０．０５、０．０１、０．００５または０．００１フェムトモル濃度より小さい検出限界で分子を検出することができる。いくつかの態様において、本方法は、約１００フェムトモル濃度より小さい検出限界で分子を検出することができる。いくつかの態様において、本方法は、約１０フェムトモル濃度より小さい検出限界で分子を検出することができる。いくつかの態様において、本方法は、約１フェムトモル濃度より小さい検出限界で分子を検出することができる。いくつかの態様において、本方法は、約０．１フェムトモル濃度より小さい検出限界で分子を検出することができる。いくつかの態様において、本方法は、約０．０１フェムトモル濃度より小さい検出限界で分子を検出することができる。いくつかの態様において、本方法は、約０．００１フェムトモル濃度より小さい検出限界で分子を検出することができる。検出限界は、適切な標準物質、例えば米国国立標準技術研究所の参照標準物質を用いることによって規定してよい。] [0115] 本方法は、試料中の分子の単一分子を検出することによって、試料中の分子、例えば生物学的状態を示すマーカーの濃度を決定する方法も提供する。単一分子を「検出すること」には、分子を直接的に又は間接的に検出することが含まれる。間接的検出の場合において、単一分子に対応するラベル、例えば単一分子に結合されるラベルを検出し得る。] [0116] いくつかの態様において、本発明は、生物学的試料中のタンパク質の単一分子の有無を決定する方法を提供し、その方法は、前記分子をラベルでラベリングすること、および単一分子検出器において前記ラベルの有無を検出することを含み、ラベルは、蛍光部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、少なくとも約２００個の光子を放出し得る蛍光部分を含み、レーザーは、当該部分を含む直径約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは、約３マイクロジュール以下である。いくつかの態様において、単一分子検出器は、１つ以下のインタロゲーション・スペースを含んでよい。試料中の単一分子の検出限界は、約１０、１、０．１、０．０１または０．００１フェムトモル濃度より小さくてよい。いくつかの態様において、検出限界は約１フェムトモル濃度より小さい。検出は、前記蛍光部分によって放射される電磁放射線の検出を含んでよい。本方法は、電磁放射線、例えばレーザー（約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０ｍＷの出力を有するレーザー等）によって与えられる電磁放射線に、前記蛍光部分を曝すことを更に含む。いくつかの態様において、レーザーによる刺激は、約１０〜１０００マイクロ秒、または約１０００、２５０、１００、５０、２５または１０マイクロ秒の間、インタロゲーション・スペースに光を供給する。いくつかの態様において、ラベルは、前記分子を結合するのに特異的な結合パートナー、抗体等を更に含む。いくつかの態様において、蛍光色素分子（少なくとも１つの置換インドリウム環系を有する色素分子であって、インドリウム環の３位の炭素における置換基が化学反応性基または共役物質を含む色素分子等）を有する。いくつかの態様において、色素分子は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００からなる群から選択されるＡｌｅｘＦｌｕｏｒ分子である。いくつかの態様において、色素分子はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７色素分子である。いくつかの態様において、蛍光部分は複数のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含む。いくつかの態様において、複数のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子は約２〜４のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子、または約３〜６のＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７分子を含む。いくつかの態様において、蛍光部分は量子ドットである。本方法は、試料中の前記タンパク質の濃度測定を更に含んでよい。] [0117] いくつかの態様において、前記ラベルの有無の検出は以下の工程を含む：（ｉ）インタロゲーション・スペースを通して前記試料の一部を移動させる工程；（ｉｉ）前記インタロゲーション・スペースを電磁放射線に曝露させる工程であって、前記ラベルが存在する場合、前記電磁放射線は、前記蛍光部分を刺激して光子を放出させるのに十分である工程；および（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の前記曝露の間に放出される光子を検出する工程。本方法は、前記インタロゲーション・スペースにおけるバックグラウンド光子レベルを決定する工程を更に含んでよく、前記バックグラウンドレベルは、インタロゲーション・スペースが工程（ｉｉ）と同じ方法で電磁放射線に付されるがインタロゲーション・スペースにラベルが存在しない場合の、インタロゲーション・スペースの平均光子放出を表している。本発明は、工程（ｉｉｉ）において検出される光子の量を閾値光子レベルと比較する工程を更に含み、前記閾値光子レベルは、前記バックグラウンド光子レベルの関数であり、工程（ｉｉｉ）において検出される、閾値レベルの光子量より多い光子量は、前記ラベルの存在を意味し、工程（ｉｉｉ）において検出される、閾値レベルに等しい又はそれより少ない光子の量は、前記ラベルが存在しないことを意味する。] [0118] ［Ａ．試料］ 試料は任意の適切な試料であってよい。通常、試料は生物学的試料、例えば生物学的液体（または流体）である。そのような液体には、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）、血液、血清、血漿、尿、鼻腔スワブ、脳脊髄液、胸膜液、滑液、腹水、羊水、胃液、リンパ液、間質液、組織ホモジネート、細胞抽出物、唾液、痰、便、生理学的分泌物、涙液、粘液、汗、母乳、精液、精漿、膣分泌物、潰瘍ならびに他の表面皮疹、水疱および膿瘍からの液体、ならびに生体の正常組織、悪性組織および疑わしい組織、または目標とする件の粒子を含み得る他の何らかの身体構成要素の生検を含む組織抽出物が含まれるが、これらに限定されない。細胞もしくは組織培養物または培養ブロス等の他の同様の検体も対象となる。] [0119] いくつかの態様において、試料は血液試料である。いくつかの態様において、試料は血漿試料である。いくつかの態様において、試料は血清試料である。いくつかの態様において、試料は尿試料である。いくつかの態様において、試料は鼻腔スワブである。いくつかの態様において、試料は細胞溶解物である。いくつかの態様において、試料は組織試料である。] [0120] ［Ｂ．試料調製］ 一般に、件の分子、例えば測定すべき生物学的状態のマーカーに対応するラベルを製造するいずれの試料調製方法を用いてもよく、この方法において、ラベルは、本明細書に記載の機器において検出可能である。当該技術分野において知られているように、１つ又はそれより多くの分子にラベルを加える試料調製は、均一または不均一形式で行ってよい。いくつかの態様において、試料調製は均一形式で構成される。均一形式を採用する分析器システムにおいて、結合していないラベルは試料から除去されない。例えば米国特許出願第１１／０４８，６６０号を参照のこと。いくつかの態様において、件の１つの粒子または複数の粒子は、件の１つの粒子または複数の粒子に結合する、ラベリングされた１つの抗体または複数の抗体を加えることによってラベリングされる。] [0121] いくつかの態様において、不均一分析形式が用いられ、この形式において、結合していないラベルを除去するための工程が通常採用される。そのような分析形式は、当該技術分野においてよく知られている。一の特に有用な分析形式はサンドウィッチ・アッセイ、例えばサンドウィッチ免疫測定である。この形式において、件の分子、例えば生物学的状態のマーカーが、捕捉結合パートナーを用いて、例えば固体支持体上で捕捉される。その後、不要な分子および他の物質を場合により洗い落としてよく、次いで、検出結合パートナーおよび検出可能なラベル、例えば蛍光部分を有するラベルを結合する。更に洗浄して、結合していないラベルを除去し、その後、検出可能ラベルは通常、検出結合パートナーに必ずしも未だ結合されていないが、検出可能なラベルが放出される。別の態様において、試料およびラベルは、間に洗浄することなく、例えば同時に、捕捉結合パートナーに加えられる。他の変更は当業者に明らかだろう。] [0122] いくつかの態様において、件の分子、例えば生物学的状態のマーカーを検出する方法は、抗体、例えばモノクローナル抗体を捕捉結合パートナーとして用いるサンドウィッチ・アッセイを用いる。この方法は、試料中の分子を、結合表面に固定化された捕捉抗体に結合すること、および検出抗体を含むラベルをその分子に結合して「サンドウィッチ」複合体を形成することを含む。本明細書に記載されているように、ラベルは検出抗体および蛍光部分を含有し、例えば本発明の単一分子分析器を用いて検出される。捕捉抗体および検出抗体の両方が分子に特異的に結合する。サンドウィッチ免疫測定の多数の例が公知であり、いくつかはＧｒｕｂｂらに対する米国特許第４，１６８，１４６号およびＴｏｍらに対する米国特許第４，３６６，２４１号に記載されており、この両方は引用することにより本明細書に組み込まれる。特定のマーカーに特有の更なる例は実施例に記載する。] [0123] 捕捉結合パートナーは、固体支持体、例えばマイクロタイタープレートまたは常磁性ビーズと結合してよい。いくつかの態様において、本発明は、常磁性ビーズに結合された件の分子、例えば生物学的状態のマーカーに対する結合パートナーを提供する。捕捉することが望まれる分子に対して特異的な任意の適切な結合パートナーを用いてよい。結合パートナーは抗体、例えばモノクローナル抗体であってよい。抗体の製造および供給源は本明細書の他の箇所に記載されている。本明細書において捕捉抗体として有用であると同定された抗体は検出抗体としても有用であり得、逆もまた真であることが理解されるであろう。] [0124] 結合パートナー（例えば抗体）の、固体支持体への結合は、共有結合または非共有結合であってよい。いくつかの態様において、結合は非共有結合である。当該技術分野においてよく知られている非共有結合の一例は、ビオチン−アビジン／ストレプトアビジン相互作用である。従って、いくつかの態様において、固体支持体、例えばマイクロタイタープレートまたは常磁性ビーズは、非共有結合、例えばビオチン−アビジン／ストレプトアビジン相互作用によって、捕捉結合パートナー、例えば抗体に結合される。いくつかの態様において、結合は共有結合である。従って、いくつかの態様において、固体支持体、例えばマイクロタイタープレートまたは常磁性ビーズは、共有結合によって捕捉結合パートナー、例えば抗体に結合される。] [0125] 捕捉抗体は、件の分子の捕捉を最適化する方向で共有結合され得る。例えば、いくつかの態様において、結合パートナー、例えば抗体は、固体支持体、例えばマイクロタイタープレートまたは常磁性微粒子に対して配向した形式で結合される。] [0126] 固体支持体に対する抗体の配向性結合のための例示的プロトコルは以下の通りである：ＩｇＧをｐＨ５．５の０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液に溶解させて、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度にする。等体積の氷冷した０．１Ｍ酢酸ナトリウム中の２０ｍＭ過ヨウ素酸ナトリウム（ｐＨ５．５）を加える。ＩｇＧを氷上で１／２時間酸化させる。過剰な過ヨウ素酸試薬を、０．１５体積の１Ｍグリセロールを加えることによって急冷する。酸化反応の低分子量副生成物を、限外濾過によって除去する。酸化されたＩｇＧフラクションを適切な濃度（通常は１ｍｌ当たり０．５マイクログラムのＩｇＧ）に希釈し、室温で少なくとも２時間、ヒドラジドで活性化されたマルチウェルプレートと反応させる。結合していないＩｇＧは、ホウ酸塩緩衝生理食塩水または別の適切な緩衝液でマルチウェルプレートを洗浄することによって除去される。必要に応じて、保管のためにプレートを乾燥させてよい。マイクロビーズの材料がそのような結合に適している場合、マイクロビーズに関して同様のプロトコルに従ってよい。] [0127] いくつかの態様において、固体支持体はマイクロタイタープレートである。いくつかの態様において、固体支持体は常磁性ビーズである。一の例示的常磁性ビーズはストレプトアビジンＣ１（Ｄｙｎａｌ、６５０．０１−０３）である。他の適切なビーズは当業者に明らかであろう。抗体を常磁性ビーズに結合させる方法は、当該技術分野においてよく知られている。一例を実施例２に示す。] [0128] 件の分子は、捕捉結合パートナー、例えば固体支持体に固定化された捕捉抗体に接触する。いくつかの試料調製を用いてよい；例えば血液試料からの血清の調製、または試料が捕捉抗体に接触する前の濃縮工程。免疫測定においてタンパク質を結合するためのプロトコルは当該技術分野においてよく知られており、実施例に含まれる。] [0129] 結合が許容される時間は、条件に応じて変化するだろう；いくつかの状況、特に臨床状況において、より短い結合時間が望ましいことは明らかであろう。例えば常磁性ビーズの使用が、結合に要する時間を減少させ得る。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合が許容される時間は、約１２、１０、８、６、４、３、２もしくは１時間より短く、または約６０、５０、４０、３０、２５、２０、１５、１０もしくは５分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合が許容される時間は、約６０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合が許容される時間は、約４０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合が許容される時間は、約３０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合が許容される時間は、約２０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合が許容される時間は、約１５分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合が許容される時間は、約１０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合が許容される時間は、約５分より短い。] [0130] いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば捕捉抗体に対する件の分子の粒子の結合の後に、非特異的に結合された粒子および試料中の他の望ましくない物質を洗い流して、特異的に結合した件の分子の粒子のみを実質的に残す。他の態様において、試料の追加とラベルの追加との間に洗浄を行わず、、このことは試料調製時間を短縮し得る。従って、いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約１２、１０、８、６、４、３、２もしくは１時間より短く、または約６０、５０、４０、３０、２５、２０、１５、１０もしくは５分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約６０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約５０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約４０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約３０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約２０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約１５分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約１０分より短い。いくつかの態様において、捕捉結合パートナー、例えば抗体に対する件の分子の結合と、件の分子に対するラベルの結合の両方が許容される時間は、約５分より短い。] [0131] 件の分子を測定するのに用いられる捕捉および信号抗体を含むいくつかの免疫測定診断試薬は、動物血清に由来し得る。他の種の免疫グロブリンに結合する能力を有する内因性ヒト異好性抗体またはヒト抗動物抗体は、１０％より多くの患者の血清または血漿中に存在する。これらの血中異好性抗体は、免疫測定法を妨げ得る。サンドウィッチ免疫測定において、これらの異好性抗体は、捕捉抗体と検出（診断）抗体とを架橋し得、それによって偽陽性信号が生じ、あるいは、これらの異好性抗体は、診断抗体の結合を阻害し得、それによって偽陰性信号が生じる。競合免疫測定において、異好性抗体は、分析抗体に結合し得、件の分子に対するその分析抗体の結合を阻害し得る。異好性抗体は、特に抗種（ａｎｔｉｓｐｅｃｉｅｓ）抗体が分離システムにおいて用いられる場合、遊離した件の分子からの抗体−件の分子複合体の分離を阻害し得、または増加させ得る。従って、これらの異好性抗体の妨害の影響は予測困難であり、異好性抗体の結合を阻害することが好都合であり得る。本発明のいくつかの態様において、免疫測定は、１つ又はそれより多くの異好性抗体阻害剤を用いて、試料から異好性抗体を激減させる工程を含む。免疫測定において試験すべき試料から異好性抗体を除去する方法は公知であり、以下の工程を含む：標本を、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）中で９０℃にて１５分間加熱し、１２００ｇで１０分間遠心分離する；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を用いて異好性免疫グロブリンを沈殿させる；タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇを用いて標本から妨害異好性免疫グロブリンを免疫抽出する；または非免疫マウスＩｇＧを加える。本発明の方法の態様は、単一分子検出器による分析の前の試料調製を検討する。前処理方法の妥当性を決定し得る。異好性抗体によって引き起こされる免疫測定の妨害を最小にするための生化学薬品が、市場で入手可能である。例えば、ＭＡＫ３３と呼ばれる製品は、ｈ−ＣＫ−ＭＭに対するＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍから入手可能である。ＭＡＫ３３ ｐｌｕｓ製品は、ＩｇＧ１およびＩｇＧ１−Ｆａｂの組み合わせを含有する。ｐｏｌｙＭＡＫ３３はＩｇＧ１と共に重合されたＩｇＧ１−Ｆａｂを含有し、ｐｏｌｙＭＡＣ ２ｂ／２ａはＩｇＧ２ｂと共に重合されたＩｇＧ２ａ−Ｆａｂを含有する。Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ Ｉｎｃ．（ニューヨーク州イーストメドウ）は、免疫グロブリン阻害試薬として知られている異好性抗体を無効化（または失活）させるための生化学薬品の第２の商業的供給源を商っている。この製品は、多数の種、主にＢａｌｂ／ｃマウスからのマウスＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３からの免疫グロブリン（ＩｇＧおよびＩｇＭ）の製剤である。いくつかの態様において、異好性抗体は、当該技術分野において公知の方法を用いて、例えば妨害抗体をタンパク質Ａまたはタンパク質Ｇに結合させることにより異好性抗体試料を激減させることによって、試料から免疫抽出され得る。いくつかの態様において、異好性抗体は、１つ又はそれより多くの異好性抗体阻害剤を用いて無効化可能である。異好性阻害剤は、抗アイソタイプ異好性抗体阻害剤、抗イディオタイプ異好性抗体阻害剤および抗−抗イディオタイプ異好性抗体阻害剤からなる群から選択され得る。いくつかの態様において、異好性抗体阻害剤の組み合わせが使用可能である。] [0132] ラベルは、試料の添加および洗浄と共に、またはその後に加える。抗体および他の免疫ラベルをタンパク質および他の分子に結合するためのプロトコルは、当該技術分野においてよく知られている。ラベル結合工程が捕捉結合工程から独立している場合、ラベルの結合が許容される時間は、例えば臨床的用途または他の時間に敏感な設定において重要であり得る。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約１２、１０、８、６、４、３、２もしくは１時間より短く、または約６０、５０、４０、３０、２５、２０、１５、１０もしくは５分より短い。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約６０分より短い。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約５０分より短い。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約４０分より短い。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約３０分より短い。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約２０分より短い。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約１５分より短い。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約１０分より短い。いくつかの態様において、ラベル、例えば抗体−色素に対する件の分子の結合が許容される時間は、約５分より短い。過剰なラベルを洗浄によって除去する。] [0133] いくつかの態様において、ラベルは件のタンパク質から溶出されない。他の態様において、ラベルは件のタンパク質から溶出される。好ましい溶出緩衝液は、有意なバックグラウンドを生じることなくラベルを放出するのに有効である。溶出緩衝液が静菌性である場合が有効である。本発明において用いられる溶出緩衝液は、カオトロープ、緩衝液、マイクロタイタープレートの表面を覆うためのアルブミンおよび比較的低いバックグラウンドを生じる様に選択される界面活性剤を含み得る。カオトロープには、尿素、グアニジン化合物、または他の有用なカオトロープが含まれ得る。緩衝液には、ホウ酸塩緩衝生理食塩水または他の有用な緩衝液が含まれ得る。タンパク質キャリアには、例えばアルブミン（ヒト、ウシまたは魚アルブミン等）、ＩｇＧ、または他の有用なキャリアが含まれ得る。界面活性剤には、Ｔｗｅｅｎ ２０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）その他を含むイオン性または非イオン性洗剤が含まれ得る。] [0134] もう１つの態様において、固相結合分析は、競合的結合分析であり得る。そのような方法の１つは以下の通りである。第１に、結合表面において固定化された捕捉抗体が、ｉ）試料中の件の分子、例えば生物学的状態のマーカー、およびｉｉ）検出可能なラベルを含む分子（検出試薬）のラベリングされた類似物によって競合的に結合される。第２に、単一分子分析器を用いてラベルの量を測定する。もう１つのそのような方法は以下の通りである。第１に、検出可能なラベルを有する抗体（検出試薬）を、ｉ）試料中の件の分子、例えば生物学的状態のマーカー、およびｉｉ）結合表面に固定化された分子（捕捉試薬）の類似物に完全に結合させる。第２に、単一分子分析器を用いてラベルの量を測定する。本明細書において、「分子の類似物」は、捕捉抗体に結合させるための分子と競合する種を意味する。競合免疫測定の例は、Ｄｅｕｔｓｃｈらに対する米国特許第４，２３５，６０１号、Ｌｉｏｔｔａに対する米国特許第４，４４２，２０４号およびＢｕｅｃｈｌｅｒらに対する米国特許第５，２０８，５３５号に開示されており、それらの全ては引用することによって本明細書に組み込まれる。] [0135] ［Ｃ．件の分子の検出および濃度の測定］ 溶出の後に、ラベルは、例えば溶出緩衝液中で、単一分子検出器を通って流れる。処理試料は、ラベルを含まなくてよく、単一のラベルを含んでよく、または複数のラベルを含んでよい。ラベルの数は、捕捉工程の間に捕捉された件の分子、例えば生物学的状態のマーカーの分子数に一致または比例（試料の希釈またはフラクションが用いられる場合）する。] [0136] 件の分子と共に用いられるラベルを検出し得るいずれの適切な単一分子検出器を用いてもよい。適切な単一分子検出器は本明細書に記載されている。通常、検出器は、調製された試料をサンプリングするための自動サンプラー、および場合により試料を回収するための回収システムを有するシステムの一部であろう。] [0137] いくつかの態様において、処理試料は、キャピラリーフローシステムを利用する単一分子分析器において分析され、その単一分子分析器は、キャピラリーフローセル、処理試料が通過するキャピラリー内のインタロゲーション・スペースを照射するためのレーザー、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するための検出器、およびインタロゲーション・スペースを通って処理試料を移動させるための駆動力源を有する。いくつかの態様において、単一分子分析器は、処理試料がインタロゲーション・スペースを通って移動する際にその処理試料から放射される光を集光する顕微鏡対物レンズ、例えば高開口数の顕微鏡対物レンズを更に有する。いくつかの態様において、レーザーおよび検出器は共焦点配置にある。いくつかの態様において、レーザーは連続波レーザーである。いくつかの態様において、検出器はアバランシェフォトダイオード検出器である。いくつかの態様において、駆動力源は圧力を供給するためのポンプである。いくつかの態様において、本発明は、複数の試料を自動的にサンプリングし得るサンプリングシステムであって、試料容器とインタロゲーション・スペースとの間の流体連結を与えるサンプリングシステムを有する分析器システムを提供する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．００１〜５００ｐＬ、または約０．０１ｐＬ〜１００ｐＬ、または約０．０１ｐＬ〜１０ｐＬ、または約０．０１ｐＬ〜５ｐＬ、または約０．０１ｐＬ〜０．５ｐＬ、または約０．０２ｐＬ〜約３００ｐＬ、または約０．０２ｐＬ〜約５０ｐＬ、または約０．０２ｐＬ〜約５ｐＬ、または約０．０２ｐＬ〜約０．５ｐＬ、または約０．０２ｐＬ〜約２ｐＬ、または約０．０５ｐＬ〜約５０ｐＬ、または約０．０５ｐＬ〜約５ｐＬ、または約０．０５ｐＬ〜約０．５ｐＬ、または約０．０５ｐＬ〜約０．２ｐＬ、または約０．１ｐＬ〜約２５ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．００４ｐＬ〜１００ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは、約０．０２ｐＬ〜５０ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．００１ｐＬ〜１０ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．００１ｐＬ〜１０ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．０１ｐＬ〜５ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．０２ｐＬ〜約５ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．０５ｐＬ〜５ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．０５ｐＬ〜１０ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．５ｐＬ〜約５ｐＬの体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約０．０２ｐＬ〜約０．５ｐＬの体積を有する。] [0138] いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３より大きい、約２μｍ３より大きい、約３μｍ３より大きい、約４μｍ３より大きい、約５μｍ３より大きい、約１０μｍ３より大きい、約１５μｍ３より大きい、約３０μｍ３より大きい、約５０μｍ３より大きい、約７５μｍ３より大きい、約１００μｍ３より大きい、約１５０μｍ３より大きい、約２００μｍ３より大きい、約２５０μｍ３より大きい、約３００μｍ３より大きい、約４００μｍ３より大きい、約５００μｍ３より大きい、約５５０μｍ３より大きい、約６００μｍ３より大きい、約７５０μｍ３より大きい、約１０００μｍ３より大きい、約２０００μｍ３より大きい、約４０００μｍ３より大きい、約６０００μｍ３より大きい、約８０００μｍ３より大きい、約１００００μｍ３より大きい、約１２０００μｍ３より大きい、約１３０００μｍ３より大きい、約１４０００μｍ３より大きい、約１５０００μｍ３より大きい、約２００００μｍ３より大きい、約３００００μｍ３より大きい、約４００００μｍ３より大きい、または約５００００μｍ３より大きい体積を有する。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは、体積が約５００００μｍ３より小さく、約４００００μｍ３より小さく、約３００００μｍ３より小さく、約２００００μｍ３より小さく、約１５０００μｍ３より小さく、約１４０００μｍ３より小さく、約１３０００μｍ３より小さく、約１２０００μｍ３より小さく、約１１０００μｍ３より小さく、約９５００μｍ３より小さく、約８０００μｍ３より小さく、約６５００μｍ３より小さく、約６０００μｍ３より小さく、約５０００μｍ３より小さく、約４０００μｍ３より小さく、約３０００μｍ３より小さく、約２５００μｍ３より小さく、約２０００μｍ３より小さく、約１５００μｍ３より小さく、約１０００μｍ３より小さく、約８００μｍ３より小さく、約６００μｍ３より小さく、約４００μｍ３より小さく、約２００μｍ３より小さく、約１００μｍ３より小さく、約７５μｍ３より小さく、約５０μｍ３より小さく、約２５μｍ３より小さく、約２０μｍ３より小さく、約１５μｍ３より小さく、約１４μｍ３より小さく、約１３μｍ３より小さく、約１２μｍ３より小さく、約１１μｍ３より小さく、約１０μｍ３より小さく、約５μｍ３より小さく、約４μｍ３より小さく、約３μｍ３より小さく、約２μｍ３より小さく、または約１μｍ３より小さい。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースの体積は、約１μｍ３〜約１００００μｍ３である。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは、約１μｍ３〜約１０００μｍ３である。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは、約１μｍ３〜約１００μｍ３である。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは、約１μｍ３〜約５０μｍ３である。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは、約１μｍ３〜約１０μｍ３である。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは、約２μｍ３〜約１０μｍ３である。いくつかの態様において、インタロゲーション・スペースは、約３μｍ３〜約７μｍ３である。] [0139] いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器はキャピラリーフローシステムを利用し、かつキャピラリーフローセルと、処理試料が通過するキャピラリーの中のインタロゲーション・スペースを照射するための連続波レーザーと、処理試料がインタロゲーション・スペースを通過する際にその処理試料から放射される光を集光する高開口数顕微鏡対物レンズと、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器と、インタロゲーション・スペースを通って処理試料を移動させるための圧力を提供するポンプとを有し、インタロゲーション・スペースは約０．０２ｐＬ〜約５０ｐＬである。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器はキャピラリーフローシステムを利用し、かつキャピラリーフローセルと、処理試料が通過するキャピラリーの中のインタロゲーション・スペースを照射するための連続波レーザーと、処理試料がインタロゲーション・スペースを通過する際にその処理試料から放射される光を集光する高開口数顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）と、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器と、インタロゲーション・スペースを通って処理試料を移動させるための圧力を提供するポンプとを有し、インタロゲーション・スペースは約０．００４ｐＬ〜約１００ｐＬである。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器はキャピラリーフローシステムを利用し、かつキャピラリーフローセルと、処理試料が通過するキャピラリーの中のインタロゲーション・スペースを照射するための連続波レーザーと、処理試料がインタロゲーション・スペースを通過する際にその処理試料から放射される光を集光する高開口数顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）と、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器と、インタロゲーション・スペースを通って処理試料を移動させるための圧力を提供するポンプとを有し、インタロゲーション・スペースは約０．０５ｐＬ〜約１０ｐＬである。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器はキャピラリーフローシステムを利用し、かつキャピラリーフローセルと、処理試料が通過するキャピラリーの中のインタロゲーション・スペースを照射するための連続波レーザーと、処理試料がインタロゲーション・スペースを通過する際にその処理試料から放射される光を集光する高開口数顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）と、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器と、インタロゲーション・スペースを通って処理試料を移動させるための圧力を提供するポンプとを有し、インタロゲーション・スペースは約０．０５ｐＬ〜約５ｐＬである。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器はキャピラリーフローシステムを利用し、かつキャピラリーフローセルと、処理試料が通過するキャピラリーの中のインタロゲーション・スペースを照射するための連続波レーザーと、処理試料がインタロゲーション・スペースを通過する際にその処理試料から放射される光を集光する高開口数顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）と、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器と、インタロゲーション・スペースを通って処理試料を移動させるための圧力を提供するポンプとを有し、インタロゲーション・スペースは約０．５ｐＬ〜約５ｐＬである。これらの態様のいずれにおいても、分析器は最大で１つのインタロゲーション・スペースを含んでよい。] [0140] いくつかの態様において、２００８年１２月１８日に出願された米国特許出願第１２／３３８，９５５号（発明の名称「単一分子検出のための走査分析器および使用方法」）に開示されているように、単一分子検出器は走査分析器システムを有する。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料が入っている試料プレートに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための、可動鏡を有する走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３〜約１００００μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３〜約１０００μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３〜約１００μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３〜約１０μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約２μｍ３〜約１０μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約２μｍ３〜約８μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ（レンズは少なくとも約０．８の開口数を有する）、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約３μｍ３〜約７μｍ３である。これらの態様のいずれにおいても、分析器は１つのインタロゲーション・スペースのみを有し得る。] [0141] 他の態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料が入っている試料プレートに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための、可動鏡を有する走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３〜約１００００μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３〜約１０００μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３〜約１００μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約１μｍ３〜約１０μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約２μｍ３〜約１０μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約２μｍ３〜約８μｍ３である。いくつかの態様において、本発明の方法において用いられる単一分子検出器は、試料プレート、試料内に配置されるインタロゲーション・スペースに向けられる連続波レーザー、インタロゲーション・スペースが試料を通って移動する際に試料から放射される光を集光する高開口数の顕微鏡対物レンズ、インタロゲーション・スペースから放射される放射線を検出するためのアバランシェフォトダイオード検出器、および試料を通ってインタロゲーション・スペースを移動させるための走査モーターを使用し、インタロゲーション・スペースは約３μｍ３〜約７μｍ３である。これらの態様のいずれにおいても、分析器は１つのインタロゲーション・スペースのみを有し得る。] [0142] いくつかの態様において、単一分子検出器は、試料中の件の分子に対する濃度を決定することができ、試料は、少なくとも約１００倍、または１０００倍、または１０，０００倍、または１００，０００倍、または３００，００倍、または１，０００，０００倍、または１０，０００，０００倍、または３０，０００，０００倍の範囲にわたる濃度に及び得る。]
权利要求:
請求項1 被験体における状態を検出またはモニタリングする方法であって、被験体からの第１試料中の第１マーカーを検出すること、および第２マーカーを検出することを含み、第１マーカーには心筋トロポニン−Ｉ（ｃＴｎＩ）または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が含まれ、第１マーカーの検出限界は約２０ｐｇ／ｍｌより小さい、方法。 請求項2 少なくとも１つのマーカーの検出が、マーカーに対するラベルに試料を接触させること、およびラベルの有無を検出することを含み、ラベルの存在の検出は、対応するマーカーが存在することを意味する、請求項１に記載の方法。 請求項3 ラベルが蛍光部分を含有し、検出が、単一分子検出器を通ってラベルを通過させることを含む方法であって、単一分子検出器が：（ａ）蛍光部分を刺激するための電磁放射線源；（ｂ）電磁波源から放射される電磁放射線を受け取るためのインタロゲーション・スペース；および（ｃ）刺激された蛍光部分の電磁気学的特性を決定するための、インタロゲーション・スペースに操作可能に接続される電磁放射線検出器を含む、請求項２に記載の方法。 請求項4 第１マーカーの検出限界が約１０ｐｇ／ｍｌ〜約０．０１ｐｇ／ｍｌの範囲である、請求項１に記載の方法。 請求項5 検出限界の変動係数（ＣＶ）が約２０％〜約１％の範囲である、請求項１に記載の方法。 請求項6 試料サイズが約１０μｌ〜約０．１μｌの範囲である、請求項１に記載の方法。 請求項7 第１試料を２つ又はそれより多くのアリコートに分割すること、および２つ又はそれより多くのアリコート中の少なくとも１つのマーカーを検出することを更に含む、請求項１に記載の方法。 請求項8 試料が血漿、血清、細胞溶解物または組織試料を含む、請求項１に記載の方法。 請求項9 第２マーカーがバイオマーカー、生理学的マーカーまたは遺伝子マーカーを含む、請求項１に記載の方法。 請求項10 第２マーカーがタンパク質を含む、請求項１に記載の方法。 請求項11 正常な個体からの試料において、第１マーカーおよび第２マーカーが１０ｐｇ／ｍｌより低い濃度で発見される、請求項１０に記載の方法。 請求項12 第２マーカーの検出限界が約２０ｐｇ／ｍｌ〜約０．０１ｐｇ／ｍｌの範囲である、請求項１０に記載の方法。 請求項13 第２マーカーが、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ｃＴｎＩ、ＶＥＧＦ、インスリン、ＧＬＰ−１（活性）、ＧＬＰ−１（ｔｏｔａｌ）、ＴＲＥＭ１、ロイコトリエンＥ４、Ａｋｔ１、Ａβ−４０、Ａβ−４２、ＦａｓリガンドまたはＰＳＡを含む、請求項１０に記載の方法。 請求項14 第２マーカーがサイトカインである、請求項１０に記載の方法。 請求項15 サイトカインが、Ｇ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１α、ＩＬ−１０、ＩＬ−２２、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−２１、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−１５、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１α、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７α、ＩＬ−１β、ＭＣＰ、ＩＬ−３２またはＲＡＮＴＥＳである、請求項１４に記載の方法。 請求項16 サイトカインが、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−７、ＩＬ−１αまたはＩＬ−１βである、請求項１４に記載の方法。 請求項17 第２マーカーが、アポリポタンパク質、虚血修飾アルブミン（ＩＭＡ）、フィブロネクチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）またはミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）を含む、請求項１０に記載の方法。 請求項18 第１マーカーに関する濃度を決定すること、および第２マーカーがタンパク質を含む場合に第２マーカーに関する濃度を決定することを更に含む、請求項１に記載の方法。 請求項19 第２マーカーがタンパク質を含む場合に、第２マーカー濃度に対する第１マーカー濃度の比を決定することを更に含む、請求項１に記載の方法。 請求項20 第２マーカーが生理学的マーカーを含む、請求項１に記載の方法。 請求項21 生理学的マーカーが、心電図（ＥＫＧ）、ストレス試験、放射性ヌクレオチドストレス試験、放射性映像、超音波、インスリン耐性、ボディー・マス・インデックス、血圧、年齢、性別または睡眠時無呼吸を含む、請求項２０に記載の方法。 請求項22 第２マーカーが分子マーカーを含む、請求項１に記載の方法。 請求項23 分子マーカーが、コレステロール、ＬＤＬ／ＨＤＬ／Ｑ−ＬＤＬ、トリグリセリド、尿酸、クレアチニン、血中ブドウ糖またはビタミン−Ｄを含む、請求項２２に記載の方法。 請求項24 分子マーカーが、トリグリセリド、ＬＤＬ／ＨＤＬ／Ｑ−ＬＤＬの亜分画を含む、請求項２２に記載の方法。 請求項25 第２マーカーが遺伝子マーカーを含む、請求項１に記載の方法。 請求項26 遺伝子マーカーが、アポリポタンパク質をエンコードする遺伝子における変異を含む、請求項２５に記載の方法。 請求項27 アポリポタンパク質がＡｐｏＥである、請求項２６に記載の方法。 請求項28 状態が、心臓障害、炎症性疾患、増殖性疾患、代謝異常、血管形成、アテローム性動脈硬化または糖尿病を含む、請求項１に記載の方法。 請求項29 心臓障害が、心筋梗塞、壊死、心筋機能障害、不安定狭心症、斑、心不全、冠動脈疾患またはリウマチ性心疾患を含む、請求項２８に記載の方法。 請求項30 増殖性疾患が癌を含む、請求項２８に記載の方法。 請求項31 癌が乳癌、前立腺癌またはリンパ腫を含む、請求項３０に記載の方法。 請求項32 被験体からの第１試料と第２試料との間のマーカー濃度の変化を決定することを更に含む方法であって、その変化が状態を検出またはモニタリングするのに用いられる、請求項１８に記載の方法。 請求項33 被験体からの第１試料と第２試料との間で、第１マーカーおよび第２マーカーの濃度比における変化を決定することを更に含む方法であって、その変化が状態を検出またはモニタリングするのに用いられる、請求項１９に記載の方法。 請求項34 被験体からの第１試料の取得と第２試料の取得との間に医療処置を実施する、請求項３２または３３に記載の方法。 請求項35 医療処置が外科的処置、ストレス試験または治療的介入を含む、請求項３４に記載の方法。 請求項36 モニタリングが疾患の進行、疾患の再発、リスク評価、治療効果または手術の有効性のモニタリングを含む、請求項１に記載の方法。 請求項37 試料中の単一粒子を検出する方法であって：（ａ）試料中に粒子が存在する場合、粒子をラベルでラベリングすること；および（ｂ）ラベルの有無を検出することであって、ラベルの存在の検出は、試料中の単一粒子の存在を意味すること；を含み；単一粒子の検出限界は２０ｐｇ／ｍｌより小さく；かつ単一粒子は、心筋トロポニン−Ｉ（ｃＴｎＩ）、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰまたはＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、ＴＲＥＭ−１、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ロイコトリエンＥ４（ＬＴＥ４）、形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）、Ａｋｔ１、Ａβ−４０、Ａβ−４２、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）もしくは血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の単一分子、フラグメントまたは複合体を含む、方法。 請求項38 単一粒子の検出限界が約１０ｐｇ／ｍｌ〜約０．０１ｐｇ／ｍｌの範囲である、請求項３７に記載の方法。 請求項39 ２つ又はそれより多くのバイオマーカーに対する２つ又はそれより多くの抗体を有する組成物を含むキットであって、２つ又はそれより多くの抗体は蛍光色素部分に結合されており、２つ又はそれより多くのバイオマーカーは請求項３７に記載の粒子を含み、蛍光部分は、当該部分の励起波長で光を放射するレーザーによって刺激すると、少なくとも約２００個の光子を放出することができ、レーザーは、当該部分を含む直径が約５ミクロン以上のスポットに焦点が合わせられ、レーザーによってスポットに向けられる全エネルギーは約３マイクロジュール以下であり、組成物は適切なパッケージングの中に包まれている、キット。
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引用文献:
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