星状細胞腫、その悪性度、及び膠芽細胞腫予後を同定する新規なプライマー

专利摘要:
本発明は、星状細胞腫、そのグレード、及び膠芽細胞腫の予後を同定する新規なプライマーに関する。更に本発明は被験者のびまん性星状細胞腫及び膠芽細胞腫のグレードの違いを診断する方法に関し、この方法は、腫瘍組織における前記遺伝子の発現レベルを正常な脳と比較して検出するステップを含む。更に本発明は、進行性とデノボタイプの二つのタイプの膠芽細胞腫を区別する方法に関し、更に遺伝子ＰＢＥＦ１の発現レベルに基づいて膠芽細胞腫の予後を決定する方法に関し、ここで腫瘍サンプルにおける遺伝子の発現レベルが高い場合は、被験者の生存率が低いことを示す。本発明の構成は、例えば星状細胞腫の診断、予防、及び／又は予後に関して有用である。本発明は更に前記疾患の検出及び予後に使用するキットを提供する。
公开号:JP2011508609A
申请号:JP2010541888
申请日:2009-01-06
公开日:2011-03-17
发明作者:コンダイア、パツール；サントス、バニ；ソマサンドラム、クマラベル；チャンドラモウリ、アシュワテナラヤナラオ；バラスブラマニアム、アナンド；ヘドゲ、アランガル、サティヤランジャンダス；ラオ、マンチャナハリ、ランガスワミ、サチャナラヤナ
申请人:カウンスィル オブ サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチＣｏｕｎｃｉｌ Ｏｆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；
IPC主号:C12Q1-68

专利说明:

[0001] 本発明は、星状細胞腫、その悪性度、及び膠芽細胞腫予後を同定する新規なプライマー（マーカー）に関する。更に本発明は、新規なプライマー（マーカー）に関すると共に被験者の星状細胞腫の存在、その悪性度、及び膠芽細胞腫の予後を診断する方法、その特徴付けを行うキットに関する。更に本発明は、悪性星状細胞腫の存在を診断する方法、その特徴付けを行うキットに関する。更に本発明は、被験者の膠芽細胞腫を診断する方法に関し、被験者の様々なタイプの膠芽細胞腫を同定しその特徴づけを行うキットに関する。]
背景技術

[0002] グリオーマは、最も一般的に見られる原発性脳腫瘍であり、１００,０００人中約１２人の確立で起こる（Landis et al., 1999）。びまん性膠芽細胞腫は、悪性度の度合いの階級によって、低グレードびまん性膠芽細胞腫（DA;グレードII）、未分化（AA;グレードIII）、及び膠芽細胞腫（グレードIV;ＧＢＭ）のように分類される（ＷＨＯの分類）（Mischel et al., 2001）。現在この分類は、臨床で観察される腫瘍の組織病理学的特徴に基づいて行われ、しばしば主観的で整合性がとれない結果となる。ＧＢＭは悪性グリオーマの８０％以上を構成し（DeAngelis et al., 2001）、ＧＢＭ患者は平均１年未満の生存率であった。不運なことに、現時点での外科手術、放射線治療、及び化学療法等の治療は、これら不治の新生物の自然な成長を抑制することができなかった。そして、ＧＢＭ患者の予後は過去３０年間、著しく改善したとは言えない（Davis et al., 1998）。新規な診断治療技術を見出すため、膠芽細胞腫の発生を導く生物学的経路の更なる理解が望まれる。]
[0003] 星状細胞腫の進行は、他の癌と同様に一連の遺伝子変化の蓄積を伴う（Nagane et al., 1997）。標準的な分子手法を用いた、星状細胞腫の進行に伴う多くの遺伝子の同定は、星状細胞腫の発生と進行のプロセスの理解に寄与した（Louis and Gusella, 1995）。表皮成長因子受容体の頻繁な増殖（ＥＧＦＲ）（Hill et al., 1999; Brock and Bower, 1997），血小板由来生長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）（Hermanson et al., 1992; Hermanson et al., 1996; Maxwell et al., 1990; Westermark et al., 1995; Fleming et al., 1992），ｃｄｋ４遺伝子を担持する染色体１２ｑの増幅（Nagane et al., 1997; Hill et al., 1999）及び遺伝子変異１ｐ、９ｐ、１０、１７ｐ、１９ｑ、２２ｑなどはこれら腫瘍の中にしばしば発見された。又、腫瘍抑制遺伝子ｐ５３の突然変異は、低グレード進行性星状細胞腫の染色体１７ｐの変異と関連付けられることが分かった（Maher et al., 2001; Phatak et al., 2002）。染色体９ｐに存在するｃｄｋ阻害物質ｐ１６ＩＮＫ４ａの不活化は散発性星状細胞腫においてはよく見られ、高グレードグリオーマの５０〜７０％、又ＧＢＭ細胞株の９０％の確率で起こる（James et al., 1991; Olopade et al., 1992）。染色体１０のＬＯＨはＧＢＭにおいて起こる変異の中でも頻度が高く、ＰＴＥＮ／ＭＭＡＣ遺伝子の欠損を伴う（Hill et al., 1999; Li et al., 1997）。]
[0004] ＧＢＭには二つのタイプがある：原発性ＧＢＭ（デノボ型）：これは、侵攻性、高浸潤性癌として主に老人（平均年齢５５歳）に現われ、普通は事前の臨床疾患の兆候がなく、３ヶ月未満の短い病歴となる。続発性ＧＢＭ（進行性のタイプ）は通常若い患者に見られ（平均年齢：４０歳）、びまん性（ＷＨＯグレードII）又は未分化星状細胞腫（ＷＨＯグレードIII）からゆっくり時間をかけて悪性化する。これらＧＢＭ間の遺伝子損傷の違いは幾つか特定されているが、二つのタイプのＧＢＭは臨床的、遺伝子的、生物学的に類似の特徴を有するという事実を考慮すると、それらは識別マーカーとして使用するには充分とはいえない（Kleihues et al., 2002）。しかしながら、これら亜類型は、将来進行する可能性があるため、新規で特殊な治療に異なる反応を示すおそれがある（Kleihues and Ohgaki, 1999）。]
[0005] 星状細胞腫に関するあらゆる情報にもかかわらず、星状細胞腫の進行に関して、ＧＢＭ患者の予後を改善するのに充分な理解が得られていない。星状細胞腫の様々な遺伝子の発現パターンやその下流遺伝子産物を世界的に系統的に更に理解することにより、新しい診断治療ターゲットを提供することができ好ましい。これに向けて多くの研究がなされ、星状細胞腫の遺伝子発現プロフィールが報告されている（Liau et al., 2000; Sallinen et al., 2000; Rickman et al., 2001; Ljubimova et al., 2001; Watson et al., 2001; Tanwar et al., 2002; Fathallah-Shaykh et al., 2002; Nutt et al., 2003; Wang et al., 2003; Godard et al., 2003）。]
[0006] 又、患者に対して効力を最大に、毒性を最小にしながら、特殊な治療用撮画手段を用いて病原性腫瘍のタイプを特定できることが望ましい（Golub et al., 1999; Kudoh et al., 2000）。従来は、癌の分類は主に癌細胞の形態的外観に基づいて行われた。しかし、これには重大な限界がある。というのは、同様な組織病理学的発現をする腫瘍でも、かなり異なる臨床経過を辿り、治療に対しても異なる反応を示すことがありうるからである。例えば、組織病理学的発現に基づく場合、グレードIVの星状細胞腫はグレードIIIの星状細胞腫と全く見分けられない。]
[0007] 又、脳腫瘍に対する免疫学的マーカー診断は、明確で改善された診断である。例えば、星状細胞腫から乏突起星状細胞腫を見分けることができ、更に低グレードの星状細胞腫から高グレードの星状細胞腫を見分けることができる。しかしながら、異なる蛋白質の発現（ＧＦＡＰ，ビメンチン、シナプトフィジン、ネスティン）は、治療アプローチの改善に寄与しない。低グレードから高グレードへの星状細胞腫の移行を予測することは、現在使用されているマーカーでは難しい（De Girolami et al., 1994）。]
[0008] ＴｅｗｓとＮｉｓｓｅｎの報告書によると、様々な癌関連マーカーによる免疫組織化学的検出は、原発性と続発性膠芽細胞腫と前駆体腫瘍との間の重要な異なる発現パターンを示すことはできなかった。グリオーマ進行中の同一固体内の一定パターンや悪性腫瘍との関連は何ら見られなかった （Tews and Nissen, 1998-99）。一方、肺炎のクラス予測は、ＤＮＡマイクロアレイを有する遺伝子発現プロフィールに基づいてなされる（Golub et al., 1999）。]
[0009] しかし、治療計画の最適化を図る高グレードグリオーマを分類するための遺伝子発現プロフィールに基づくクラス予測能を得ることはこれまでは不可能だった。Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（US Patent 20040053277）は多数の遺伝子セットを同定した。その発現により、グリオーマを膠芽細胞腫（ＧＢＡ），未分化［悪性］星状細胞腫（ＡＡ），未分化希突起グリオーマ（ＡＯ），又は乏突起膠腫（ＯＬ）に分類することができる。しかしながら、現在使用されているこれら分子マーカーはＧＢＭの亜類型を正確に同定することができない。ｐ５３遺伝子の突然変異はグレードII/IIIの星状細胞腫と続発性膠芽細胞腫の約５０％と関係があるが、原発性膠芽細胞腫の１０〜２０％としか関係がないと報告されている（Campomenosi et al., 1996; Watanabe et al., 1997; Schmidt et al., 2002）。
同様に、ＧＢＭの分類に通常使用されるもう１つのマーカーである表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、すべての原発性ＧＢＭケースの４０％においてのみ増幅され、続発性ＧＢＭ（Frederick et al., 2000）においては増幅がめったに報告されていないことがわかった。グリオーマのマイクロアレイ遺伝子発現プロファイリングにより、何千個もの遺伝子の同時分析が可能になり、腫瘍のグレード、進行、生存率に関係する分子マーカーを同定できると予想されている。ｃＤＮＡマイクロアレイ実験により、又その後のリアルタイムでの定量的ＰＣＲ及び／又は免疫組織化学的手法を用いた検証により、星状細胞腫の異なる組み合わせにおいて発現した幾つかの特異的な遺伝子カテゴリーを同定した。又、一般的にＧＢＭと特に原発性ＧＢＭを特徴付ける遺伝子も同定した。更に、治療反応と同定された遺伝子の発現との相互関係も確立した。星状細胞腫、膠芽細胞腫及び膠芽細胞腫の亜類型の存在を予後との関連において予測できることが望ましく、これに照らし合わせて適切な治療を施すことができることが望ましい。前記同定、及び他の効果が本発明により提供された。]
発明が解決しようとする課題

[0010] [発明の目的]
本発明の第一の目的は、被験者の星状細胞腫の存在を診断する方法を提供することである。
更に本発明の他の目的は、被験者の星状細胞腫を特徴づけるキットを提供することである。
更に本発明の他の目的は、被験者の悪性星状細胞腫（ＡＡ，ＧＢＭ）を特徴づける方法を提供することである。
更に本発明の他の目的は、被験者の悪性星状細胞腫（ＡＡ，ＧＢＭ）を特徴づけるキットを提供することである。
更に本発明の他の目的は、被験者の膠芽細胞腫の存在を診断することである。
更に本発明の他の目的は、被験者の膠芽細胞腫（ＧＢＭ）を特徴づけるキットを提供することである。
更に本発明の他の目的は、被験者の膠芽細胞腫のタイプを同定する方法を提供することである。
更に本発明の他の目的は、被験者の原発性及び続発性膠芽細胞腫を区別するキットを提供することである。
更に本発明の他の目的は、被験者の膠芽細胞腫の予後を診断する方法に関する。
更に本発明の他の目的は、被験者の膠芽細胞腫の予後を診断するキットに関する。]
課題を解決するための手段

[0011] 本発明は、被験者の正常なサンプルから星状細胞腫を診断する方法であって、当該被験者から得た脳組織のテストサンプルの単一遺伝子発現レベル、又既知の正常な脳組織のコントロールサンプルの単一遺伝子発現レベルに基づいて星状細胞腫を診断する方法を提供する。ここで、前記被験者の正常なサンプルと比較してテストサンプルの前記遺伝子の発現レベルが高いか低いかによって星状細胞腫を特定する。更に、本発明は被験者の星状細胞腫を同定するキットに関する。]
[0012] 更に本発明は、被験者の悪性星状細胞腫（ＡＡ，ＧＢＭ）を診断する方法であって、当該被験者から得た脳組織のテストサンプルの単一遺伝子発現レベル、又既知の正常な脳組織のコントロールサンプルの単一遺伝子発現レベルに基づいて星状細胞腫を診断する方法を提供する。ここで、前記被験者の正常なサンプルと比較してテストサンプルの前記遺伝子の発現レベルが高い場合、テストサンプルを得た被験者の悪性星状細胞腫を示す。
更に本発明は、被験者の星状細胞腫に関してその悪性良性を区別するキットに関する。 更に本発明は、被験者の低グレード星状細胞腫から膠芽細胞腫を診断する方法であって、当該被験者から得た脳組織のテストサンプルの単一遺伝子発現レベル、又既知の正常な脳組織のコントロールサンプルの単一遺伝子発現レベルに基づいて星状細胞腫を診断する方法を提供する。ここで、前記被験者の正常なサンプルと比較してテストサンプルの前記遺伝子の発現レベルが高い場合、テストサンプルを得た被験者の膠芽細胞腫（ＧＢＭ）を示す。
更に本発明は、被験者の低グレード星状細胞腫から膠芽細胞腫を同定するキットに関する。
更に本発明は、被験者の続発性膠芽細胞腫から原発性膠芽細胞腫を区別する方法であって、当該被験者から得た脳組織のテストサンプルの単一遺伝子発現レベル、又既知の正常な脳組織のコントロールサンプルの単一遺伝子発現レベルに基づいて原発性膠芽細胞腫を診断する方法を提供する。ここで、テストサンプルにおける前記遺伝子の発現レベルが正常なサンプルに比べて高い場合は、サンプルを得た被験者に原発性膠芽細胞腫を認めるものである。又本発明は、被験者における原発性、続発性膠芽細胞腫を区別するキットに関する。]
[0013] 更に本発明は、被験者の膠芽細胞腫の予後を診断する方法に関する。更に本発明は、膠芽細胞腫を有する被験者の生存率という予後予測を診断する方法であって、当該被験者から得た脳組織細胞のテストサンプルの遺伝子ＰＢＥＦ１の発現レベル、又既知の正常な脳組織細胞のコントロールサンプルの遺伝子ＰＢＥＦ１の発現レベルに基づいて被験者の膠芽細胞腫の予後を診断する方法を提供する。ここで、前記被験者の正常なサンプルと比較してテストサンプルの前記遺伝子の発現レベルが高い場合、テストサンプルを得た被験者の生存率が低いこと示す。本発明は更に、膠芽細胞腫の被験者の生存率が高いか低いかを見極めるキットに関する。]
発明の効果

[0014] 本発明の効果として：
１星状細胞腫の存在を診断する有用な方法を提供する。
２悪性星状細胞腫（ＡＡ又はＧＢＭ）の存在を診断する有用な方法を提供する。
３膠芽細胞腫、つまり原発性及び続発性のタイプを同定する有用な方法を提供する。
４ 膠芽細胞腫の予後を決定する有用な方法を提供する。
５ この方法は、臨床症状が現れる前後共に有用である。
６ この方法は、抗がん治療の効果をモニターすることにも応用できる。]
図面の簡単な説明

[0015] 図１は、正常な脳組織と比較して特異的に調整された星状細胞腫における遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＳＹＴ１を図１Ａにプロットした図である。各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図１は、正常な脳組織と比較して特異的に調整された星状細胞腫における遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＲＡＢ２６を図１Ｂにプロットした図である。各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図１は、正常な脳組織と比較して特異的に調整された星状細胞腫における遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＤＩＲＡＳ２を図１Ｃにプロットした図である。各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図１は、正常な脳組織と比較して特異的に調整された星状細胞腫における遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＲＡＢ１３を図１Ｄにプロットした図である。各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図２は、正常な脳組織と比較して、悪性星状細胞腫（ＡＡ，ＧＢＭ）において上方調整された遺伝子をプロットした図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率をＩＧＦＢＰ７にプロットした図である。各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＣＯＬ６Ａ１を図３Ａにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＤＣＮを図３Ｂにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＰＬＡＴを図３Ｃにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＬＧＡＬＳ３を図３Ｄにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＦＡＢＰ７を図３Ｅにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＬＯＸを図３Ｆにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＬＡＭＢ１を図３Ｇにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＩＧＦＢＰ３を図３Ｈにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＧＡＤＤ４５Ａを図３Ｉにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＦＳＴＬ１を図３Ｊにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＲＨＯＣを図３Ｋにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、Ｂ２Ｍを図３Ｌにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図３は、膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＰＢＥＦ１を図３Ｍにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図４は、原発性膠芽細胞腫の特異遺伝子の散布図であり、リアルタイムの定量的ＰＣＲ分析により得た遺伝子発現のＬｏｇ２対数変換率を示したものであり、ＡＥＢＰ１を図４Ａにプロットし、ＳＯＤ２を図４Ｂにプロットし、各点は、一つのサンプルから得たデータを示す。横軸は、対応するグループの平均Ｌｏｇ２対数変換率を表す。
図５（Ｑ−Ｔ）は、ＩＧＦＢＰ７の免疫組織化学的妥当性を示す。びまん性浸潤星状細胞腫（ＤＡ、ＡＡ、ｓ/ｐ ＧＢＭ）におけるＩＧＦＢＰ７染色を顕微鏡写真図により示す。このイソ型は悪性星状細胞腫（ＡＡ，ＧＢＭ）の染色を示す。ＩＧＦＢＰ７染色はパネルＱ、Ｒ、Ｓ、Ｔに示す。数個の腫瘍細胞がＤＡ（Ｑ）に標識化されている。標識化された細胞の数は、ＡＡ（Ｒ）、続発性ＧＢＭ（Ｓ）、原発性ＧＢＭ（Ｔ）の順で次第に増加することが観察された。
図６（Ｅ−Ｈ）は、ＩＧＦＢＰ３の免疫組織化学的妥当性を示す。びまん性浸潤星状細胞腫（ＤＡ、ＡＡ、ｓ/ｐ ＧＢＭ）におけるＩＧＦＢＰ３染色を顕微鏡写真図により示す。このイソ型はＧＢＭにおける最大染色パターンを示す。ＩＧＦＢＰ３染色はパネルＥ、Ｆ、Ｇ、Ｈに示す。適度な数の腫瘍細胞はＤＡ（Ｅ）及びＡＡ（Ｆ）における細胞質染色を示す一方で続発性ＧＢＭ（Ｇ）及び原発性ＧＢＭ（Ｈ）は数個の腫瘍細胞の強い（３+）細胞質染色を示した。
図７（Ａ-Ｅ）は、ＧＡＤＤ４５Ａの免疫組織化学的妥当性を示す。つまり、膠芽細胞腫におけるＧＡＤＤ４５Ａの過剰発現の組織化学的妥当性を示す。正常脳細胞の切片においてＧＡＤＤ４５Ａに対する染色実験が行われた：ネガティブ染色（Ａ）、ＤＡ−ネガティブ染色（Ｂ）、ＡＡ-ネガティブ染色（Ｃ）、続発性ＧＭＢ-ポジティブ染色（Ｄ）；原発性ＧＭＢ-ポジティブ染色（Ｅ）が示された。
図８（Ａ-Ｅ）は、ＦＳＴＬ１の免疫組織化学的妥当性を示す。つまり、膠芽細胞腫におけるＧＡＤＤ４５Ａの過剰発現の組織化学的妥当性を示す。正常脳細胞の切片においてＦＳＴＬ１に対する染色実験が行われた：ネガティブ染色（Ａ）、ＤＡ−ネガティブ染色（Ｂ）、ＡＡ-ネガティブ染色（Ｃ）、続発性ＧＭＢ-ポジティブ染色ＧＢＭ（Ｄ）；原発性ＧＭＢｓ-ポジティブ染色（Ｅ）が示された。
図９（Ａ-Ｅ）は、Ｂ２Ｍの免疫組織化学的妥当性を示す。つまり、膠芽細胞腫におけるＢ２Ｍの過剰発現の組織化学的妥当性を示す。正常脳細胞白質障害（Ａ）の切片においてＢ２Ｍに対する染色実験が行われた：ＤＡ（Ｂ）及びＡＡ（Ｃ）に対してネガティブ染色、続発性ＧＢＭ（Ｄ）及び原発性ＧＭＢ（Ｅ、Ｆ）に対してポジティブ染色を示した。尚、正常脳細胞（Ａ）及びＤＡ（Ｂ）における実質（性）静脈はほとんど標識化されなかった。
図１０は、ＰＢＥＦ１の免疫組織化学的妥当性を示す。正常な脳より採取した切片においてＰＢＥＦ１に対する染色実験が行われた：ネガティブ染色（Ａ）、ＤＡ−ネガティブ染色（Ｂ）、ＡＡ-ネガティブ染色（Ｃ）、ＡＡ-ポジティブ染色（Ｄ）、ＧＭＢ-ポジティブ染色（Ｅ及びＦ）が示された。
図１１は、ＰＢＥＦ１の発現及びＧＢＭ患者の生存率を示す。ＥＧＦＲ１及びＰＢＥＦ１染色に対して、５１人のＧＢＭ患者に対してカプラン−マイヤ−生存率の概算をｐ５３に示す。（Ａ）ＰＢＥＦ１に対してポジティブ及びネガティブのグループの生存率のカーブを単変量解析で示した。ＰＢＥＦ１に対してポジティブ（赤線）の症例はネガティブ（緑線）（Ｐ＝０．１６）の症例より生存率が低い。（Ｂ）ｐ５３及びＰＢＥＦ１の同時発現に対してポジティブ及びネガティブのグループに対する生存率のカーブを多変量解析で示した。両マーカー（赤線）に対してポジティブのグループはその両方又はどちらかに対してネガティブのグループに比べて生存率が低い（緑線）。] 図１０ 図１１ 図１Ａ 図１Ｂ 図１Ｃ 図１Ｄ 図２ 図３Ａ 図３Ｂ 図３Ｃ
[0016] 本発明は、星状細胞腫、悪性の星状細胞腫、膠芽細胞腫の存在を診断する方法に関し、被験者の膠芽細胞腫のタイプの同定に関する。拡散して浸潤する星状細胞腫は次のタイプを含む：１．びまん性星状細胞腫（DA; WHO Gr. II）、２．未分化星状細胞腫（AA; WHO Gr. III）、及び３．膠芽細胞腫（GBM; WHO Gr. IV）。ＡＡとＧＢＭは、悪性星状細胞腫を形成し、最もよく見られる内因性悪性新生物である。ＧＢＭの進行は、少なくとも２本の遺伝子経路で起こると言われ、結果的に原発性及び続発性ＧＢＭを形成する。原発性ＧＢＭは、何ら悪性の兆候もないまま最も高い頻度で新たに変異株を発症する。このカテゴリーに入る患者は一般的に老齢で、表皮成長因子受容体の頻繁な増殖（ＥＧＦＲ）遺伝子の増幅、ｐ１６ ＩＮＫ４Ａの欠如、ＰＴＥＮ遺伝子の突然変異、及びＭＤＭ２の増幅などが、かなりの高い確率で起こる。一方、続発性ＧＢＭは低グレードの星状細胞腫が先行してその後に起こる。ｐ５３遺伝子の突然変異、ＲＢの変異、ＰＤＧＦＲの増幅や過剰発現は、続発性ＧＢＭの進行でよく見られる。このような遺伝子の違いにもかかわらず、これら亜類型が予後に関しても著しく異なるかどうか確かではない。本発明の方法は、被験者由来の核酸や蛋白質を含む被験者から得た生体物質のサンプルを採取し、単一又は組み合わせの以下の郡からなる遺伝子の発現レベルを、定量的に又は半定量的に特定するステップを含む。
１．ＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、ＤＩＲＡＳ２及びＲＡＢ１３：星状細胞腫の存在を診断する遺伝子の特徴的な発現パターン。
２．ＩＧＦＢＰ７：悪性星状細胞腫（ＡＡ、ＧＢＭ）の存在を診断する遺伝子の特徴的な発現パターン。
３．ＣＯＬ６Ａ１、ＤＣＮ、ＰＬＡＴ、ＬＧＡＬＳ３、ＦＡＢＰ７、 ＬＯＸ、ＬＡＭＢ１、ＩＧＦＢＰ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＦＳＴＬ１、ＲＨＯＣ、Ｂ２Ｍ、及びＰＢＥＦ１：膠芽細胞腫の存在を診断する遺伝子の特徴的な発現パターン。
４．ＡＥＢＰ１及びＳＯＤ２：膠芽細胞腫のタイプを診断する遺伝子の特徴的な発現パターン。
５．ＰＢＥＦ１：膠芽細胞腫の予後を決定する遺伝子の特徴的な発現パターン。]
[0017] この測定は、蛋白質又はＲＮＡやｃＤＮＡなどの特殊な核酸を測定することによる検出も含む。]
[0018] 本発明において使用される遺伝子配列は以下の通りである。しかしながら、これはＳＥＱＩＤに応じた配列ではなく、対応する遺伝子に応じた配列である（ＳＥＱ ＩＤに従い、遺伝子配列の手がかりとなるこの配列は、遺伝子配列表ｐａｔｅｎｔＩｎの最新ヴァージョン３．５の後半に記載されている）。]
[0019] 1.Synaptotagmin I（SYT1）
Accession number: NM_001135806
Sequence:
ACCACCAAGAATAAAATAGTTGTTTGTCCCCTACAGTAGAACAAGTTTGCCCATTCATCCTTGTGATAGATATGCATGCAAAACCAAAATGAAATCAAATCCCCACAGATGGCTCGTAAGTCAAAAACACTGTTTAATTCTTTCACTGCATCCCTTTGGGAAGCCTGGCCCTTGAAAAACAGAATAATTCTGAAAGAAAGAAAACAAAGAAAAACATACTCCAGAATTCCTAATAGAACACTTCACCTGAACCTAAAATGGTGAGCGAGAGTCACCATGAGGCCCTGGCAGCCCCGCCTGTCACCACTGTCGCGACTGTTCTGCCAAGCAACGCCACAGAGCCAGCCAGTCCTGGAGAAGGAAAGGAAGATGCATTTTCTAAGCTGAAGGAGAAGTTTATGAATGAGTTGCATAAAATTCCATTGCCACCGTGGGCCTTAATTGCAATAGCCATAGTCGCAGTCCTTTTAGTCCTGACCTGCTGCTTTTGTATCTGTAAGAAATGTTTGTTCAAAAAGAAAAACAAGAAGAAGGGAAAGGAAAAAGGAGGGAAGAATGCCATTAACATGAAAGATGTAAAAGACTTAGGGAAGACGATGAAAGATCAGGCCCTCAAGGATGATGATGCTGAAACTGGATTGACAGATGGAGAAGAAAAAGAAGAACCCAAAGAAGAGGAGAAACTGGGAAAACTTCAGTATTCACTGGATTATGATTTCCAAAATAACCAGCTGCTGGTAGGGATCATTCAGGCTGCCGAACTGCCCGCCTTGGACATGGGGGGCACATCTGATCCTTACGTGAAAGTGTTTCTGCTACCTGATAAGAAGAAGAAATTTGAGACAAAAGTCCACCGAAAAACCCTTAATCCTGTCTTCAATGAGCAATTTACTTTCAAGGTACCATACTCGGAATTGGGTGGCAAAACCCTAGTGATGGCTGTATATGATTTTGATCGTTTCTCTAAGCATGACATCATTGGAGAATTTAAAGTCCCTATGAACACAGTGGATTTTGGCCATGTAACTGAGGAATGGCGTGACCTGCAAAGTGCTGAGAAGGAAGAGCAAGAGAAATTGGGTGATATCTGCTTCTCCCTTCGCTACGTACCTACTGCTGGTAAGCTGACTGTTGTCATTCTGGAGGCAAAGAACCTGAAGAAGATGGATGTGGGTGGCTTATCCGATCCTTATGTGAAGATTCATCTGATGCAGAATGGTAAGAGGCTGAAGAAGAAAAAGACAACAATTAAAAAGAACACACTTAACCCCTACTACAATGAGTCATTCAGCTTTGAAGTACCTTTTGAACAAATCCAGAAAGTGCAGGTGGTGGTAACTGTTTTGGACTATGACAAGATTGGCAAGAACGATGCCATCGGCAAAGTCTTTGTGGGCTACAACAGCACCGGCGCGGAGCTGCGACACTGGTCAGACATGCTGGCCAACCCCAGGCGACCTATTGCCCAGTGGCACACCCTGCAGGTAGAGGAGGAAGTTGATGCCATGCTGGCCGTCAAGAAGTAAAGGAAAGAAGAAGCCTTTCTGCATTTGCCCATATAGTGCTCTTTAGCCAGTATCTGTAAATACCTCAGTAATATGGGTCCTTTCATTTTTCCAGCCATGCATTCCTAACACAATTCAGTGGTACTTGGAATCCTGTTTTAATTTGCACAAATTTAAATGTAGAGAGCCCCTAAGTCCTTCATCATACCACTGCCCTCCAAATCTACTCTTCTTTTAAGCAATATGATGTGTAGATAGAGCATGAATGAAATTATTTATTGTATCACACTGTTGTATATACCAGTATGCTAAAGATTTATTTCTAGTTTGTGTATTTGTATGTTGTAAGCGTTTCCTAATCTGTGTATATCTAGATGTTTTTAATAAGATGTTCTATTTTAAACTATGTAAATTGACTGAGATATAGGAGAGCTGATAATATATTATACGGTAAATATAGTATCGTCTGCATTCCAGCAAAAATATCAACTCGTAAGGCACTAGTACAGTTAAACTGACATCTTAAAGGACAACTTAAACCTGAGCTTTCTATTGAATCATTTGAGTACCAAGATAAACTTACACCACATACTTGGTGGGTGAATCCAATTTTGTAGAATTCCTACACAGGCAAAATAGCATGATCTGAGCAGCAGCATCCAGGCTGACCTCAAGGAAGCATAGCCACAAAACAGAATAGCACCTGTCTGTACATATTTACAAAGCTAAAATAATGGCTTCACTCTTATATTTGAGGAAGCAACTGAACAGGAGTCAATGATTTCATATTACTGCATATAGAATAACAACAAGGTGTTCCGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGCACATTTGTTTGGGGATGGGGGAGAAGAAGCTAAGGGGAGAAGTCAACATTTATGAAATATTGCCTGACTATTTAAAAAGAAAAAAGTAGCTCTCCATTATCACCTTTATACAAAATGTACATCCTGTGAATTCTGTTCCAGATTTCACACCTACAATAATTCCAAAAGGTTTGCACATTAGAGTTTGTAACAAAATATTTTATTATATAAAACCAGGTTAGAAGGAATGCAGGATATTTTTAACACAACAATCTGTGCTTATTACACAAAATTACTTTGTGGTAAACAGACAGTATTGTAATCCCATCAAAAGATGAAAGAAAAACAAAAACAAAAACCAACAACAATTAGCCATAGTTCTGAATGCACTTCAATTAAGCCAAAACAGACAGCTAGTGATCTTTTTATATGCTCTTTTTACTTAAGTTTTAATTTGTCCTTTAAAAAAAGGTGAAACAAACCAAGAACAAGTTCTAGAAAACTGAAGCAACCTCTTATGTATACTAGATGCTTGATTTAGGAGGAGTTTTTAAACGTTTTCAATGTTATTATGTAGTAAATGACACTATTATGAAGCTACTAGTCATTCCATAAGAGTCTTAAAGGACTGCTCTGTGTAACACTGTGACTGCCGTGTGTGCTTAGACCCGTAGTTTCCTCAGTGGATAGCACTCAATTTATTCCGTAGTGATATTGTAACAATACTGCCATTCCCTTCTACTGCACTGCCCAAGGTGTGTGTAGCACAAACAGTTCTCATTACAAAGGACCAATTCAGAACTGAAAAGCTATGCATAGGACAAGGAAGATACATAGAATGGGGTGGAACACAGCATTTTGTCAAGCACTGTGCAATATTCCATATTTTTCCCCACTATGGTAGACAACCATTTCGTGGAAGGGCAGCCTATTATCCCACACTGCATCTAGCCTTTTGTCCCATTCACTTCTGTGATCCATTTTAATTTCCAGGCCACAAGACAGTAGTGATGCTCTGAAATGAAAGTTTGTCTTCACAAATATCAAAACAAAATGGAGGAAAACTAAGCATTGGCCTCATGTTCAGTCTTCAGGATATCACACCACGTCTTTTCAAAAACTAAAGAGAATTCAAAAAGGGCTGATGGTAGGCTTTGAACATGGGGTTGGCTGTTTCCCAGTAAAACTGGAATTCCTGTCGTTACTGTTTCCTTATCAAAGAAGGGGCAAGCTCTTTTGCCTTTTAGGCCAGACATAGCAAACGCTTTATAATTGGCATAGACATAAAGGATAAAAGGAAAATAACCGTCTGCCGATGGTCCGTACTTCTTAAAAAACATAGGTAATAGAAAATATACACAAGTCAGAATGTGAAATTAAATAATGGTTTGAACAGAAAATTCAAACAAGACTCTTTCCAATTTAAAGGGCCAAACCCTACCAAAGAGAGGGAGTTGACTGGCTTTTAAAAAGTATTTAAATACCACAAATGACATTTAATTTCACTGTATTCAGCTTTAAGTTGTTCACAATGAAACCACACTTTCAAACAAGCAGGTTCAAGCTGCTGAATAGACATTATTTCTTGCATTAAAATACCACTAATGCATTCTCTTGCAACACTGCCAGACATGGGATTGTCACCATAGAATTAGTTGGTACTATGCCATCTTTCACTCTTTCACAAGTCAGTGATGGAACCTGCTTTATGACCAAGATTCATCCTCAAATAAGCCACATGTACCCTTCTGACAAAGCTGTGTAAAGTATTAGAATCTGATGCTCTAGAAAGATCCTAGTTGCCTTTGTGTATATTTACTGCCTGCTTGAGTGTTTCTATGTGTGGGTTTTCCCTGTATCTTGTAGAAATGTTGGGGTGTTTTCCTCTGCCATATGGCTCGTGGCCTGCGAGCCAACTATTTCAGCTGTATTTTACCTTCATTTTTGATGAGGTGATTTAAATTTTGTTTCACTTTGTGTAGTGAATTCCACAGTAGTTTTCTGATTGTTGTTAAAAATGACTTAACATATTACACAGATATTCAATAAAAATGTTTTATTTCCTGTTGAAAAAAAAAAAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: GGTTGGCTGTTTCCCAGTAAAAC
Reverse primer sequence: TTTTAAGAAGTACGGACCATCGG
Amplicon length: 171
Amplicon sequence:
GGTTGGCTGTTTCCCAGTAAAACTGGAATTCCTGTCGTTACTGTTTCCTTATCAAAGAAGGGGCAAGCTCTTTTGCCTTTTAGGCCAGACATAGCAAACGCTTTATAATTGGCATAGACATAAAGGATAAAAGGAAAATAACCGTCTGCCGATGGTCCGTACTTCTTAAAA
2.RAB26, memberRASoncogene family（RAB26）
Accession number: NM_014353.
Sequence:
GCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCAGGGGAAGGGTTCGGGTCCGGGTCGGGCTCGGCGGGCGCGGGGTGCGGGACGGCCCAGGGCACGGCGGCTGCAGCGGGAGCACACTGAGCGCCCGCCCGCCATGTCCAGGAAGAAGACCCCCAAGAGCAAAGGGGCCAGCACCCCCGCTGCCTCCACGCTGCCCACCGCCAACGGGGCCCGACCGGCGCGCTCCGGGACTGCGCTTTCCGGCCCCGACGCGCCGCCCAACGGGCCCTTGCAGCCCGGCCGGCCCTCGCTTGGCGGCGGTGTCGACTTCTACGACGTCGCCTTCAAGGTCATGCTGGTGGGGGACTCGGGTGTGGGGAAGACCTGTCTGCTGGTGCGATTCAAGGATGGTGCTTTCCTGGCGGGGACCTTCATCTCCACCGTAGGCATTGACTTCCGGAACAAAGTTCTGGACGTGGATGGTGTGAAGGTGAAGCTGCAGATGTGGGACACAGCTGGTCAGGAGCGGTTCCGCAGTGTTACCCATGCCTACTACCGGGATGCTCATGCTCTGCTGCTGCTCTACGATGTCACCAACAAGGCCTCCTTTGACAACATCCAGGCCTGGCTGACCGAGATCCACGAGTACGCCCAGCACGACGTGGCGCTCATGCTGCTGGGGAACAAGGTGGACTCTGCCCATGAGCGTGTGGTGAAGAGGGAGGACGGGGAGAAGCTGGCCAAGGAGTATGGACTGCCCTTCATGGAGACCAGCGCCAAGACGGGCCTCAACGTGGACTTGGCCTTCACAGCCATAGCAAAGGAGTTGAAGCAGCGCTCCATGAAGGCTCCCAGCGAGCCGCGCTTCCGGCTGCATGATTACGTTAAGAGGGAGGGTCGAGGGGCCTCCTGCTGCCGCCCTTGAACCTGGCTGAGCTCAGTCCTCTGGAGGAAGCCGCCCAGTCCCTAGAAGGCTGGACAGAGGGTCTCCAGGCCCTTCTGACTTTGTTGCCCAGTGGCCAACGCCCGAGTGTCTGTTTTCAGGAGCCCCAGGTCAAGCCTTGTCCCTTCCTCCTCCCAGCAACAGTCCCAACAAGCAGGCTTCTGAGAGCCCGTGGCCGCACACTGGCCGCCACGGAAAAGCAGTCTTCTGCACGGGACGGGGAGCGGCAAGTGGACAGACTTTGCCACGGTGCTCTGCTGCCCCCTCCTGGGCACGTCCAGGTGAGGGAGGGCTGGGGCTGGCACCACGCACAGTGCCTAACCCTAGAAAAGCCATGTCTTCAGCCGCACATGCTCAGGCAGCTAAGGGAGGACGCCTGCCCACGCCTGGGACAGAAGGCTTCACTGCTAATCACATCGTGCATCTGTGTGTCCTGGGAGCTGCCTGCTCCCGGCCCACCCTCTAGGAGGCTCTGGCTCAAACAGCAATAGGGTCTTCCTCACTGACCTTGGAGGATGCCTGTGGCCTTGTGATAAAATGTGGGAAATCACAGAAAACACCAGAAACAACAACTGCCAGCCCGGCCTGGCCACAGGTGAGGTCTGTGATTTCCGAGCACGCTCCACCTTGCACTCAACTTGGCCTTTTGATTGCACAAGCCTTTGTTTTCAGTCCTAGTGAATAAAGTTGTGTTTTCTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAA
Primers used:
Forward primer sequence: GTCTGCTGGTGCGATTCAAG
Reverse primer sequence: GCATGGGTAACACTGCGGA
Amplicon length: 163
Amplicon sequence:
GTCTGCTGGTGCGATTCAAGGATGGTGCTTTCCTGGCGGGGACCTTCATCTCCACCGTAGGCATTGACTTCCGGAACAAAGTTCTGGACGTGGATGGTGTGAAGGTGAAGCTGCAGATGTGGGACACAGCTGGTCAGGAGCGGTTCCGCAGTGTTACCCATGC

3.DIRAS family,GTP-binding RAS-like 2（DIRAS2）
Accession number: NM_017594
Sequence
ACACACCCTGCGCTGCCCTGTCCTGCGCGAGTGGAGCTCTGAAGAAGCTCTGAGCGGAGTTGTGTTCTTCCCCAGGTGCGTCCTGGCTGAGAGTTGGAGCTCTCCAGCAACATGCCTGAGCAGAGTAACGATTACCGGGTGGCCGTGTTTGGGGCTGGCGGTGTTGGCAAGAGCTCCCTGGTGTTGAGGTTTGTGAAAGGCACATTCCGGGAGAGCTACATCCCGACGGTGGAAGACACCTACCGGCAAGTGATCAGCTGTGACAAGAGCATATGCACATTGCAGATCACCGACACGACGGGGAGCCACCAGTTCCCGGCCATGCAGCGGCTGTCCATCTCCAAAGGGCACGCCTTCATCCTGGTGTACTCCATTACCAGCCGACAGTCCTTGGAGGAGCTCAAGCCCATCTACGAACAAATCTGCGAGATCAAAGGGGACGTGGAGAGCATCCCCATCATGCTGGTGGGGAACAAGTGTGATGAGAGCCCCAGCCGCGAGGTGCAGAGCAGCGAGGCGGAGGCCTTGGCCCGCACATGGAAGTGTGCCTTCATGGAGACCTCAGCCAAGCTCAACCATAACGTGAAGGAGCTTTTCCAGGAGCTGCTCAACCTGGAGAAGCGCAGGACCGTGAGTCTCCAGATCGACGGGAAAAAGAGCAAGCAGCAGAAAAGGAAAGAGAAGCTCAAAGGCAAGTGCGTGATCATGTGAAGGCCCTTCCTGCGGGAGGAGCAGCTGTGTGTCCCCGGCACCTCACTCCCCCAAAATGACACCCACCGTCGTCAGGGTAGCATGTATAATGCCCACGTGTTAAACATTGCATTTAATCGAGATGCGTCCTATTGTCCTTAAGAGGGCGTTTCACACCACCAACAGTAAGCCACCCACTCTGGAGTCACAGAATCTGCCAGGCGGTTCAAGTGAAAACCAACACACTCAGCATCCCTGGGAACTGAGAGGTGCCAGCAATTGCTGAAGGTGGCGATGAACACCCGAAGGTGGGAGGGAGGACTGGTACCCACAAAGCAACATGTACCGAGAGGACTAAATGTCATCTACGTGCATGTGAGAGCGTGTTAACCTAGAGTTACCTGCACCAACCCCAGACAGAAGCCAATCACATCTTTGGGGGAGGGGAGGGGCAGGAAGAGGTGAGAAGATCAGATGGTCCAAAGTGGACCACACTTGGTCCATTTTACACTTTTTTAAAGGGGATTAAAAAACACAGCCTCTCCCCCAAAGGGTGTCCGTTCTTAATTCCCACCTGGCCTGTTAGGAGCCTTGCTACCCTGAGGGGATGTGTTCACCTTACCTAGACCTAGTTAGGAAGTATCATTTTAAGCTATTAGAGTATTTATCTTCATGTGCAGGGATAAGTGCACTAACAGTGTGCTGCTCTGTCGGAAGTTCTTCAGTTTTTAAGTGAGGATATCGTGACAGTATTAAAACATCGCAATAATGTTCCTGTGTGTTATACATCGAGGGTTTTAGAAATGTGATTTTCTTCTTTTGACCTGTGAGGAGTATAACTTCTTTCAGCCCTCAGATTTTAAATACAAGCAAATAAACTCACTATTTTTAGACGTTTTTTTCCTCCAAGGTGGTTTTCTTCTCTTAAATAACTCGATCTGTACCCAGCTGGGTAGCAGCCAGCAAAGGCCATCAGACAACCAGAAGCACATCCATTTTTGTAGTGTCACAAACATGTATATGCCACACTTTGCACCTTAATGAAATACTTTGAAACAGAAGTTATTCACTGTGTTTTTGATGATCTATCTGTATTGGAAATATGTTCCTGGAAAATGCATTTAAATAATAGTAAATTCTCTTGCATGTTCCATTATACGTGTCTTCTAAGAGCTGTTCAATACAGTATTCACTCTAGAAACAATTATCTTTTTCTCTTAATGATTTTGTGTGCATCTTTAATCTTTCAAGCCAAATTACAGCTATTTCAGGTTTCCTGTGTTAGCTTGGGGATAGGATGGTGGCTGGAGACAGGCAGGCTTCTCTGCCCTGGGAAGAGCCCACTCAGCTTAATTGCTCTGCCATCGTAGAGCCTGGTTGGACTTGGCTTCCTGAAAACTCCCACTGATAGTGCCTGTTAGATCTCCTGTTTGTTTCAGTTGGCAGAACATTTACTGGCCCCAACTGTGGCATCATCCTCTCAGCAGTCTTCCTGTCACCCGCCTGGCAGGCAGAAGGAGCTGCAGTCCTACGTGGGCCTGCCTGGGGGGGTGGGGGCTGCATGGCTGTTGGGTGGCAGTGTCAGCACAGGGAGGGCTTAAGTTGGGGATGTTTGACCAGGCCACCTCCTGCAACTGCTGTTTCTCCTGTCCCTCCTATGCAGGGCTTGCAGCAGCAGCAGTGTGGCCATCTCCATCCCCCAAAGCACACTTGCTCTCTCAATATGTCCTAGTTTTCTTCAGCCTTTTCTGGTTCAGTTCCCTTGTCCTGATCTCATCCTCTCTGGTCTCCCAATAACTCACCCTTGGGATGTGTTTAGAGCGTGGGAGGTGCCTTTGAGAACTGCTTGACTCCATGATCTCCTAGAACAAAACCGCCCTGACTTTACAGGGGGAACACTCATGCTGAGCTGAGAAAGCAGAGAAGTGGCGTGGGAGCCAGCTGGGGGTGAAGAGCATTTGGGCCAGTCCCGTGGCCCCCTTCAGATTCCTCAAGCAGGATTGTTCTGTTCTAAAAAGCTGTTGCACAGCATTCGCAATGAGATCTTTAGTTGGCGGATTTTCTGGAACATTTGTTTTTCAACTTGTCCCGACATTTTTTTTCTGTTTCTATTCTGAGAGAGAGATGATCAAGTTTTAATTTGGGTATAGGTTAAATGGAAGAAGAAACAGAACTTCATGGCCAAAGTAGACCTATAGATTTTGATTGGGTTCTTTGTTAACAGTAGAATGCGATCTTTGCCACTGACTGTAGTATTAATAAGGTTTTAATGTGAGATATTCCTGCAAACCATCCCATTTCTACTGATTGTAAGTCAGAATTTCTTTTATCCCTTTCAAATCAGTTTCTACATGTTTAAGTGTTCAGGGCTTCATCAGCATGAGAAGTTTGTAATTACTGAAAGTCTGATTTCATTCAGGACACATTTTTTCCTTCATATTTTTTCTGTGAATTTATAGGCTAGGAAGGCTATTGAAGCCTCAATTATGGGTCTTCATTTTGAGATCGTTTTCTATGAGCTGAACTGAGGATATCAATGGTTATCTCAAAATCGTCTTTTAGGAGATCCCCAATTGACTCAGAGTTTGAGGAGTTAGTATCACAGAATTAGATTTTTTTAAAGCATTTGTACGTTTCCATTCCCAAATATGTAGCTGTGGTTCTTGAAAACACATCCTACATTGCATATGGGCATAGCAGTTTTTGACCCAGGCAGAATAAGTTAATATTTAATTAAATATTGCTTTGAAGATGGCGCTCTGGGCATGAGCATGGGGCTCCATGACTTCCCTTCTATCCCCATGAGCCCCTCCTCCATCCAGCGACAAGCCATGGGCATGCATACAATGCAGCAAGACCAACACAAGAGCAATATTGAATTGTTCATTCTATCTAAAATTACATGTATATAAAATATATAATTTATCTTCCTGCATTTTTGAAGTATAAAGTCATAAATTGTACATATCTGTAAGCTAGTATATTTGTTTCACTGTTTGTAATATTTAAGAAATGCTCATTCTTTGTAGAACAAAAATGTATTAAATATTTTAAAAATTGCTCTGTGATACTTAATTTTTTTCCCCAAAATTTGTAATGTGTTGCTTCTACATAAGTTCTCTGGAAATATCTACAACTAATAGGACACATGTAAATCCTTGAAGACACATCCTGGAATTCATACCCCACAAGGACAGTGTGTATACAAAGTATTTGCAGAGCATGACTTTTATATGTGTGGGATATCAATGTGTATATTTATATTTAAAGTGTATTTATTGTTACAAGTCTATTCTCTATTATATTTTATTTACTCTGCGGTTATAAAAATCACCCTTGCATACAAGTTTCTAGTTGCCAGTGATGTTCTGGAAATAATGGGAGATATTACAATAAAGCTACAGTTATGACACCCTG
Primers used:
Forward primer sequence: CTGGTGTTGAGGTTTGTGAAAGG
Reverse primer sequence: CCGTCGTGTCGGTGATCTG
Amplicon length: 124
Amplicon sequence:
CTGGTGTTGAGGTTTGTGAAAGGCACATTCCGGGAGAGCTACATCCCGACGGTGGAAGACACCTACCGGCAAGTGATCAGCTGTGACAAGAGCATATGCACATTGCAGATCACCGACACGACGG

4.RAB13, member RAS oncogene family（RAB13）
Accession number: NM_002870
Sequence:
CTGGGCTCCGTGCCGCTCTGTTTGCCAACCGTCCAGTCCCGCCTACCAGTGCCGGGCGCTCCCCACCCCTCCCCCGGCTCCCCCGGTGTCCGCCATGGCCAAAGCCTACGACCACCTCTTCAAGTTGCTGCTGATCGGGGACTCGGGGGTGGGCAAGACTTGTCTGATCATTCGCTTTGCAGAGGACAACTTCAACAACACTTACATCTCCACCATCGGAATTGATTTCAAGATCCGCACTGTGGATATAGAGGGGAAGAAGATCAAACTACAAGTCTGGGACACGGCTGGCCAAGAGCGGTTCAAGACAATAACTACTGCCTACTACCGTGGAGCCATGGGCATTATCCTAGTATACGACATCACGGATGAGAAATCTTTCGAGAATATTCAGAACTGGATGAAAAGCATCAAGGAGAATGCCTCGGCTGGGGTGGAGCGCCTCTTGCTGGGGAACAAATGTGACATGGAGGCCAAGAGGAAGGTGCAGAAGGAGCAGGCCGATAAGTTGGCTCGAGAGCATGGAATCCGATTTTTCGAAACTAGTGCTAAATCCAGTATGAATGTGGATGAGGCTTTTAGTTCCCTGGCCCGGGACATCTTGCTCAAGTCAGGAGGCCGGAGATCAGGAAACGGCAACAAGCCTCCCAGTACTGACCTGAAAACTTGTGACAAGAAGAACACCAACAAGTGCTCCCTGGGCTGAGGACCCTTTCTTGCCTCCCCACCCCGGAAGCTGAACCTGAGGGAGACAACGGCAGAGGGAGTGAGCAGGGGAGAAATAGCAGAGGGGCTTGGAGGGTCACATAGGTAGATGGTAAAGAGAATGAGGAGAAAAAGGAGAAAAGGGAAAAGCAGAAAGGAAAAAAAGGAAGAGAGAGGAAGGGAGAAGGGAGAGGAATGAATTGAGGAAGTGAAAGAAGGCAAGGAGGTAGGAAGAGAGGGAGGAGGAAAGGAAGGAGAGATGCCTCAGGCTTCAGACCTTACCTGGGTTTTCAGGGCAAACATAAATGTAAATACACTGATTTATTCTGTTACTAGATCAGGTTTTAGGGTCCTGCAAAAGGCTAGCTCGGCACTACACTAGGGAATTTGCTCCTGTTCTGTCACTTGTCATGGTCTTTCTTGGTATTAAAGGCCACCATTTGCACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: ATAACTACTGCCTACTACCGTGG
Reverse primer sequence: CCATGTCACATTTGTTCCCCAG
Amplicon length: 160
Amplicon sequence:
ATAACTACTGCCTACTACCGTGGAGCCATGGGCATTATCCTAGTATACGACATCACGGATGAGAAATCTTTCGAGAATATTCAGAACTGGATGAAAAGCATCAAGGAGAATGCCTCGGCTGGGGTGGAGCGCCTCTTGCTGGGGAACAAATGTGACATGG
5.Insulin-like growth factor binding protein 7（IGFBP7）
Accession number: NM_001553
Sequence:
GCCGCTGCCACCGCACCCCGCCATGGAGCGGCCGTCGCTGCGCGCCCTGCTCCTCGGCGCCGCTGGGCTGCTGCTCCTGCTCCTGCCCCTCTCCTCTTCCTCCTCTTCGGACACCTGCGGCCCCTGCGAGCCGGCCTCCTGCCCGCCCCTGCCCCCGCTGGGCTGCCTGCTGGGCGAGACCCGCGACGCGTGCGGCTGCTGCCCTATGTGCGCCCGCGGCGAGGGCGAGCCGTGCGGGGGTGGCGGCGCCGGCAGGGGGTACTGCGCGCCGGGCATGGAGTGCGTGAAGAGCCGCAAGAGGCGGAAGGGTAAAGCCGGGGCAGCAGCCGGCGGTCCGGGTGTAAGCGGCGTGTGCGTGTGCAAGAGCCGCTACCCGGTGTGCGGCAGCGACGGCACCACCTACCCGAGCGGCTGCCAGCTGCGCGCCGCCAGCCAGAGGGCCGAGAGCCGCGGGGAGAAGGCCATCACCCAGGTCAGCAAGGGCACCTGCGAGCAAGGTCCTTCCATAGTGACGCCCCCCAAGGACATCTGGAATGTCACTGGTGCCCAGGTGTACTTGAGCTGTGAGGTCATCGGAATCCCGACACCTGTCCTCATCTGGAACAAGGTAAAAAGGGGTCACTATGGAGTTCAAAGGACAGAACTCCTGCCTGGTGACCGGGACAACCTGGCCATTCAGACCCGGGGTGGCCCAGAAAAGCATGAAGTAACTGGCTGGGTGCTGGTATCTCCTCTAAGTAAGGAAGATGCTGGAGAATATGAGTGCCATGCATCCAATTCCCAAGGACAGGCTTCAGCATCAGCAAAAATTACAGTGGTTGATGCCTTACATGAAATACCAGTGAAAAAAGGTGAAGGTGCCGAGCTATAAACCTCCAGAATATTATTAGTCTGCATGGTTAAAAGTAGTCATGGATAACTACATTACCTGTTCTTGCCTAATAAGTTTCTTTTAATCCAATCCACTAACACTTTAGTTATATTCACTGGTTTTACACAGAGAAATACAAAATAAAGATCACACATCAAGACTATCTACAAAAATTTATTATATATTTACAGAAGAAAAGCATGCATATCATTAAACAAATAAAATACTTTTTATCACAAAAAAAAAAAAAAAA
Primers used:
Forward primer sequence: GGTCCTTCCATAGTGACGCC
Reverse primer sequence: TCTGAATGGCCAGGTTGTCC
Amplicon length: 184
Amplicon sequence:
GGTCCTTCCATAGTGACGCCCCCCAAGGACATCTGGAATGTCACTGGTGCCCAGGTGTACTTGAGCTGTGAGGTCATCGGAATCCCGACACCTGTCCTCATCTGGAACAAGGTAAAAAGGGGTCACTATGGAGTTCAAAGGACAGAACTCCTGCCTGGTGACCGGGACAACCTGGCCATTCAGA

6.Collagen, type VI, alpha 1 （COL6A1）
Accession number: NM_001848
Sequence:
GCTCTCACTCTGGCTGGGAGCAGAAGGCAGCCTCGGTCTCTGGGCGGCGGCGGCGGCCCACTCTGCCCTGGCCGCGCTGTGTGGTGACCGCAGGCCCCAGACATGAGGGCGGCCCGTGCTCTGCTGCCCCTGCTGCTGCAGGCCTGCTGGACAGCCGCGCAGGATGAGCCGGAGACCCCGAGGGCCGTGGCCTTCCAGGACTGCCCCGTGGACCTGTTCTTTGTGCTGGACACCTCTGAGAGCGTGGCCCTGAGGCTGAAGCCCTACGGGGCCCTCGTGGACAAAGTCAAGTCCTTCACCAAGCGCTTCATCGACAACCTGAGGGACAGGTACTACCGCTGTGACCGAAACCTGGTGTGGAACGCAGGCGCGCTGCACTACAGTGACGAGGTGGAGATCATCCAAGGCCTCACGCGCATGCCTGGCGGCCGCGACGCACTCAAAAGCAGCGTGGACGCGGTCAAGTACTTTGGGAAGGGCACCTACACCGACTGCGCTATCAAGAAGGGGCTGGAGCAGCTCCTCGTGGGGGGCTCCCACCTGAAGGAGAATAAGTACCTGATTGTGGTGACCGACGGGCACCCCCTGGAGGGCTACAAGGAACCCTGTGGGGGGCTGGAGGATGCTGTGAACGAGGCCAAGCACCTGGGCGTCAAAGTCTTCTCGGTGGCCATCACACCCGACCACCTGGAGCCGCGTCTGAGCATCATCGCCACGGACCACACGTACCGGCGCAACTTCACGGCGGCTGACTGGGGCCAGAGCCGCGACGCAGAGGAGGCCATCAGCCAGACCATCGACACCATCGTGGACATGATCAAAAATAACGTGGAGCAAGTGTGCTGCTCCTTCGAATGCCAGCCTGCAAGAGGACCTCCGGGGCTCCGGGGCGACCCCGGCTTTGAGGGAGAACGAGGCAAGCCGGGGCTCCCAGGAGAGAAGGGAGAAGCCGGAGATCCTGGAAGACCCGGGGACCTCGGACCTGTTGGGTACCAGGGAATGAAGGGAGAAAAAGGGAGCCGTGGGGAGAAGGGCTCCAGGGGACCCAAGGGCTACAAGGGAGAGAAGGGCAAGCGTGGCATCGACGGGGTGGACGGCGTGAAGGGGGAGATGGGGTACCCAGGCCTGCCAGGCTGCAAGGGCTCGCCCGGGTTTGACGGCATTCAAGGACCCCCTGGCCCCAAGGGAGACCCCGGTGCCTTTGGACTGAAAGGAGAAAAGGGCGAGCCTGGAGCTGACGGGGAGGCGGGGAGACCAGGGAGCTCGGGACCATCTGGAGACGAGGGCCAGCCGGGAGAGCCTGGGCCCCCCGGAGAGAAAGGAGAGGCGGGCGACGAGGGGAACCCAGGACCTGACGGTGCCCCCGGGGAGCGGGGTGGCCCTGGAGAGAGAGGACCACGGGGGACCCCAGGCACGCGGGGACCAAGAGGAGACCCTGGTGAAGCTGGCCCGCAGGGTGATCAGGGAAGAGAAGGCCCCGTTGGTGTCCCTGGAGACCCGGGCGAGGCTGGCCCTATCGGACCTAAAGGCTACCGAGGCGATGAGGGTCCCCCAGGGTCCGAGGGTGCCAGAGGAGCCCCAGGACCTGCCGGACCCCCTGGAGACCCGGGGCTGATGGGTGAAAGGGGAGAAGACGGCCCCGCTGGAAATGGCACCGAGGGCTTCCCCGGCTTCCCCGGGTATCCGGGCAACAGGGGCGCTCCCGGGATAAACGGCACGAAGGGCTACCCCGGCCTCAAGGGGGACGAGGGAGAAGCCGGGGACCCCGGAGACGATAACAACGACATTGCACCCCGAGGAGTCAAAGGAGCAAAGGGGTACCGGGGTCCCGAGGGCCCCCAGGGACCCCCAGGACACCAAGGACCGCCTGGGCCGGACGAATGCGAGATTTTGGACATCATCATGAAAATGTGCTCTTGCTGTGAATGCAAGTGCGGCCCCATCGACCTCCTGTTCGTGCTGGACAGCTCAGAGAGCATTGGCCTGCAGAACTTCGAGATTGCCAAGGACTTCGTCGTCAAGGTCATCGACCGGCTGAGCCGGGACGAGCTGGTCAAGTTCGAGCCAGGGCAGTCGTACGCGGGTGTGGTGCAGTACAGCCACAGCCAGATGCAGGAGCACGTGAGCCTGCGCAGCCCCAGCATCCGGAACGTGCAGGAGCTCAAGGAAGCCATCAAGAGCCTGCAGTGGATGGCGGGCGGCACCTTCACGGGGGAGGCCCTGCAGTACACGCGGGACCAGCTGCTGCCGCCCAGCCCGAACAACCGCATCGCCCTGGTCATCACTGACGGGCGCTCAGACACTCAGAGGGACACCACACCGCTCAACGTGCTCTGCAGCCCCGGCATCCAGGTGGTCTCCGTGGGCATCAAAGACGTGTTTGACTTCATCCCAGGCTCAGACCAGCTCAATGTCATTTCTTGCCAAGGCCTGGCACCATCCCAGGGCCGGCCCGGCCTCTCGCTGGTCAAGGAGAACTATGCAGAGCTGCTGGAGGATGCCTTCCTGAAGAATGTCACCGCCCAGATCTGCATAGACAAGAAGTGTCCAGATTACACCTGCCCCATCACGTTCTCCTCCCCGGCTGACATCACCATCCTGCTGGACGGCTCCGCCAGCGTGGGCAGCCACAACTTTGACACCACCAAGCGCTTCGCCAAGCGCCTGGCCGAGCGCTTCCTCACAGCGGGCAGGACGGACCCCGCCCACGACGTGCGGGTGGCGGTGGTGCAGTACAGCGGCACGGGCCAGCAGCGCCCAGAGCGGGCGTCGCTGCAGTTCCTGCAGAACTACACGGCCCTGGCCAGTGCCGTCGATGCCATGGACTTTATCAACGACGCCACCGACGTCAACGATGCCCTGGGCTATGTGACCCGCTTCTACCGCGAGGCCTCGTCCGGCGCTGCCAAGAAGAGGCTGCTGCTCTTCTCAGATGGCAACTCGCAGGGCGCCACGCCCGCTGCCATCGAGAAGGCCGTGCAGGAAGCCCAGCGGGCAGGCATCGAGATCTTCGTGGTGGTCGTGGGCCGCCAGGTGAATGAGCCCCACATCCGCGTCCTGGTCACCGGCAAGACGGCCGAGTACGACGTGGCCTACGGCGAGAGCCACCTGTTCCGTGTCCCCAGCTACCAGGCCCTGCTCCGCGGTGTCTTCCACCAGACAGTCTCCAGGAAGGTGGCGCTGGGCTAGCCCACCCTGCACGCCGGCACCAAACCCTGTCCTCCCACCCCTCCCCACTCATCACTAAACAGAGTAAAATGTGATGCGAATTTTCCCGACCAACCTGATTCGCTAGATTTTTTTTAAGGAAAAGCTTGGAAAGCCAGGACACAACGCTGCTGCCTGCTTTGTGCAGGGTCCTCCGGGGCTCAGCCCTGAGTTGGCATCACCTGCGCAGGGCCCTCTGGGGCTCAGCCCTGAGCTAGTGTCACCTGCACAGGGCCCTCTGAGGCTCAGCCCTGAGCTGGCGTCACCTGTGCAGGGCCCTCTGGGGCTCAGCCCTGAGCTGGCCTCACCTGGGTTCCCCACCCCGGGCTCTCCTGCCCTGCCCTCCTGCCCGCCCTCCCTCCTGCCTGCGCAGCTCCTTCCCTAGGCACCTCTGTGCTGCATCCCACCAGCCTGAGCAAGACGCCCTCTCGGGGCCTGTGCCGCACTAGCCTCCCTCTCCTCTGTCCCCATAGCTGGTTTTTCCCACCAATCCTCACCTAACAGTTACTTTACAATTAAACTCAAAGCAAGCTCTTCTCCTCAGCTTGGGGCAGCCATTGGCCTCTGTCTCGTTTTGGGAAACCAAGGTCAGGAGGCCGTTGCAGACATAAATCTCGGCGACTCGGCCCCGTCTCCTGAGGGTCCTGCTGGTGACCGGCCTGGACCTTGGCCCTACAGCCCTGGAGGCCGCTGCTGACCAGCACTGACCCCGACCTCAGAGAGTACTCGCAGGGGCGCTGGCTGCACTCAAGACCCTCGAGATTAACGGTGCTAACCCCGTCTGCTCCTCCCTCCCGCAGAGACTGGGGCCTGGACTGGACATGAGAGCCCCTTGGTGCCACAGAGGGCTGTGTCTTACTAGAAACAACGCAAACCTCTCCTTCCTCAGAATAGTGATGTGTTCGACGTTTTATCAAAGGCCCCCTTTCTATGTTCATGTTAGTTTTGCTCCTTCTGTGTTTTTTTCTGAACCATATCCATGTTGCTGACTTTTCCAAATAAAGGTTTTCACTCCTCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: ACAGTGACGAGGTGGAGATCA
Reverse primer sequence: GATAGCGCAGTCGGTGTAGG
Amplicon length:122
Amplicon sequence:
ACAGTGACGAGGTGGAGATCATCCAAGGCCTCACGCGCATGCCTGGCGGCCGCGACGCACTCAAAAGCAGCGTGGACGCGGTCAAGTACTTTGGGAAGGGCACCTACACCGACTGCGCTATC

7.Decorin（DCN）
Accession number: NM_001920
Sequence:
>gi|47419925|ref|NM_001920.3| Homo sapiens decorin（DCN）, transcript variant A1,mRNA
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Primers used:
Forward primer sequence: AGTTGGAACGACTTTATCTGTCC
Reverse primer sequence: GTGCCCAGTTCTATGACAATCA
Amplicon length:160
Amplicon sequence:
AGTTGGAACGACTTTATCTGTCCAAGAATCAGCTGAAGGAATTGCCAGAAAAAATGCCCAAAACTCTTCAGGAGCTGCGTGCCCATGAGAATGAGATCACCAAAGTGCGAAAAGTTACTTTCAATGGACTGAACCAGATGATTGTCATAGAACTGGGCAC
8.Plasminogen activator, tissue（PLAT）
Accession number: NM_000930
Sequence:
ATGGCCCTGTCCACTGAGCATCCTCCCGCCACACAGAAACCCGCCCAGCCGGGGCCACCGACCCCACCCCCTGCCTGGAAACTTAAAGGAGGCCGGAGCTGTGGGGAGCTCAGAGCTGAGATCCTACAGGAGTCCAGGGCTGGAGAGAAAACCTCTGCGAGGAAAGGGAAGGAGCAAGCCGTGAATTTAAGGGACGCTGTGAAGCAATCATGGATGCAATGAAGAGAGGGCTCTGCTGTGTGCTGCTGCTGTGTGGAGCAGTCTTCGTTTCGCCCAGCCAGGAAATCCATGCCCGATTCAGAAGAGGAGCCAGATCTTACCAAGTGATCTGCAGAGATGAAAAAACGCAGATGATATACCAGCAACATCAGTCATGGCTGCGCCCTGTGCTCAGAAGCAACCGGGTGGAATATTGCTGGTGCAACAGTGGCAGGGCACAGTGCCACTCAGTGCCTGTCAAAAGTTGCAGCGAGCCAAGGTGTTTCAACGGGGGCACCTGCCAGCAGGCCCTGTACTTCTCAGATTTCGTGTGCCAGTGCCCCGAAGGATTTGCTGGGAAGTGCTGTGAAATAGATACCAGGGCCACGTGCTACGAGGACCAGGGCATCAGCTACAGGGGCACGTGGAGCACAGCGGAGAGTGGCGCCGAGTGCACCAACTGGAACAGCAGCGCGTTGGCCCAGAAGCCCTACAGCGGGCGGAGGCCAGACGCCATCAGGCTGGGCCTGGGGAACCACAACTACTGCAGAAACCCAGATCGAGACTCAAAGCCCTGGTGCTACGTCTTTAAGGCGGGGAAGTACAGCTCAGAGTTCTGCAGCACCCCTGCCTGCTCTGAGGGAAACAGTGACTGCTACTTTGGGAATGGGTCAGCCTACCGTGGCACGCACAGCCTCACCGAGTCGGGTGCCTCCTGCCTCCCGTGGAATTCCATGATCCTGATAGGCAAGGTTTACACAGCACAGAACCCCAGTGCCCAGGCACTGGGCCTGGGCAAACATAATTACTGCCGGAATCCTGATGGGGATGCCAAGCCCTGGTGCCACGTGCTGAAGAACCGCAGGCTGACGTGGGAGTACTGTGATGTGCCCTCCTGCTCCACCTGCGGCCTGAGACAGTACAGCCAGCCTCAGTTTCGCATCAAAGGAGGGCTCTTCGCCGACATCGCCTCCCACCCCTGGCAGGCTGCCATCTTTGCCAAGCACAGGAGGTCGCCCGGAGAGCGGTTCCTGTGCGGGGGCATACTCATCAGCTCCTGCTGGATTCTCTCTGCCGCCCACTGCTTCCAGGAGAGGTTTCCGCCCCACCACCTGACGGTGATCTTGGGCAGAACATACCGGGTGGTCCCTGGCGAGGAGGAGCAGAAATTTGAAGTCGAAAAATACATTGTCCATAAGGAATTCGATGATGACACTTACGACAATGACATTGCGCTGCTGCAGCTGAAATCGGATTCGTCCCGCTGTGCCCAGGAGAGCAGCGTGGTCCGCACTGTGTGCCTTCCCCCGGCGGACCTGCAGCTGCCGGACTGGACGGAGTGTGAGCTCTCCGGCTACGGCAAGCATGAGGCCTTGTCTCCTTTCTATTCGGAGCGGCTGAAGGAGGCTCATGTCAGACTGTACCCATCCAGCCGCTGCACATCACAACATTTACTTAACAGAACAGTCACCGACAACATGCTGTGTGCTGGAGACACTCGGAGCGGCGGGCCCCAGGCAAACTTGCACGACGCCTGCCAGGGCGATTCGGGAGGCCCCCTGGTGTGTCTGAACGATGGCCGCATGACTTTGGTGGGCATCATCAGCTGGGGCCTGGGCTGTGGACAGAAGGATGTCCCGGGTGTGTACACCAAGGTTACCAACTACCTAGACTGGATTCGTGACAACATGCGACCGTGACCAGGAACACCCGACTCCTCAAAAGCAAATGAGATCCCGCCTCTTCTTCTTCAGAAGACACTGCAAAGGCGCAGTGCTTCTCTACAGACTTCTCCAGACCCACCACACCGCAGAAGCGGGACGAGACCCTACAGGAGAGGGAAGAGTGCATTTTCCCAGATACTTCCCATTTTGGAAGTTTTCAGGACTTGGTCTGATTTCAGGATACTCTGTCAGATGGGAAGACATGAATGCACACTAGCCTCTCCAGGAATGCCTCCTCCCTGGGCAGAAAGTGGCCATGCCACCCTGTTTTCAGCTAAAGCCCAACCTCCTGACCTGTCACCGTGAGCAGCTTTGGAAACAGGACCACAAAAATGAAAGCATGTCTCAATAGTAAAAGATAACAAGATCTTTCAGGAAAGACGGATTGCATTAGAAATAGACAGTATATTTATAGTCACAAGAGCCCAGCAGGGCCTCAAAGTTGGGGCAGGCTGGCTGGCCCGTCATGTTCCTCAAAAGCACCCTTGACGTCAAGTCTCCTTCCCCTTTCCCCACTCCCTGGCTCTCAGAAGGTATTCCTTTTGTGTACAGTGTGTAAAGTGTAAATCCTTTTTCTTTATAAACTTTAGAGTAGCATGAGAGAATTGTATCATTTGAACAACTAGGCTTCAGCATATTTATAGCAATCCATGTTAGTTTTTACTTTCTGTTGCCACAACCCTGTTTTATACTGTACTTAATAAATTCAGATATATTTTTCACAGTTTTTCCAAAATCAGAGTGGAATGGTTTTGTTATAGATGCTGTATCCCACTCTTTATTCATGTTCACATTTTAAAATCATTTGGAATTCTGCTTCACTCGCTTAACATATACACAACACCTGTAACATACAAGGCAATGGGCTAGGTGCTCCAGACCGGGAAAAGGAGGGACAGGAATGCTTGGTCTGATGGGCTAATATGGCATTTAGAGAAGTACCAAGGTACAGTGGAGCCGGTCACAAAAGGGCAGACTTGTAGTAGAATTCAGTTGCAAGAGGGATTGGGGAATCTTAAGGAAAAAATAGAATCTTAAGGAAAAAATAACTGGGTGAGACGTGGACTGTGGACAGGTGTGGAAAAGGCACTCTCCATGGAGGTATGAATATGTAGAGGGCCAAGAGAGGGGAGTACAGGGAGAAATGAGTTGAGCTTGTCTGAAGTGAACTTCAGGAAGAGGAACATAGGCTGGAATTTAGATTATGGGGGCTCTGAACACCAAACTGAGTTTGGACTTAATTGACTTCTG

Primers used:
Forward primer sequence: ACTGCCGGAATCCTGATGG
Reverse primer sequence: TGTGCTTGGCAAAGATGGC
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Amplicon sequence:
ACTGCCGGAATCCTGATGGGGATGCCAAGCCCTGGTGCCACGTGCTGAAGAACCGCAGGCTGACGTGGGAGTACTGTGATGTGCCCTCCTGCTCCACCTGCGGCCTGAGACAGTACAGCCAGCCTCAGTTTCGCATCAAAGGAGGGCTCTTCGCCGACATCGCCTCCCACCCCTGGCAGGCTGCCATCTTTGCCAAGCACA

9.Lectin, galactoside-binding, soluble, 3（LGALS3）
Accession number: NM_002306.
Sequence:
GGAGAGGACTGGCTGGGCAGGGGCGCCGCCCCGCCTCGGGAGAGGCGGGCCGGGCGGGGCTGGGAGTATTTGAGGCTCGGAGCCACCGCCCCGCCGGCGCCCGCAGCACCTCCTCGCCAGCAGCCGTCCGGAGCCAGCCAACGAGCGGAAAATGGCAGACAATTTTTCGCTCCATGATGCGTTATCTGGGTCTGGAAACCCAAACCCTCAAGGATGGCCTGGCGCATGGGGGAACCAGCCTGCTGGGGCAGGGGGCTACCCAGGGGCTTCCTATCCTGGGGCCTACCCCGGGCAGGCACCCCCAGGGGCTTATCCTGGACAGGCACCTCCAGGCGCCTACCCTGGAGCACCTGGAGCTTATCCCGGAGCACCTGCACCTGGAGTCTACCCAGGGCCACCCAGCGGCCCTGGGGCCTACCCATCTTCTGGACAGCCAAGTGCCACCGGAGCCTACCCTGCCACTGGCCCCTATGGCGCCCCTGCTGGGCCACTGATTGTGCCTTATAACCTGCCTTTGCCTGGGGGAGTGGTGCCTCGCATGCTGATAACAATTCTGGGCACGGTGAAGCCCAATGCAAACAGAATTGCTTTAGATTTCCAAAGAGGGAATGATGTTGCCTTCCACTTTAACCCACGCTTCAATGAGAACAACAGGAGAGTCATTGTTTGCAATACAAAGCTGGATAATAACTGGGGAAGGGAAGAAAGACAGTCGGTTTTCCCATTTGAAAGTGGGAAACCATTCAAAATACAAGTACTGGTTGAACCTGACCACTTCAAGGTTGCAGTGAATGATGCTCACTTGTTGCAGTACAATCATCGGGTTAAAAAACTCAATGAAATCAGCAAACTGGGAATTTCTGGTGACATAGACCTCACCAGTGCTTCATATACCATGATATAATCTGAAAGGGGCAGATTAAAAAAAAAAAAAGAATCTAAACCTTACATGTGTAAAGGTTTCATGTTCACTGTGAGTGAAAATTTTTACATTCATCAATATCCCTCTTGTAAGTCATCTACTTAATAAATATTACAGTGAATTACCTG
TCTCAATATGTCAAAAAAAAAAAAAAAAAA
Primers used:
Forward primer sequence: TGCTGATAACAATTCTGGGCAC
Reverse primer sequence: TGAAGCGTGGGTTAAAGTGGA
Amplicon length:102
Amplicon sequence:
TGCTGATAACAATTCTGGGCACGGTGAAGCCCAATGCAAACAGAATTGCTTTAGATTTCCAAAGAGGGAATGATGTTGCCTTCCACTTTAACCCACGCTTCA

10.Fatty acid binding protein 7, brain（FABP7）
Accession number:. NM_001446.
Sequence:
GAGGATTGGGAGGAACTCGACCTACTCCGCTAACCCAGTGGCCTGAGCCAATCACAAAGAGGATTGGAGCCTCACTCGAGCGCTCCTTCCCTTCTCCTCTCTCTGTGACAGCCTCTTGGAAAGAGGGACACTGGAGGGGTGTGTTTGCAATTTAAATCACTGGATTTTTGCCCACCCTCTTTCCAAATAAGAAGGCAGGAGCTGCTTGCTGAGGTGTAAAGGGTCTTCTGAGCTGCAGTGGCAATTAGACCAGAAGATCCCCGCTCCTGTCTCTAAAGAGGGGAAAGGGCAAGGATGGTGGAGGCTTTCTGTGCTACCTGGAAGCTGACCAACAGTCAGAACTTTGATGAGTACATGAAGGCTCTAGGCGTGGGCTTTGCCACTAGGCAGGTGGGAAATGTGACCAAACCAACGGTAATTATCAGTCAAGAAGGAGACAAAGTGGTCATCAGGACTCTCAGCACATTCAAGAACACGGAGATTAGTTTCCAGCTGGGAGAAGAGTTTGATGAAACCACTGCAGATGATAGAAACTGTAAGTCTGTTGTTAGCCTGGATGGAGACAAACTTGTTCACATACAGAAATGGGATGGCAAAGAAACAAATTTTGTAAGAGAAATTAAGGATGGCAAAATGGTTATGACCCTTACTTTTGGTGATGTGGTTGCTGTTCGCCACTATGAGAAGGCATAAAAATGTTCCTGGTCGGGGCTTGGAAGAGCTCTTCAGTTTTTCTGTTTCCTCAAGTCTCAGTGCTATCCTATTACAACATGGCTGATCATTAATTAGAAGGTTATCCTTGGTGTGGAGGTGGAAAATGGTGATTTAAAAACTTGTTACTCCAAGCAACTTGCCCAATTTTAATCTGAAAATTTATCATGTTTTATAATTTGAATTAAAGTTTTGTCCCCCCCCCCCTTTTTTTTATAAACAAGTGAATACATTTTATAATTTCTTTTGGAATGTAAATCAAATTTGAATAAAAATCTTACACGTGAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: CTCTCAGCACATTCAAGAACACG
Reverse primer sequence: GCGAACAGCAACCACATCAC
Amplicon length:221
Amplicon sequence
CTCTCAGCACATTCAAGAACACGGAGATTAGTTTCCAGCTGGGAGAAGAGTTTGATGAAACCACTGCAGATGATAGAAACTGTAAGTCTGTTGTTAGCCTGGATGGAGACAAACTTGTTCACATACAGAAATGGGATGGCAAAGAAACAAATTTTGTAAGAGAAATTAAGGATGGCAAAATGGTTATGACCCTTACTTTTGGTGATGTGGTTGCTGTTCGC

11.Lysyl oxidase（LOX）
Accession number: NM_002317
Sequence:
ATTACGTGAACAAATAGCTGAGGGGCGGCCGGGCCAGAACGGCTTGTGTAACTTTGCAAACGTGCCAGAAAGTTTAAAATCTCTCCTCCTTCCTTCACTCCAGACACTGCCCGCTCTCCGGGACTGCCGCGCCGCTCCCCGTTGCCTTCCAGGACTGAGAAAGGGGAAAGGGAAGGGTGCCACGTCCGAGCAGCCGCCTTGACTGGGGAAGGGTCTGAATCCCACCCTTGGCATTGCTTGGTGGAGACTGAGATACCCGTGCTCCGCTCGCCTCCTTGGTTGAAGATTTCTCCTTCCCTCACGTGATTTGAGCCCCGTTTTTATTTTCTGTGAGCCACGTCCTCCTCGAGCGGGGTCAATCTGGCAAAAGGAGTGATGCGCTTCGCCTGGACCGTGCTCCTGCTCGGGCCTTTGCAGCTCTGCGCGCTAGTGCACTGCGCCCCTCCCGCCGCCGGCCAACAGCAGCCCCCGCGCGAGCCGCCGGCGGCTCCGGGCGCCTGGCGCCAGCAGATCCAATGGGAGAACAACGGGCAGGTGTTCAGCTTGCTGAGCCTGGGCTCACAGTACCAGCCTCAGCGCCGCCGGGACCCGGGCGCCGCCGTCCCTGGTGCAGCCAACGCCTCCGCCCAGCAGCCCCGCACTCCGATCCTGCTGATCCGCGACAACCGCACCGCCGCGGCGCGAACGCGGACGGCCGGCTCATCTGGAGTCACCGCTGGCCGCCCCAGGCCCACCGCCCGTCACTGGTTCCAAGCTGGCTACTCGACATCTAGAGCCCGCGAAGCTGGCGCCTCGCGCGCGGAGAACCAGACAGCGCCGGGAGAAGTTCCTGCGCTCAGTAACCTGCGGCCGCCCAGCCGCGTGGACGGCATGGTGGGCGACGACCCTTACAACCCCTACAAGTACTCTGACGACAACCCTTATTACAACTACTACGATACTTATGAAAGGCCCAGACCTGGGGGCAGGTACCGGCCCGGATACGGCACTGGCTACTTCCAGTACGGTCTCCCAGACCTGGTGGCCGACCCCTACTACATCCAGGCGTCCACGTACGTGCAGAAGATGTCCATGTACAACCTGAGATGCGCGGCGGAGGAAAACTGTCTGGCCAGTACAGCATACAGGGCAGATGTCAGAGATTATGATCACAGGGTGCTGCTCAGATTTCCCCAAAGAGTGAAAAACCAAGGGACATCAGATTTCTTACCCAGCCGACCAAGATATTCCTGGGAATGGCACAGTTGTCATCAACATTACCACAGTATGGATGAGTTTAGCCACTATGACCTGCTTGATGCCAACACCCAGAGGAGAGTGGCTGAAGGCCACAAAGCAAGTTTCTGTCTTGAAGACACATCCTGTGACTATGGCTACCACAGGCGATTTGCATGTACTGCACACACACAGGGATTGAGTCCTGGCTGTTATGATACCTATGGTGCAGACATAGACTGCCAGTGGATTGATATTACAGATGTAAAACCTGGAAACTATATCCTAAAGGTCAGTGTAAACCCCAGCTACCTGGTTCCTGAATCTGACTATACCAACAATGTTGTGCGCTGTGACATTCGCTACACAGGACATCATGCGTATGCCTCAGGCTGCACAATTTCACCGTATTAGAAGGCAAAGCAAAACTCCCAATGGATAAATCAGTGCCTGGTGTTCTGAAGTGGGAAAAAATAGACTAACTTCAGTAGGATTTATGTATTTTGAAAAAGAGAACAGAAAACAACAAAAGAATTTTTGTTTGGACTGTTTTCAATAACAAAGCACATAACTGGATTTTGAACGCTTAAGTCATCATTACTTGGGAAATTTTTAATGTTTATTATTTACATCACTTTGTGAATTAACACAGTGTTTCAATTCTGTAATTACATATTTGACTCTTTCAAAGAAATCCAAATTTCTCATGTTCCTTTTGAAATTGTAGTGCAAAATGGTCAGTATTATCTAAATGAATGAGCCAAAATGACTTTGAACTGAAACTTTTCTAAAGTGCTGGAACTTTAGTGAAACATAATAATAATGGGTTTATATATGTCATAGCATAGATGAATTTAGAAACAATGCTCCTACTGTTTAAATACATATGGACACATCTGGTGCTGAGAAAGAAACAAACACATTACCATTGGTGTCAAGAAATATTACTATATAGCAGAGAAATGGCAATACATGTACTCAGATAGTTACATCCCTATATAAAAAGTATGTTTACATTTAAAAAATTAGTAGATAACTTCCTTTCTTTCAAGTGCACAATTTCATTTTGACTTGAGTCAACTTTTGTTTTGGAACAAATTAAGTAAGGGAGCTGCCCAATCCTGTCTGATATTTCTTGAGGCTGCCCTCTATCATTTTATCTTTCCCATGGGCAGAGATGTTGTAAGTGGGATTCTTAATATCACCATTCTTGGGACTGGTATACATAAGGCAGCCGTGAAACTGGAAAGTCATTTTGATGACTGATGTGATACATCCAGAGGTAAAATGCATTTAAACATATTAAAGTATTTGCCAAAGATACAATTTTCTTGCTGACATAAAAATCACACAAACAAGTCCCCCCCAAACCACAACTGTCTCTCAAATAGCTTAAAAAAATTGAAAAACATTTTAGGATTTTTCAAGTTTTCTAGATTTTAAAAAGATGTTCAGCTATTAGAGGAATGTTAAAAATTTTATATTATCTAGAACACAGGAACATCATCCTGGGTTATTCAGGAATCAGTCACACATGTGTGTGTGTCTGAGATATAGTCTAAATTAGCAAAGCACATAGTATTACATACTTGAGGGGTTGGTGAACAAAGGAAAAATATACTTTCTGCAAAACCAAGGACTGTGCTGCGTAATGAGACAGCTGTGATTTCATTTGAAACTGTGAAACCATGTGCCATAATAGAATTTTGAGAATTTTGCTTTTACCTAAATTCAAGAAAATGAAATTACACTTTTAAGTTAGTGGTGCTTAAGCATAATTTTTCCTATATTAACCAGTATTAAAATCTCAAGTAAGATTTTCCAGTGCCAGAACATGTTAGGTGGAATTTTAAAAGTGCCTCGGCATCCTGTATTACATGTCATAGAATTGTAAAGTCAACATCAATTACTAGTAATCATTCTGCACTCACTGGGTGCATAGCATGGTTAGAGGGGCTAGAGATGGACAGTCATCAACTGGCGGATATAGCGGTACATATGATCCTTAGCCACCAGGGCACAAGCTTACCAGTAGACAATACAGACAGAGCTTTTGTTGAGCTGTAACTGAGCTATGGAATAGCTTCTTTGATGTACCTCTTTGCCTTAAATTGCTTTTTAGTTCTAAGATTGTAGAATGATCCTTTCAAATTGTAATCTTTTCTAACAGAGATATTTTAATATACTTGCTTTCTTAAAAAACAAAAAAACTACTGTCAGTATTAATACTGAGCCAGACTGGCATCTACAGATTTCAGATCTATCATTTTATTGATTCTTAAGCTTGTATTAAAAACTAGGCAATATCATCATGGATACATAGGAGAAGACACATTTACAATCATTCATTGGGCCTTTTATCTGTCTATCCATCCATCATCATTTGAAGGCCTAATATATGCCAAGTACTCACATGGTATGCATTGAGACATAAAAAAGACTGTCTATAACCTCAATAAGTATTAAAAATCCCATTATTACCCATAAGGTTCATCTTATTTCATTTTTAGGGAATAAAATTACATGTCTATGAAATTTCAATTTTAAGCACTATTGTTTTTCATGACCATAATTTATTTTTAAAAATAAATTAAAGGTTAATTATATGCATGTATGTATTTCTAATAATTAAAAATGTGTTCAATCCCTGAAATGTCTGCCTTTTAAATATAACACCTACTATTTGGTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: CAGGGTGCTGCTCAGATTTCC
Reverse primer sequence: GGTAATGTTGATGACAACTGTGC
Amplicon length:110
Amplicon sequence:
CAGGGTGCTGCTCAGATTTCCCCAAAGAGTGAAAAACCAAGGGACATCAGATTTCTTACCCAGCCGACCAAGATATTCCTGGGAATGGCACAGTTGTCATCAACATTACC

12.Laminin, beta 1（LAMB1）
Accession number: NM_002291
Sequence:
GGGACCTGGAAGCGCCCCAGCCCCGCAGCGATCGCAGATTCGGCTTTCAAACAAAAGAGGCGCCCCGGGGGGTGGGACCGGGACCTCACCCGGTCCTCGCAGAGTTGCGGCCGCCCGCCCCTTCAGCCCCGGCTCTCCGTATGCGCATGAGCAGAGGCGCCTCCCTCTGTTCCTCCCAAGGCTAAACTTTCTAATTCCCTTCTTTGGGCTCGGGGGCTCCCGGAGCAGGGCGAGAGCTCGCGTCGCCGGAAAGGAAGACGGGAAGAAAGGGCAGGCGGCTCGGCGGGCGTCTTCTCCACTCCTCTGCCGCGTCCCCGTGGCTGCAGGGAGCCGGCATGGGGCTTCTCCAGTTGCTAGCTTTCAGTTTCTTAGCCCTGTGCAGAGCCCGAGTGCGCGCTCAGGAACCCGAGTTCAGCTACGGCTGCGCAGAAGGCAGCTGCTATCCCGCCACGGGCGACCTTCTCATCGGCCGAGCACAGAAGCTTTCGGTGACCTCGACGTGCGGGCTGCACAAGCCCGAACCCTACTGTATCGTCAGCCACTTGCAGGAGGACAAAAAATGCTTCATATGCAATTCCCAAGATCCTTATCATGAGACCCTGAATCCTGACAGCCATCTCATTGAAAATGTGGTCACTACATTTGCTCCAAACCGCCTTAAGATTTGGTGGCAATCTGAAAATGGTGTGGAAAATGTAACTATCCAACTGGATTTGGAAGCAGAATTCCATTTTACTCATCTCATAATGACTTTCAAGACATTCCGTCCAGCTGCTATGCTGATAGAACGATCGTCCGACTTTGGGAAAACCTGGGGTGTGTATAGATACTTCGCCTATGACTGTGAGGCCTCGTTTCCAGGCATTTCAACTGGCCCCATGAAAAAAGTCGATGACATAATTTGTGATTCTCGATATTCTGACATTGAACCCTCAACTGAAGGAGAGGTGATATTTCGTGCTTTAGATCCTGCTTTCAAAATAGAAGATCCTTATAGCCCAAGGATACAGAATTTATTAAAAATTACCAACTTGAGAATCAAGTTTGTGAAACTGCATACTTTGGGAGATAACCTTCTGGATTCCAGGATGGAAATCAGAGAAAAGTATTATTATGCAGTTTATGATATGGTGGTTCGAGGAAATTGCTTCTGCTATGGTCATGCCAGCGAATGTGCCCCTGTGGATGGATTCAATGAAGAAGTGGAAGGAATGGTTCACGGACACTGCATGTGCAGGCATAACACCAAGGGCTTAAACTGTGAACTCTGCATGGATTTCTACCATGATTTACCTTGGAGACCTGCTGAAGGCCGAAACAGCAACGCCTGTAAAAAATGTAACTGCAATGAACATTCCATCTCTTGTCACTTTGACATGGCTGTTTACCTGGCCACGGGGAACGTCAGCGGAGGCGTGTGTGATGACTGTCAGCACAACACCATGGGGCGCAACTGTGAGCAGTGCAAGCCGTTTTACTACCAGCACCCAGAGAGGGACATCCGAGATCCTAATTTCTGTGAACGATGTACGTGTGACCCAGCTGGCTCTCAAAATGAGGGAATTTGTGACAGCTATACTGATTTTTCTACTGGTCTCATTGCTGGCCAGTGTCGGTGTAAATTAAATGTGGAAGGAGAACATTGTGATGTTTGCAAAGAAGGCTTCTATGATTTAAGCAGTGAAGATCCATTTGGTTGTAAATCTTGTGCTTGCAATCCTCTGGGAACAATTCCTGGAGGGAATCCTTGTGATTCCGAGACAGGTCACTGCTACTGCAAGCGTCTGGTGACAGGACAGCATTGTGACCAGTGCCTGCCAGAGCACTGGGGCTTAAGCAATGATTTGGATGGATGTCGACCATGTGACTGTGACCTTGGGGGAGCCTTAAACAACAGTTGCTTTGCGGAGTCAGGCCAGTGCTCATGCCGGCCTCACATGATTGGACGTCAGTGCAACGAAGTGGAACCTGGTTACTACTTTGCCACCCTGGATCACTACCTCTATGAAGCGGAGGAAGCCAACTTGGGGCCTGGGGTTAGCATAGTGGAGCGGCAATATATCCAGGACCGGATTCCCTCCTGGACTGGAGCCGGCTTCGTCCGAGTGCCTGAAGGGGCTTATTTGGAGTTTTTCATTGACAACATACCATATTCCATGGAGTACGACATCCTAATTCGCTACGAGCCACAGCTACCCGACCACTGGGAAAAAGCTGTCATCACAGTGCAGCGACCTGGAAGGATTCCAACCAGCAGCCGATGTGGTAATACCATCCCCGATGATGACAACCAGGTGGTGTCATTATCACCAGGCTCAAGATATGTCGTCCTTCCTCGGCCGGTGTGCTTTGAGAAGGGAACAAACTACACGGTGAGGTTGGAGCTGCCTCAGTACACCTCCTCTGATAGCGACGTGGAGAGCCCCTACACGCTGATCGATTCTCTTGTTCTCATGCCATACTGTAAATCACTGGACATCTTCACCGTGGGAGGTTCAGGAGATGGGGTGGTCACCAACAGTGCCTGGGAAACCTTTCAGAGATACCGATGTCTAGAGAACAGCAGAAGCGTTGTGAAAACACCGATGACAGATGTTTGCAGAAACATCATCTTTAGCATTTCTGCCCTGTTACACCAGACAGGCCTGGCTTGTGAATGCGACCCTCAGGGTTCGTTAAGTTCCGTGTGTGATCCCAACGGAGGCCAGTGCCAGTGCCGGCCCAACGTGGTTGGAAGAACCTGCAACAGATGTGCACCTGGAACTTTTGGCTTTGGCCCCAGTGGATGCAAACCTTGTGAGTGCCATCTGCAAGGATCTGTCAATGCCTTCTGCAATCCCGTCACTGGCCAGTGCCACTGTTTCCAGGGAGTGTATGCTCGGCAGTGTGATCGGTGCTTACCTGGGCACTGGGGCTTTCCAAGTTGCCAGCCCTGCCAGTGCAATGGCCACGCCGATGACTGCGACCCAGTGACTGGGGAGTGCTTGAACTGCCAGGACTACACCATGGGTCATAACTGTGAAAGGTGCTTGGCTGGTTACTATGGCGACCCCATCATTGGGTCAGGAGATCACTGCCGCCCTTGCCCTTGCCCAGATGGTCCCGACAGTGGACGCCAGTTTGCCAGGAGCTGCTACCAAGATCCTGTTACTTTACAGCTTGCCTGTGTTTGTGATCCTGGATACATTGGTTCCAGATGTGACGACTGTGCCTCAGGATACTTTGGCAATCCATCAGAAGTTGGGGGGTCGTGTCAGCCTTGCCAGTGTCACAACAACATTGACACGACAGACCCAGAAGCCTGTGACAAGGAGACTGGGAGGTGTCTCAAGTGCCTGTACCACACGGAAGGGGAACACTGTCAGTTCTGCCGGTTTGGATACTATGGTGATGCCCTCCAGCAGGACTGTCGAAAGTGTGTCTGTAATTACCTGGGCACCGTGCAAGAGCACTGTAACGGCTCTGACTGCCAGTGCGACAAAGCCACTGGTCAGTGCTTGTGTCTTCCTAATGTGATCGGGCAGAACTGTGACCGCTGTGCGCCCAATACCTGGCAGCTGGCCAGTGGCACTGGCTGTGACCCATGCAACTGCAATGCTGCTCATTCCTTCGGGCCATCTTGCAATGAGTTCACGGGGCAGTGCCAGTGCATGCCTGGGTTTGGAGGCCGCACCTGCAGCGAGTGCCAGGAACTCTTCTGGGGAGACCCCGACGTGGAGTGCCGAGCCTGTGACTGTGACCCCAGGGGCATTGAGACGCCACAGTGTGACCAGTCCACGGGCCAGTGTGTCTGCGTTGAGGGTGTTGAGGGTCCACGCTGTGACAAGTGCACGCGAGGGTACTCGGGGGTCTTCCCTGACTGCACACCCTGCCACCAGTGCTTTGCTCTCTGGGATGTGATCATTGCCGAGCTGACCAACAGGACACACAGATTCCTGGAGAAAGCCAAGGCCTTGAAGATCAGTGGTGTGATCGGGCCTTACCGTGAGACTGTGGACTCGGTGGAGAGGAAAGTCAGCGAGATAAAAGACATCCTGGCGCAGAGCCCCGCAGCAGAGCCACTGAAAAACATTGGGAATCTCTTTGAGGAAGCAGAGAAACTGATTAAAGATGTTACAGAAATGATGGCTCAAGTAGAAGTGAAATTATCTGACACAACTTCCCAAAGCAACAGCACAGCCAAAGAACTGGATTCTCTACAGACAGAAGCCGAAAGCCTAGACAACACTGTGAAAGAACTTGCTGAACAACTGGAATTTATCAAAAACTCAGATATTCGGGGTGCCTTGGATAGCATTACCAAGTATTTCCAGATGTCTCTTGAGGCAGAGGAGAGGGTGAATGCCTCCACCACAGAACCCAACAGCACTGTGGAGCAGTCAGCCCTCATGAGAGACAGAGTAGAAGACGTGATGATGGAGCGAGAATCCCAGTTCAAGGAAAAACAAGAGGAGCAGGCTCGCCTCCTTGATGAACTGGCAGGCAAGCTACAAAGCCTAGACCTTTCAGCCGCTGCCGAAATGACCTGTGGAACACCCCCAGGGGCCTCCTGTTCCGAGACTGAATGTGGCGGGCCAAACTGCAGAACTGACGAAGGAGAGAGGAAGTGTGGGGGGCCTGGCTGTGGTGGTCTGGTTACTGTTGCACACAACGCCTGGCAGAAAGCCATGGACTTGGACCAAGATGTCCTGAGTGCCCTGGCTGAAGTGGAACAGCTCTCCAAGATGGTCTCTGAAGCAAAACTGAGGGCAGATGAGGCAAAACAAAGTGCTGAAGACATTCTGTTGAAGACAAATGCTACCAAAGAAAAAATGGACAAGAGCAATGAGGAGCTGAGAAATCTAATCAAGCAAATCAGAAACTTTTTGACCCAGGATAGTGCTGATTTGGACAGCATTGAAGCAGTTGCTAATGAAGTATTGAAAATGGAGATGCCTAGCACCCCACAGCAGTTACAGAACTTGACAGAAGATATACGTGAACGAGTTGAAAGCCTTTCT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Primers used:
Forward primer sequence: ACAAGCCCGAACCCTACTGTA
Reverse primer sequence: GACCACATTTTCAATGAGATGGC
Amplicon length:125
Amplicon sequence:
ACAAGCCCGAACCCTACTGTATCGTCAGCCACTTGCAGGAGGACAAAAAATGCTTCATATGCAATTCCCAAGATCCTTATCATGAGACCCTGAATCCTGACAGCCATCTCATTGAAAATG
TGGTC

13.Insulin-like growth factor binding protein 3（IGFBP3）
Accession number: NM_000598.
Sequence:
AGATGCGAGCACTGCGGCTGGGCGCTGAGGATCAGCCGCTTCCTGCCTGGATTCCACAGCTTCGCGCCGTGTACTGTCGCCCCATCCCTGCGCGCCCAGCCTGCCAAGCAGCGTGCCCCGGTTGCAGGCGTCATGCAGCGGGCGCGACCCACGCTCTGGGCCGCTGCGCTGACTCTGCTGGTGCTGCTCCGCGGGCCGCCGGTGGCGCGGGCTGGCGCGAGCTCGGCGGGCTTGGGTCCCGTGGTGCGCTGCGAGCCGTGCGACGCGCGTGCACTGGCCCAGTGCGCGCCTCCGCCCGCCGTGTGCGCGGAGCTGGTGCGCGAGCCGGGCTGCGGCTGCTGCCTGACGTGCGCACTGAGCGAGGGCCAGCCGTGCGGCATCTACACCGAGCGCTGTGGCTCCGGCCTTCGCTGCCAGCCGTCGCCCGACGAGGCGCGACCGCTGCAGGCGCTGCTGGACGGCCGCGGGCTCTGCGTCAACGCTAGTGCCGTCAGCCGCCTGCGCGCCTACCTGCTGCCAGCGCCGCCAGCTCCAGGAAATGCTAGTGAGTCGGAGGAAGACCGCAGCGCCGGCAGTGTGGAGAGCCCGTCCGTCTCCAGCACGCACCGGGTGTCTGATCCCAAGTTCCACCCCCTCCATTCAAAGATAATCATCATCAAGAAAGGGCATGCTAAAGACAGCCAGCGCTACAAAGTTGACTACGAGTCTCAGAGCACAGATACCCAGAACTTCTCCTCCGAGTCCAAGCGGGAGACAGAATATGGTCCCTGCCGTAGAGAAATGGAAGACACACTGAATCACCTGAAGTTCCTCAATGTGCTGAGTCCCAGGGGTGTACACATTCCCAACTGTGACAAGAAGGGATTTTATAAGAAAAAGCAGTGTCGCCCTTCCAAAGGCAGGAAGCGGGGCTTCTGCTGGTGTGTGGATAAGTATGGGCAGCCTCTCCCAGGCTACACCACCAAGGGGAAGGAGGACGTGCACTGCTACAGCATGCAGAGCAAGTAGACGCCTGCCGCAAGGTTAATGTGGAGCTCAAATATGCCTTATTTTGCACAAAAGACTGCCAAGGACATGACCAGCAGCTGGCTACAGCCTCGATTTATATTTCTGTTTGTGGTGAACTGATTTTTTTTAAACCAAAGTTTAGAAAGAGGTTTTTGAAATGCCTATGGTTTCTTTGAATGGTAAACTTGAGCATCTTTTCACTTTCCAGTAGTCAGCAAAGAGCAGTTTGAATTTTCTTGTCGCTTCCTATCAAAATATTCAGAGACTCGAGCACAGCACCCAGACTTCATGCGCCCGTGGAATGCTCACCACATGTTGGTCGAAGCGGCCGACCACTGACTTTGTGACTTAGGCGGCTGTGTTGCCTATGTAGAGAACACGCTTCACCCCCACTCCCCGTACAGTGCGCACAGGCTTTATCGAGAATAGGAAAACCTTTAAACCCCGGTCATCCGGACATCCCAACGCATGCTCCTGGAGCTCACAGCCTTCTGTGGTGTCATTTCTGAAACAAGGGCGTGGATCCCTCAACCAAGAAGAATGTTTATGTCTTCAAGTGACCTGTACTGCTTGGGGACTATTGGAGAAAATAAGGTGGAGTCCTACTTGTTTAAAAAATATGTATCTAAGAATGTTCTAGGGCACTCTGGGAACCTATAAAGGCAGGTATTTCGGGCCCTCCTCTTCAGGAATCTTCCTGAAGACATGGCCCAGTCGAAGGCCCAGGATGGCTTTTGCTGCGGCCCCGTGGGGTAGGAGGGACAGAGAGACAGGGAGAGTCAGCCTCCACATTCAGAGGCATCACAAGTAATGGCACAATTCTTCGGATGACTGCAGAAAATAGTGTTTTGTAGTTCAACAACTCAAGACGAAGCTTATTTCTGAGGATAAGCTCTTTAAAGGCAAAGCTTTATTTTCATCTCTCATCTTTTGTCCTCCTTAGCACAATGTAAAAAAGAATAGTAATATCAGAACAGGAAGGAGGAATGGCTTGCTGGGGAGCCCATCCAGGACACTGGGAGCACATAGAGATTCACCCATGTTTGTTGAACTTAGAGTCATTCTCATGCTTTTCTTTATAATTCACACATATATGCAGAGAAGATATGTTCTTGTTAACATTGTATACAACATAGCCCCAAATATAGTAAGATCTATACTAGATAATCCTAGATGAAATGTTAGAGATGCTATATGATACAACTGTGGCCATGACTGAGGAAAGGAGCTCACGCCCAGAGACTGGGCTGCTCTCCCGGAGGCCAAACCCAAGAAGGTCTGGCAAAGTCAGGCTCAGGGAGACTCTGCCCTGCTGCAGACCTCGGTGTGGACACACGCTGCATAGAGCTCTCCTTGAAAACAGAGGGGTCTCAAGACATTCTGCCTACCTATTAGCTTTTCTTTATTTTTTTAACTTTTTGGGGGGAAAAGTATTTTTGAGAAGTTTGTCTTGCAATGTATTTATAAATAGTAAATAAAGTTTTTACCATTAAAAAAATATCTTTCCCTTTGTTATTGACCATCTCTGGGCTTTGTATCACTAATTATTTTATTTTATTATATAATAATTATTTTATTATAATAAAATCCTGAAAGGGGAAAATAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: AGAGCACAGATACCCAGAACT
Reverse primer sequence: TGAGGAACTTCAGGTGATTCAGT
Amplicon length:105
Amplicon sequence:
AGAGCACAGATACCCAGAACTTCTCCTCCGAGTCCAAGCGGGAGACAGAATATGGTCCCTGCCGTAGAGAAATGGAAGACACACTGAATCACCTGAAGTTCCTCA

14.Growth arrest and DNA-damage-inducible, alpha（GADD45A）
Accession number: NM_001924
Sequence:
CAGTGGCTGGTAGGCAGTGGCTGGGAGGCAGCGGCCCAATTAGTGTCGTGCGGCCCGTGGCGAGGCGAGGTCCGGGGAGCGAGCGAGCAAGCAAGGCGGGAGGGGTGGCCGGAGCTGCGGCGGCTGGCACAGGAGGAGGAGCCCGGGCGGGCGAGGGGCGGCCGGAGAGCGCCAGGGCCTGAGCTGCCGGAGCGGCGCCTGTGAGTGAGTGCAGAAAGCAGGCGCCCGCGCGCTAGCCGTGGCAGGAGCAGCCCGCACGCCGCGCTCTCTCCCTGGGCGACCTGCAGTTTGCAATATGACTTTGGAGGAATTCTCGGCTGGAGAGCAGAAGACCGAAAGGATGGATAAGGTGGGGGATGCCCTGGAGGAAGTGCTCAGCAAAGCCCTGAGTCAGCGCACGATCACTGTCGGGGTGTACGAAGCGGCCAAGCTGCTCAACGTCGACCCCGATAACGTGGTGTTGTGCCTGCTGGCGGCGGACGAGGACGACGACAGAGATGTGGCTCTGCAGATCCACTTCACCCTGATCCAGGCGTTTTGCTGCGAGAACGACATCAACATCCTGCGCGTCAGCAACCCGGGCCGGCTGGCGGAGCTCCTGCTCTTGGAGACCGACGCTGGCCCCGCGGCGAGCGAGGGCGCCGAGCAGCCCCCGGACCTGCACTGCGTGCTGGTGACGAATCCACATTCATCTCAATGGAAGGATCCTGCCTTAAGTCAACTTATTTGTTTTTGCCGGGAAAGTCGCTACATGGATCAATGGGTTCCAGTGATTAATCTCCCTGAACGGTGATGGCATCTGAATGAAAATAACTGAACCAAATTGCACTGAAGTTTTTGAAATACCTTTGTAGTTACTCAAGCAGTTACTCCCTACACTGATGCAAGGATTACAGAAACTGATGCCAAGGGGCTGAGTGAGTTCAACTACATGTTCTGGGGGCCCGGAGATAGATGACTTTGCAGATGGAAAGAGGTGAAAATGAAGAAGGAAGCTGTGTTGAAACAGAAAAATAAGTCAAAAGGAACAAAAATTACAAAGAACCATGCAGGAAGGAAAACTATGTATTAATTTAGAATGGTTGAGTTACATTAAAATAAACCAAATATGTTAAAGTTTAAGTGTGCAGCCATAGTTTGGGTATTTTTGGTTTATATGCCCTCAAGTAAAAGAAAAGCCGAAAGGGTTAATCATATTTGAAAACCATATTTTATTGTATTTTGATGAGATATTAAATTCTCAAAGTTTTATTATAAATTCTACTAAGTTATTTTATGACATGAAAAGTTATTTATGCTATAAATTTTTTGAAACACAATACCTACAATAAACTGGTATGAATAATTGCATCATT

Primers used:
Forward primer sequence: GAGAGCAGAAGACCGAAAGGA
Reverse primer sequence: CACAACACCACGTTATCGGG
Amplicon length:145
Amplicon sequence:
GAGAGCAGAAGACCGAAAGGATGGATAAGGTGGGGGATGCCCTGGAGGAAGTGCTCAGCAAAGCCCTGAGTCAGCGCACGATCACTGTCGGGGTGTACGAAGCGGCCAAGCTGCTCAACGTCGACCCCGATAACGTGGTGTTGTG
15.follistatin-like 1（FSTL1）
Accession number: BX647421
Sequence:
ATTTCCTCCGAGGCTGGCGATCGGCGGAGCTCCCACCTCCGCTTACAGCTCGCTGCCGCCGTCCTGCCCCGCGCCCCCAGGAGACCTGGACCAGACCACGATGTGGAAACGCTGGCTCGCGCTCGCGCTCGCGCTGGTGGCGGTCGCCTGGGTCCGCGCCGAGGAAGAGCTAAGGAGCAAATCCAAGATCTGTGCCAATGTGTTTTGTGGAGCCGGCCGGGAATGTGCAGTCACAGAGAAAGGGGAACCCACCTGTCTCTGCATTGAGCAATGCAAACCTCACAAGAGGCCTGTGTGTGGCAGTAATGGCAAGACCTACCTCAACCACTGTGAACTGCATCGAGATGCCTGCCTCACTGGATCCAAAATCCAGGTTGATTACGATGGACACTGCAAAGAGAAGAAATCCGTAAGTCCATCTGCCAGCCCAGTTGTTTGCTATCAGTCCAACCGTGATGAGCTCCGACGTCGCATCATCCAGTGGCTGGAAGCTGAGATCATTCCAGATGGCTGGTTCTCTAAAGGCAGCAACTACAGTGAAATCCTAGACAAGTATTTTAAGAACTTTGATAATGGTGATTCTCGCCTGGACTCCAGTGAATTCCTGAAGTTTGTGGAACAGAATGAAACTGCCATCAATATTACAACGTATCCAGACCAGGAGAACAACGAGTTGCTTAGGGGACTCTGTGTTGATGCTCTCATTGAACTGTCTGATGAAAATGCTGATTGGAAACTCAGCTTCCAAGAGTTTCTCAAGTGCCTCAACCCATCTTTCAACCCTCCTGAGAAGAAGTGTGCCCTGGAGGATGAAACGTATGCAGATGGAGCTGAGACCGAGGTGGACTGTAACCGCTGTGTCTGTGCCTGTGGAAATTGGGTCTGTACAGCCATGACCTGTGACGGAAAGAATCAGAAGGGGGCCCAGACCCAGACAGAGGAGGAGATGACCAGATATGTCCAGGAGCTCCAAAAGCATCAGGAAACAGCTGAAAAGACCAAGAGAGTGAGCACCAAAGAGATCTAATGAGGAGGCACAGACCAGTGTCTGGATCCCAGCATCTTCTCCACTTCAGCGCTGAGTTCAGTATACACAAGTGTCTGCTACAGTCGCCAAATCACCAGTATTTGCTTATATAGCAATGAGTTTTATTTTGTTTATTTGTTTTGCAATAAAGGATATGAAGGTGGCTGGCTAGGAAGGGAAGGGCCACAGCCTTCATTTCTAGGAGTGCTTTAAGAGAAACTGTAAATGGTGCTCTGGGGCTGGAGGCTAGTAAGGAAACTGCATCACGATTGAAAGAGGAACAGACCCAAATCTGAACCTCTTTTGAGTTTACTGCATCTGTCAGCAGGCTGCAGGGAGTGCACACGATGCCAGAGAGAACTTAGCAGGGTGTCCCCGGAGGAGAGGTTTGGGAAGCTCCACGGAGAGGAACGCTCTCTGCTTCCAGCCTCTTTCCATTGCCGTCAGCATGACAGACCTCCAGCATCCACGCATCTCTTGGTCCCAATAACTGCCTCTAGATACATAGCCATACTGCTAGTTAACCCAGTGTCCCTCAGACTTGGATGGAGTTTCTGGGAGGGTACACCCAAATGATGCAGATACTTGTATACTTTGAGCCCCTTAGCGACCTAACCAAATTTTAAAAATACTTTTTACCAAAGGTGCTATTTCTCTGTAAAACACTTTTTTTTGGCAGGTTGACTTTATTCTTCAATTATTATCATTATATTATTGTTTTTTAATATTTTATTTTCTTGACTAGGTATTAAGCTTTTGTAATTATTTTTCAGTAGTCCCACCACTTCATAGGTGGAAGGAGTTTGGGGTTCTTCCTGGTGCAGGGGCTGAAATAACCCAGATGCCCCCACCCTGCCACATACTAGATGCAGCCCATAGTTGGCCCCCCTAGCTTCCAGCAGTCCACTATCTGCCAGAGGAGCAAGGGTGCCTTAGACCGAAGCCAGGGGAAGAAGCATCTTCATAAAAAACTTTCAAGATCCAAACATTAATTTGTTTTTATTTATTCTGAGAAGTTGAGGCAAATCAGTATTCCCAAGGATGGCGACAAGGGCAGCCAAGCAGGGCTTAGGATATCCCAGCCTACCAATATGCTCATTCGACTAACTAGGAGGGTGAGTTGGCCCTGTCTCTTCTTTTTTCTGGACCTCAGTTTCCTCAGTGAGCTGGTAAGAATGCACTAACCTTTTGATTTGATAAGTTATAAATTCTGTGGTTCTGATCATTGGTCCAGAGGGGAGATAGGTTCCTGTGATTTTTCCTTCTTCTCTATAGAATAAATGAAATCTTGTTACTAGAACAAGAAATGTCAGATGGCCAAAAACAAGATGACCAGATTTGATCTCAGCCTGATGACCCTACAGGTCGTGCTATGATATGGAGTCCTCATGGGTAAAGCAGGAAGAGAGTGGGAAAGAGAACCACCCCACTCTGTCTTCATATTTGCATTTCATGTTTAACCTCCGGCTGGAAATAGAAAGCATTCCCTTAGAGATGAGGATAAAAGAAAGTTTCAGATTCAACAGGGGGAAGAAAATGGAGATTTAATCCTAAAACTGTGACTTGGGGAGGTCAGTCATTTACAGTTAGTCCTGTGTCTTTCGACTTCTGTGATTATTAACCCCACTCACTACCCTGTTTCAGATGCATTTGGAATACCAAAGATTAAATCCTTGACATAAGATCTCATTTGCAGAAAGCAGATTAAAGACCATCAGAAGGAAATTATTTAGGTTGTAATGCACAGGCAACTGTGAGAAACTGTTGTGCCAAAAATAGAATTCCTTCTAGTTTTTCTTGTTCTCATTTGAAAGGAGAAAATTCCACTTTGTTTAGCATTTCAAGCTTTTATGTATCCATCCCATCTAAAAACTCTTCAAACTCCACTTGTTCAGTCTGAAATGCAGCTCCCTGTCCAAGTGCCTTGGAGAACTCACAGCAGCACGCCTTAATCAAAGGTTTTACCAGCCCTTGGACACTATGGGAGGAGGGCAAGAGTACACCAATTTGTTAAAAGCAAGAAACCACAGTGTCTCTTCACTAGTCATTTAGAACATGGTTATCATCCAAGACTACTCTACCCTGCAACATTGAACTCCCAAGAGCAAATCCACATTCCTCTTGAGTTCTGCAGCTTCTGTGTAAATAGGGCAGCTGTCGTCTATGCCGTAGAATCACATGATCTGAGGACCATTCATGGAAGCTGCTAAATAGCCTAGTCTGGGGAGTCTTCCATAAAGTTTTGCATGGAGCAAACAAACAGGATTAAACTAGGTTTGGTTCCTTCAGCCCTCTAAAAGCATAGGGCTTAGCCTGCAGGCTTCCTTGGGCTTTCTCTGTGTGTGTAGTTTTGTAAACACTATAGCATCTGTTAAGATCCAGTGTCCATGGAAACATTCCCACATGCCGTGACTCTGGACTATATCAGTTTTTGGAAAGCAGGGTTCCTCTGCCTGCTAACAAGCCCACGTGGACCAGTCTGAATGTCTTTCCTTTACACCTATGTTTTTAAGTAGTCAAACTTCAAGAAACAATCTAAACAAGTTTCTGTTGCATATGTGTTTGTGAACTTGTATTTGTATTTAGTAGGCTTCTATATTGCATTTAACTTGTTTTTGTAACTCCTGATTCTTCCTTTTCGGATACTATTGATGAATAAAGAAATTAAAGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: CAACCACTGTGAACTGCATCG
Reverse primer sequence: CCTTTAGAGAACCAGCCATCTG
Amplicon length:204
Amplicon sequence:
CAACCACTGTGAACTGCATCGAGATGCCTGCCTCACTGGATCCAAAATCCAGGTTGATTACGATGGACACTGCAAAGAGAAGAAATCCGTAAGTCCATCTGCCAGCCCAGTTGTTTGCTATCAGTCCAACCGTGATGAGCTCCGACGTCGCATCATCCAGTGGCTGGAAGCTGAGATCATTCCAGATGGCTGGTTCTCTAAAGG

16.Ras homolog gene family, member C（RHOC）
Accession number: AK094474
Sequence:
GGAGCCTGTAGCCTTTATTCATGCCCCCCTGACCAAATGCAGTGAGAGACAAGGCCCCTGCCGAAAACAACTCCAGGGGCCTGGGACTCTGGGTCCCCTACTGCAGACACTTTCCTGTGAGCCAGAAGTGTATAAAGTGCTGGTGTGTGACCATCCTTTGGGGAAGGTCAAAGGGGGCAAGATCCCCAGGGGCCCTGAGGAAGGGCAGGGCATAGGCGTGGCTCCCAGAGCGCTGGGAGGGAGGGCCCGTGCCACCACCTCGGGGCTAGAAAACAATGCAGTCCTGGGCAGGAGGGAACTGAAAATGGGAGCCTTCAGCATGGAGCCCTCAGGAGGCTGGGGTTGTAGGGGGATAATTTCTGTACCCCTGTGAAGGGAGGGGGCATGTAGGAAAGGCCTTGGGGATCTCAGAGAATGGGACAGCCCCTCCGACGCTTGTTCTTGCGGACCTGGAGGCCAGCCCGAGTGGCCATCTCAAACACCTCCCGCACTCCCTCCTTGGTCTTGGCTGAGCACTCAAGGTAGCCAAAGGCACTGATCCGGTTCGCCATGTCCCGGCCTTCCTCAGACCGAACGGGCTCCTGCTTCATCTTGGCCAGCTCTCTCCTGGTGTGCTCGTCTTGCCTCAGGTCCTTCTTATTCCCCACCAGGATGATGGGCACGTTGGGGCAGAAGTGCTTCACCTCTGGGGTCCACTTCTCAGGAATGTTTTCCAGGCTGTCAGGGCTGTCGATGGAGAAGCACATGAGGATGACATCAGTGTCCGGGTAGGAGAGAGGCCGCAGTCGATCATAGTCTTCCTGCCCTGCTGTGTCCCACAGAGCCAGCTCCACCTGCTTGCCGTCCACCTCAATGTCCGCAATATAGTTCTCAAAGACAGTAGGGACGTAGACCTCCGGAAACTGATCCTTGCTGAAGACGATGAGGAGGCAGGTCTTCCCACAGGCACCATCCCCAACGATCACCAGCTTCTTTCGGATTGCAGCCATGGTGGGGCTCCAGCCGGCTGAAGTTCCCAGGCTGCAGGAAGAGAGGGCGGGCTCTGGAGCTGAGATGAAGTCAAGGCTGTTGGGAAGGGGGAGGGGGCTAGAGTCTGGGCTGGGAGGAGCCCCAAAAGAAGAGACAAATGAGGGCCAGTCCCAGCACCAACCAGGCAGGGAGCAGTTAAGAAAGCGACGGTAACCTGATCTCAGCCTCAAACCTAGCTTTTTCTCTCAGTCCCACATCCTGTCAAACTGGGCTGACTGAACGCCTCTACTCCCCACACCCCACCACCACCTCACACTGCCCTTTAGGAAGCGAATACTCCAGCCCCAGGCCTCTTCCCTTCAACATAGATCCTGAGTGGCCCTTCCCTTGCCTCCAGACACATTCACAAAACTGTTGGTTTTGTGGACATGAGTCAGAGAATTTACAGGAGTTCAAAGTACACAGCCACACTCTTCCCACCACAAAACGGACTCTCTCTGATTCCCCAGAAGACAAGCAAGAAGGCATTCACCCTGTCGGCAGATCGCCTCCAGAAATGGAAACCATCCTCCAAAAAGAGGGTTCCTTGGGAATTCTATCCCGGTGACTGACGCTGGGATTTCTTCCAACTCCTCCACCCACTCCATTAGTTCACCTTGCCCTGTTTTGTAAAGATGGGCTGGGGTAGCCCCAACCTGGGGTGGGCAGTGTTGATGGAGGGCAATCACTACTGGGGTGAAAGCCAGTCACTTAGGCATGAGTATGCCACTGCTGTCCCCCCAGCAGGGTAATTCAGACGGCACCAGAGTGGTGGGAGGCAGAGGACAGAAACCCGGGGTTGAGGCATGCGTTAAGGGACCTGGAGCCTCCAGCCCAATTAGAAGACTTTCCCTCCAGGCTATGATTGGGCCAGAACAGCAGGCAGCCCAGGCCAGGACACTAGGCCCAAGGCCAAGATGGCATGGACAACTCCCTGTGAGAGGCAGCCCCAGAGGGACTGTCCCACTGACCCCTTAAGAGGGGCAACTGAGCCCCACACAGGGCCTGGAATGGAGCCTGGAACTTCTGGGGCCTTCCCCAAGACAAGACAGTGTGGATACATCAGACCTCTCTCCAATCGCTCTCTTGAATTCCCAGATGATCCAGAGCGGCCGGTTGACTTTGCCGGCCCACCCTACACCTTCCGCTCCGCCGCCTCCAGCTGCGCGGCCGGTGCCGGAGGCTCAGACT

Primers used:
Forward primer sequence: CCTGCCTCCTCATCGTCTTC
Reverse primer sequence: AGCACATGAGGATGACATCAGTG
Amplicon length:195
Amplicon sequence:
CCTGCCTCCTCATCGTCTTCAGCAAGGATCAGTTTCCGGAGGTCTACGTCCCTACTGTCTTTGAGAACTATATTGCGGACATTGAGGTGGACGGCAAGCAGGTGGAGCTGGCTCTGTGGGACACAGCAGGGCAGGAAGACTATGATCGACTGCGGCCTCTCTCCTACCCGGACACTGATGTCATCCTCATGTGCT

17.AEbinding protein 1（AEBP1）
Accession number: NM_001129
Sequence:
CGGCTATCCGCGCGGGAGTGCGCCACGCGGGGCCGGAGCGCCTATTAGCCGCCAGGACCTCGGAGCGCCCCGACCACCCCTGAGCCCCTCTGGCTTCGGAGCCCCCCAGCACCCCTTCCCGGGTCCCCTCGCCCACCCTAATCCACTCTCCCTCCCTTTCCCGGATTCCCTCGCTCACCCCATCCTCTCTCCCGCCCCTTCCTGGATTCCCTCACCCGTCTCGATCCCCTCTCCGCCCTTTCCCAGAGACCCAGAGCCCCTGACCCCCCGCGCCCTCCCCGGAGCCCCCCGCGCGTGCCGCGGCCATGGCGGCCGTGCGCGGGGCGCCCCTGCTCAGCTGCCTCCTGGCGTTGCTGGCCCTGTGCCCTGGAGGGCGCCCGCAGACGGTGCTGACCGACGACGAGATCGAGGAGTTCCTCGAGGGCTTCCTGTCAGAGCTAGAACCTGAGCCCCGGGAGGACGACGTGGAGGCCCCGCCGCCTCCCGAGCCCACCCCGCGGGTCCGAAAAGCCCAGGCGGGGGGCAAGCCAGGGAAGCGGCCAGGGACGGCCGCAGAAGTGCCTCCGGAAAAGACCAAAGACAAAGGGAAGAAAGGCAAGAAAGACAAAGGCCCCAAGGTGCCCAAGGAGTCCTTGGAGGGGTCCCCCAGGCCGCCCAAGAAGGGGAAGGAGAAGCCACCCAAGGCCACCAAGAAGCCCAAGGAGAAGCCACCTAAGGCCACCAAGAAGCCCAAGGAGAAGCCACCCAAGGCCACCAAGAAGCCCAAAGAGAAGCCACCCAAGGCCACCAAGAAGCCCCCGTCAGGGAAGAGGCCCCCCATTCTGGCTCCCTCAGAAACCCTGGAGTGGCCACTGCCCCCACCCCCCAGCCCTGGCCCCGAGGAGCTACCCCAGGAGGGAGGGGCGCCCCTCTCAAATAACTGGCAGAATCCAGGAGAGGAGACCCATGTGGAGGCACGGGAGCACCAGCCTGAGCCGGAGGAGGAGACCGAGCAACCCACACTGGACTACAATGACCAGATCGAGAGGGAGGACTATGAGGACTTTGAGTACATTCGGCGCCAGAAGCAACCCAGGCCACCCCCAAGCAGAAGGAGGAGGCCCGAGCGGGTCTGGCCAGAGCCCCCTGAGGAGAAGGCCCCGGCCCCAGCCCCGGAGGAGAGGATTGAGCCTCCTGTGAAGCCTCTGCTGCCCCCGCTGCCCCCTGACTATGGTGATGGTTACGTGATCCCCAACTACGATGACATGGACTATTACTTTGGGCCTCCTCCGCCCCAGAAGCCCGATGCTGAGCGCCAGACGGACGAAGAGAAGGAGGAGCTGAAGAAACCCAAAAAGGAGGACAGCAGCCCCAAGGAGGAGACCGACAAGTGGGCAGTGGAGAAGGGCAAGGACCACAAAGAGCCCCGAAAGGGCGAGGAGTTGGAGGAGGAGTGGACGCCTACGGAGAAAGTCAAGTGTCCCCCCATTGGGATGGAGTCACACCGTATTGAGGACAACCAGATCCGAGCCTCCTCCATGCTGCGCCACGGCCTGGGGGCACAGCGCGGCCGGCTCAACATGCAGACCGGTGCCACTGAGGACGACTACTATGATGGTGCGTGGTGTGCCGAGGACGATGCCAGGACCCAGTGGATAGAGGTGGACACCAGGAGGACTACCCGGTTCACAGGCGTCATCACCCAGGGCAGAGACTCCAGCATCCATGACGATTTTGTGACCACCTTCTTCGTGGGCTTCAGCAATGACAGCCAGACATGGGTGATGTACACCAACGGCTATGAGGAAATGACCTTTCATGGGAACGTGGACAAGGACACACCCGTGCTGAGTGAGCTCCCAGAGCCGGTGGTGGCTCGTTTCATCCGCATCTACCCACTCACCTGGAATGGCAGCCTGTGCATGCGCCTGGAGGTGCTGGGGTGCTCTGTGGCCCCTGTCTACAGCTACTACGCACAGAATGAGGTGGTGGCCACCGATGACCTGGATTTCCGGCACCACAGCTACAAGGACATGCGCCAGCTCATGAAGGTGGTGAACGAGGAGTGCCCCACCATCACCCGCACTTACAGCCTGGGCAAGAGCTCACGAGGCCTCAAGATCTATGCCATGGAGATCTCAGACAACCCTGGGGAGCATGAACTGGGGGAGCCCGAGTTCCGCTACACTGCTGGGATCCATGGCAACGAGGTGCTGGGCCGAGAGCTGTTGCTGCTGCTCATGCAGTACCTGTGCCGAGAGTACCGCGATGGGAACCCACGTGTGCGCAGCCTGGTGCAGGACACACGCATCCACCTGGTGCCCTCACTGAACCCTGATGGCTACGAGGTGGCAGCGCAGATGGGCTCAGAGTTTGGGAACTGGGCGCTGGGACTGTGGACTGAGGAGGGCTTTGACATCTTTGAAGATTTCCCGGATCTCAACTCTGTGCTCTGGGGAGCTGAGGAGAGGAAATGGGTCCCCTACCGGGTCCCCAACAATAACTTGCCCATCCCTGAACGCTACCTTTCGCCAGATGCCACGGTATCCACGGAGGTCCGGGCCATCATTGCCTGGATGGAGAAGAACCCCTTCGTGCTGGGAGCAAATCTGAACGGCGGCGAGCGGCTAGTATCCTACCCCTACGATATGGCCCGCACGCCTACCCAGGAGCAGCTGCTGGCCGCAGCCATGGCAGCAGCCCGGGGGGAGGATGAGGACGAGGTCTCCGAGGCCCAGGAGACTCCAGACCACGCCATCTTCCGGTGGCTTGCCATCTCCTTCGCCTCCGCACACCTCACCTTGACCGAGCCCTACCGCGGAGGCTGCCAAGCCCAGGACTACACCGGCGGCATGGGCATCGTCAACGGGGCCAAGTGGAACCCCCGGACCGGGACTATCAATGACTTCAGTTACCTGCATACCAACTGCCTGGAGCTCTCCTTCTACCTGGGCTGTGACAAGTTCCCTCATGAGAGTGAGCTGCCCCGCGAGTGGGAGAACAACAAGGAGGCGCTGCTCACCTTCATGGAGCAGGTGCACCGCGGCATTAAGGGGGTGGTGACGGACGAGCAAGGCATCCCCATTGCCAACGCCACCATCTCTGTGAGTGGCATTAATCACGGCGTGAAGACAGCCAGTGGTGGTGATTACTGGCGAATCTTGAACCCGGGTGAGTACCGCGTGACAGCCCACGCGGAGGGCTACACCCCGAGCGCCAAGACCTGCAATGTTGACTATGACATCGGGGCCACTCAGTGCAACTTCATCCTGGCTCGCTCCAACTGGAAGCGCATCCGGGAGATCATGGCCATGAACGGGAACCGGCCTATCCCACACATAGACCCATCGCGCCCTATGACCCCCCAACAGCGACGCCTGCAGCAGCGACGCCTACAACACCGCCTGCGGCTTCGGGCACAGATGCGGCTGCGGCGCCTCAACGCCACCACCACCCTAGGCCCCCACACTGTGCCTCCCACGCTGCCCCCTGCCCCTGCCACCACCCTGAGCACTACCATAGAGCCCTGGGGCCTCATACCGCCAACCACCGCTGGCTGGGAGGAGTCGGAGACTGAGACCTACACAGAGGTGGTGACAGAGTTTGGGACCGAGGTGGAGCCCGAGTTTGGGACCAAGGTGGAGCCCGAGTTTGAGACCCAGTTGGAGCCTGAGTTTGAGACCCAGCTGGAACCCGAGTTTGAGGAAGAGGAGGAGGAGGAGAAAGAGGAGGAGATAGCCACTGGCCAGGCATTCCCCTTCACAACAGTAGAGACCTACACAGTGAACTTTGGGGACTTCTGAGATCAGCGTCCTACCAAGACCCCAGCCCAACTCAAGCTACAGCAGCAGCACTTCCCAAGCCTGCTGACCACAGTCACATCACCCATCAGCACATGGAAGGCCCCTGGTATGGACACTGAAAGGAAGGGCTGGTCCTGCCCCTTTGAGGGGGTGCAAACATGACTGGGACCTAAGAGCCAGAGGCTGTGTAGAGGCTCCTGCTCCACCTGCCAGTCTCGTAAGAGATGGGGTTGCTGCAGTGTTGGAGTAGGGGCAGAGGGAGGGAGCCAAGGTCACTCCAATAAAACAAGCTCATGGCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: AAAGGGCGAGGAGTTGGAG
Reverse primer sequence: GAGGCTCGGATCTGGTTGT Amplicon length:105
Amplicon sequence:
AAAGGGC GAGGAGTTGG AGGAGGAGTG GACGCCTACG GAGAAAGTCA AGTGTCCCCC CATTGGGATG GAGTCACACC GTATTGAGGA CAACCAGATC CGAGCCTC

18.Beta 2 microglobulin（B2M）
Accession number: NM_004048
Sequence:
AATATAAGTGGAGGCGTCGCGCTGGCGGGCATTCCTGAAGCTGACAGCATTCGGGCCGAGATGTCTCGCTCCGTGGCCTTAGCTGTGCTCGCGCTACTCTCTCTTTCTGGCCTGGAGGCTATCCAGCGTACTCCAAAGATTCAGGTTTACTCACGTCATCCAGCAGAGAATGGAAAGTCAAATTTCCTGAATTGCTATGTGTCTGGGTTTCATCCATCCGACATTGAAGTTGACTTACTGAAGAATGGAGAGAGAATTGAAAAAGTGGAGCATTCAGACTTGTCTTTCAGCAAGGACTGGTCTTTCTATCTCTTGTACTACACTGAATTCACCCCCACTGAAAAAGATGAGTATGCCTGCCGTGTGAACCATGTGACTTTGTCACAGCCCAAGATAGTTAAGTGGGATCGAGACATGTAAGCAGCATCATGGAGGTTTGAAGATGCCGCATTTGGATTGGATGAATTCCAAATTCTGCTTGCTTGCTTTTTAATATTGATATGCTTATACACTTACACTTTATGCACAAAATGTAGGGTTATAATAATGTTAACATGGACATGATCTTCTTTATAATTCTACTTTGAGTGCTGTCTCCATGTTTGATGTATCTGAGCAGGTTGCTCCACAGGTAGCTCTAGGAGGGCTGGCAACTTAGAGGTGGGGAGCAGAGAATTCTCTTATCCAACATCAACATCTTGGTCAGATTTGAACTCTTCAATCTCTTGCACTCAAAGCTTGTTAAGATAGTTAAGCGTGCATAAGTTAACTTCCAATTTACATACTCTGCTTAGAATTTGGGGGAAAATTTAGAAATATAATTGACAGGATTATTGGAAATTTGTTATAATGAATGAAACATTTTGTCATATAAGATTCATATTTACTTCTTATACATTTGATAAAGTAAGGCATGGTTGTGGTTAATCTGGTTTATTTTTGTTCCACAAGTTAAATAAATCATAAAACTTGATGTGTTATCTCTTA

Primers used:
Forward primer sequence: AGGCTATCCAGCGTACTCCAA
Reverse primer sequence: AATGCGGCATCTTCAAACC
Amplicon length: 337
Amplicon sequence:
AGGCTATCCAGCGTACTCCAAAGATTCAGGTTTACTCACGTCATCCAGCAGAGAATGGAAAGTCAAATTTCCTGAATTGCTATGTGTCTGGGTTTCATCCATCCGACATTGAAGTTGACTTACTGAAGAATGGAGAGAGAATTGAAAAAGTGGAGCATTCAGACTTGTCTTTCAGCAAGGACTGGTCTTTCTATCTCTTGTACTACACTGAATTCACCCCCACTGAAAAAGATGAGTATGCCTGCCGTGTGAACCATGTGACTTTGTCACAGCCCAAGATAGTTAAGTGGGATCGAGACATGTAAGCAGCATCATGGAGGTTTGAAGATGCCGCATT

19.Superoxide dismutase 2, mitochondrial（SOD2）
Accession number: NM_001024465.
Sequence:
GCGGTGCCCTTGCGGCGCAGCTGGGGTCGCGGCCCTGCTCCCCGCGCTTTCTTAAGGCCCGCGGGCGGCGCAGGAGCGGCACTCGTGGCTGTGGTGGCTTCGGCAGCGGCTTCAGCAGATCGGCGGCATCAGCGGTAGCACCAGCACTAGCAGCATGTTGAGCCGGGCAGTGTGCGGCACCAGCAGGCAGCTGGCTCCGGTTTTGGGGTATCTGGGCTCCAGGCAGAAGCACAGCCTCCCCGACCTGCCCTACGACTACGGCGCCCTGGAACCTCACATCAACGCGCAGATCATGCAGCTGCACCACAGCAAGCACCACGCGGCCTACGTGAACAACCTGAACGTCACCGAGGAGAAGTACCAGGAGGCGTTGGCCAAGGGAGATGTTACAGCCCAGATAGCTCTTCAGCCTGCACTGAAGTTCAATGGTGGTGGTCATATCAATCATAGCATTTTCTGGACAAACCTCAGCCCTAACGGTGGTGGAGAACCCAAAGGGGAGTTGCTGGAAGCCATCAAACGTGACTTTGGTTCCTTTGACAAGTTTAAGGAGAAGCTGACGGCTGCATCTGTTGGTGTCCAAGGCTCAGGTTGGGGTTGGCTTGGTTTCAATAAGGAACGGGGACACTTACAAATTGCTGCTTGTCCAAATCAGGATCCACTGCAAGGAACAACAGGCCTTATTCCACTGCTGGGGATTGATGTGTGGGAGCACGCTTACTACCTTCAGTATAAAAATGTCAGGCCTGATTATCTAAAAGCTATTTGGAATGTAATCAACTGGGAGAATGTAACTGAAAGATACATGGCTTGCAAAAAGTAAACCACGATCGTTATGCTGATCATACCCTAATGATCCCAGCAAGATAATGTCCTGTCTTCTAAGATGTGCATCAAGCCTGGTACATACTGAAAACCCTATAAGGTCCTGGATAATTTTTGTTTGATTATTCATTGAAGAAACATTTATTTTCCAATTGTGTGAAGTTTTTGACTGTTAATAAAAGAATCTGTCAACCATCAAAAAAAAAAAAA

Primers used:
Forward primer sequence: AACCTCAGCCCTAACGGTG
Reverse primer sequence: AGCAGCAATTTGTAAGTGTCCC
Amplicon length: 180
Amplicon sequence:
AACCTCAGCCCTAACGGTGGTGGAGAACCCAAAGGGGAGTTGCTGGAAGCCATCAAACGTGACTTTGGTTCCTTTGACAAGTTTAAGGAGAAGCTGACGGCTGCATCTGTTGGTGTCCAAGGCTCAGGTTGGGGTTGGCTTGGTTTCAATAAGGAACGGGGACACTTACAAATTGCTGCT
20.Nicotinamide phosphoribosyltransferase（PBEF1）
Accession number: NM_005746
Sequence:
GCTGCCGCGCCCCGCCCTTTCTCGGCCCCCGGAGGGTGACGGGGTGAAGGCGGGGGAACCGAGGTGGGGAGTCCGCCAGAGCTCCCAGACTGCGAGCACGCGAGCCGCCGCAGCCGTCACCCGCGCCGCGTCACGGCTCCCGGGCCCGCCCTCCTCTGACCCCTCCCCTCTCTCCGTTTCCCCCTCTCCCCCTCCTCCGCCGACCGAGCAGTGACTTAAGCAACGGAGCGCGGTGAAGCTCATTTTTCTCCTTCCTCGCAGCCGCGCCAGGGAGCTCGCGGCGCGCGGCCCCTGTCCTCCGGCCCGAGATGAATCCTGCGGCAGAAGCCGAGTTCAACATCCTCCTGGCCACCGACTCCTACAAGGTTACTCACTATAAACAATATCCACCCAACACAAGCAAAGTTTATTCCTACTTTGAATGCCGTGAAAAGAAGACAGAAAACTCCAAATTAAGGAAGGTGAAATATGAGGAAACAGTATTTTATGGGTTGCAGTACATTCTTAATAAGTACTTAAAAGGTAAAGTAGTAACCAAAGAGAAAATCCAGGAAGCCAAAGATGTCTACAAAGAACATTTCCAAGATGATGTCTTTAATGAAAAGGGATGGAACTACATTCTTGAGAAGTATGATGGGCATCTTCCAATAGAAATAAAAGCTGTTCCTGAGGGCTTTGTCATTCCCAGAGGAAATGTTCTCTTCACGGTGGAAAACACAGATCCAGAGTGTTACTGGCTTACAAATTGGATTGAGACTATTCTTGTTCAGTCCTGGTATCCAATCACAGTGGCCACAAATTCTAGAGAGCAGAAGAAAATATTGGCCAAATATTTGTTAGAAACTTCTGGTAACTTAGATGGTCTGGAATACAAGTTACATGATTTTGGCTACAGAGGAGTCTCTTCCCAAGAGACTGCTGGCATAGGAGCATCTGCTCACTTGGTTAACTTCAAAGGAACAGATACAGTAGCAGGACTTGCTCTAATTAAAAAATATTATGGAACGAAAGATCCTGTTCCAGGCTATTCTGTTCCAGCAGCAGAACACAGTACCATAACAGCTTGGGGGAAAGACCATGAAAAAGATGCTTTTGAACATATTGTAACACAGTTTTCATCAGTGCCTGTATCTGTGGTCAGCGATAGCTATGACATTTATAATGCGTGTGAGAAAATATGGGGTGAAGATCTAAGACATTTAATAGTATCAAGAAGTACACAGGCACCACTAATAATCAGACCTGATTCTGGAAACCCTCTTGACACTGTGTTAAAGGTTTTGGAGATTTTAGGTAAGAAGTTTCCTGTTACTGAGAACTCAAAGGGTTACAAGTTGCTGCCACCTTATCTTAGAGTTATTCAAGGGGATGGAGTAGATATTAATACCTTACAAGAGATTGTAGAAGGCATGAAACAAAAAATGTGGAGTATTGAAAATATTGCCTTCGGTTCTGGTGGAGGTTTGCTACAGAAGTTGACAAGAGATCTCTTGAATTGTTCCTTCAAGTGTAGCTATGTTGTAACTAATGGCCTTGGGATTAACGTCTTCAAGGACCCAGTTGCTGATCCCAACAAAAGGTCCAAAAAGGGCCGATTATCTTTACATAGGACGCCAGCAGGGAATTTTGTTACACTGGAGGAAGGAAAAGGAGACCTTGAGGAATATGGTCAGGATCTTCTCCATACTGTCTTCAAGAATGGCAAGGTGACAAAAAGCTATTCATTTGATGAAATAAGAAAAAATGCACAGCTGAATATTGAACTGGAAGCAGCACATCATTAGGCTTTATGACTGGGTGTGTGTTGTGTGTATGTAATACATAATGTTTATTGTACAGATGTGTGGGGTTTGTGTTTTATGATACATTACAGCCAAATTATTTGTTGGTTTATGGACATACTGCCCTTTCATTTTTTTTCTTTTCCAGTGTTTAGGTGATCTCAAATTAGGAAATGCATTTAACCATGTAAAAGATGAGTGCTAAAGTAAGCTTTTTAGGGCCCTTTGCCAATAGGTAGTCATTCAATCTGGTATTGATCTTTTCACAAATAACAGAACTGAGAAACTTTTATATATAACTGATGATCACATAAAACAGATTTGCATAAAATTACCATGATTGCTTTATGTTTATATTTAACTTGTATTTTTGTACAAACAAGATTGTGTAAGATATATTTGAAGTTTCAGTGATTTAACAGTCTTTCCAACTTTTCATGATTTTTATGAGCACAGACTTTCAAGAAAATACTTGAAAATAAATTACATTGCCTTTTGTCCATTAATCAGCAAATAAAACATGGCCTTAACAAAGTTGTTTGTGTTATTGTACAATTTGAAAATTATGTCGGGACATACCCTATAGAATTACTAACCTTACTGCCCCTTGTAGAATATGTATTAATCATTCTACATTAAAGAAAATAATGGTTCTTACTGGAATGTCTAGGCACTGTACAGTTATTATATATCTTGGTTGTTGTATTGTACCAGTGAAATGCCAAATTTGAAAGGCCTGTACTGCAATTTTATATGTCAGAGATTGCCTGTGGCTCTAATATGCACCTCAAGATTTTAAGGAGATAATGTTTTTAGAGAGAATTTCTGCTTCCACTATAGAATATATACATAAATGTAAAATACTTACAAAAGTGGAAGTAGTGTATTTTAAAGTAATTACACTTCTGAATTTATTTTTCATATTCTATAGTTGGTATGACTTAAATGAATTACTGGAGTGGGTAGTGAGTGTACTTAAATGTTTCAATTCTGTTATATTTTTTATTAAGTTTTTAAAAAATTAAATTGGATATTAAATTGTATGGACATCATTTATTAATTTTAAACTGAATGCCCTCAATAAGTAATACTGAAGCACATTCTTAAATGAAGATAAATTATCTCCAATGAAAAGCATGACATGTGTTTCAATAGAAGAATCTTAAGTTGGCTAAATTCAAAGTGCTTGACATCAAAATGTTCTAGAGTGATTAGCTACTAGATTCTGAATCATACATCACATCTGACTAGAGACCAGTTTCTTTCGAATGATTCTTTTATGTATGTAGATCTGTTCTTCTGAGGCAGCGGTTGGCCAACTATAGCCCAAAGGCCAAATTTGGACTTCTTTTTATAAATGCAGATTGTCTATGGCTGCTTTCCCACTACTCCAGCCTAAGGTAAACAGCTGCAATAGAAGCCAAATGAGAATCGCAAAGCCCAAAATGTTTATTAACCTGCCCTTTACACAAAATTACACAAAAAGTTTCCTGATCTCTGTTCTAAGAAAAGGAGTGTGCCTTGCATTTAAAAGGAAATGTTGGTTTCTAGGGAAGGGAGGAGGCTAAATAATTGATACGGAATTTTCCTCTTTTGTCTTCTTTTTTCTCACTTAAGAATCCGATACTGGAAGACTGATTTAGAAAAGTTTTTAACATGACATTAAATGTGAAATTTTAAAAATTGAAAAGCCATAAATCATCTGTTTTAAATAGTTACATGAGAAAATGATCACTAGAATAACCTAATTAGAAGTGTTATCTTCATTAAATGTTTTTTGTAAGTGGTATTAGAAAGAATATGTTTTTCAGATGGTTCTTTAAACATGTAGTGAGAACAATAAGCATTATTCACTTTTAGTAAGTCTTCTGTAATCCATGATATAAAATAATTTTAAAATGATTTTTTAATGTATTTGAGTAAAGATGAGTAGTATTAAGAAAAACACACATTTCTTCACAAAATGTGCTAAGGGGCGTGTAAAGAATCAAAAGAAACTATTACCAATAATAGTTTTGATAATCACCCATAATTTTGTGTTTAAACATTGAAATTATAGTACAGACAGTATTCTCTGTGTTCTGTGAATTTCAGCAGCTTCAGAATAGAGTTTAATTTAGAAATTTGCAGTGAAAAAAGCTATCTCTTTGTTCACAACCATAAATCAGGAGATGGAGATTAATTCTATTGGCTCTTAGTCACTTGGAACTGATTAATTCTGACTTTCTGTCACTAAGCACTTGGTATTTGGCCATCTCCATTCTGAGCACCAAACGGTTAACACGAATGTCCACTAGAACTCTGCTGTGTGTCACCCTTAAATCAGTCTAAATCTTCCAGACAAAAGCAAATGGCATTTATGGATTTAAGTCATTAGATTTTCAACTGACATTAATTAATCCCTCTTGATTGATTATATCATCAAGTATTTATATCTTAAATAGGAGGTAGGATTTCTGTGTTAAGACTCTTATTTGTACCCTATAATTAAAGTAAAATGTTTTTTATGAGTATCCCTTGTTTTCCCTTCTTAAATTGTTATCAAACAATTTTTATAATGAAATCTATCTTGGAAAATTAGAAAGAAAAATGGCAAGGTATTTATTGTTCTGTTTGCCATAATTTAGAACTCACACTTAAGTATTTTGTAGTTTTACATTCCTTTTTAACCCATTCAGTGGAGAATGTCAGCTTTTCTCCCAAGTTGTATGTTAAGTCTATTCTAATATGTACTCAACATCAAGTTATAAACATGTAATAAACATGGAAATAAAGTTTAGCTCTATTAGTGAAGTGTTAAAAAAAAAAAAAA
Primers used:
Forward primer sequence: ATTGCCTTCGGTTCTGGTGG
Reverse primer sequence: CGGCCCTTTTTGGACCTTTTG Amplicon length: 155
Amplicon sequence:
ATTGCCTTCGGTTCTGGTGGAGGTTTGCTACAGAAGTTGACAAGAGATCTCTTGAATTGTTCCTTCAAGTGTAGCTATGTTGTAACTAATGGCCTTGGGATTAACGTCTTCAAGGACCCAGTTGCTGATCCCAACAAAAGGTCCAAAAAGGGCCG]
[0020] 前記記載の配列は本発明において使用されるＳＥＱＩＤ Ｎｏ．１〜８０に表記されると共に、ＰａｔｅｎｔＩｎの最新ヴァージョン３．５に表記されている。この配列表は、ＣＤ＿ＲＯＭなどの電子フォーマットと共にハードコピーでも提供されている。本明細書に提供される相補的ＤＮＡ配列（ｃＤＮＡ）は各遺伝子配列に対し相補的であり、ｃＤＮＡ配列はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏｓ ４１，４３，４５，４７，４９，５１，５３，５５，５７，５９，６１，６３，６５，６７，６９，７１，７３，７５，７７及び７９によって表される。尚、ｃＤＮＡのチミン（Ｔ）塩基がｍＲＮＡのウラシル（Ｕ）塩基に置き換えられることを除いて、ｃＤＮＡ配列はｍＲＮＡ配列に相当する。更に、星状細胞腫の検出に有用な遺伝子のプローブ配列、そのグレードと膠芽細胞腫の予後はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４２，４４，４６，４８，５０，５２，５４，５６，５８，６０，６２，６４，６６，６８，７０，７２，７４，７６，７８及び８０によって表される。]
[0021] 本発明において使用される遺伝子配列を参考までに以下に記載する。
１．ＳＥＱＩＤ Ｎｏ．１は遺伝子ＳＹＴ１の順方向プライマーを示す。
２．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２は遺伝子ＳＹＴ１の逆方向プライマーを示す。
３．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３は遺伝子ＲＡＢ２６の順方向プライマーを示す。
４．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４は遺伝子ＲＡＢ２６の逆方向プライマーを示す。
５．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５は遺伝子ＤＩＲＡＳ２の順方向プライマーを示す。
６．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６は遺伝子ＤＩＲＡＳ２の逆方向プライマーを示す。
７．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７は遺伝子ＲＡＢ１３の順方向プライマーを示す。
８．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８は遺伝子ＲＡＢ１３の逆方向プライマーを示す。
９．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．９は遺伝子ＩＧＦＢＰ７の順方向プライマーを示す。
１０．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ１０は遺伝子ＩＧＦＢＰ７の逆方向プライマーを示す。
１１．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１は遺伝子ＣＯＬ６Ａ１の順方向プライマーを示す。
１２．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２は遺伝子ＣＯＬ６Ａ１の逆方向プライマーを示す。
１３．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３は遺伝子ＤＣＮの順方向プライマーを示す。
１４．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４は遺伝子ＤＣＮの逆方向プライマーを示す。
１５．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５は遺伝子ＰＬＡＴの順方向プライマーを示す。
１６．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６は遺伝子ＰＡＬＴの逆方向プライマーを示す。
１７．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７は遺伝子ＬＧＡＬＳ３の順方向プライマーを示す。
１８．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８は遺伝子ＬＧＡＬＳ３の逆方向プライマーを示す。
１９．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９は遺伝子ＦＡＢＰ７の順方向プライマーを示す。
２０．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０は遺伝子ＦＡＢＰ７の逆方向プライマーを示す。
２１．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１は遺伝子ＬＯＸの順方向プライマーを示す。
２２．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２は遺伝子ＬＯＸの逆方向プライマーを示す。
２３．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３は遺伝子ＬＡＭＢ１の順方向プライマーを示す。
２４．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４は遺伝子ＬＡＭＢ１の逆方向プライマーを示す。
２５．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５は遺伝子ＩＧＦＢＰ３の順方向プライマーを示す。
２６．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６は遺伝子ＩＧＦＢＰ３の逆方向プライマーを示す。
２７．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７は遺伝子ＧＡＤＤ４５Ａの順方向プライマーを示す。
２８．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８は遺伝子ＧＡＤＤ４５Ａの逆方向プライマーを示す。
２９．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９は遺伝子ＦＳＴＬ１の順方向プライマーを示す。
３０．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０は遺伝子ＦＳＴＬ１の逆方向プライマーを示す。
３１．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１は遺伝子ＲＨＯＣの順方向プライマーを示す。
３２．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２は遺伝子ＲＨＯＣの逆方向プライマーを示す。
３３．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３は遺伝子ＡＥＢＰ１の順方向プライマーを示す。
３４．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４は遺伝子ＡＥＢＰ１の逆方向プライマーを示す。
３５．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５は遺伝子Ｂ２Ｍの順方向プライマーを示す。
３６．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３６は遺伝子Ｂ２Ｍの逆方向プライマーを示す。
３７．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３７は遺伝子ＳＯＤ２の順方向プライマーを示す。
３８．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３８は遺伝子ＳＯＤ２の逆方向プライマーを示す。
３９．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３９は遺伝子ＰＢＥＦ１の順方向プライマーを示す。
４０．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４０は遺伝子ＰＢＥＦ１の逆方向プライマーを示す。
４１．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４１は遺伝子ＳＹＴ１のｃＤＮＡを示す。
４２．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４２は遺伝子ＳＹＴ１に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
４３．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４３は遺伝子ＲＡＢ２６のｃＤＮＡを示す。
４４．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４４は遺伝子ＲＡＢ２６に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
４５．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４５は遺伝子ＤＩＲＡＳ２のｃＤＮＡを示す。
４６．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４６は遺伝子ＤＩＲＡＳ２に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
４７．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４７は遺伝子ＲＡＢ１３のｃＤＮＡを示す。
４８．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４８は遺伝子ＲＡＢ１３に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
４９．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４９は遺伝子ＩＧＦＢＰ７のｃＤＮＡを示す。
５０．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５０は遺伝子ＩＧＦＢＰ７に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
５１．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５１は遺伝子ＣＯＬ６Ａ１のｃＤＮＡを示す。
５２．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５２は遺伝子ＣＯＬ６Ａ１に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
５３．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５３は遺伝子ＤＣＮのｃＤＮＡを示す。
５４．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５４は遺伝子ＤＣＮに対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
５５．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５５は遺伝子ＰＬＡＴのｃＤＮＡを示す。
５６．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５６は遺伝子ＰＡＬＴに対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
５７．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５７は遺伝子ＬＧＡＬＳ３のｃＤＮＡを示す。
５８．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５８は遺伝子ＬＧＡＬＳ３に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
５９．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５９は遺伝子ＦＡＢＰ７のｃＤＮＡを示す。
６０．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６０は遺伝子ＦＡＢＰ７に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
６１．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６１は遺伝子ＬＯＸのｃＤＮＡを示す。
６２．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６２は遺伝子ＬＯＸに対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
６３．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６３は遺伝子ＬＡＭＢ１のｃＤＮＡを示す。
６４．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６４は遺伝子ＬＡＭＢ１に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
６５．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６５は遺伝子ＩＧＦＢＰ３のｃＤＮＡを示す。
６６．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６６は遺伝子ＩＧＦＢＰ３に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
６７．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６７は遺伝子ＧＡＤＤ４５ＡのｃＤＮＡを示す。
６８．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６８は遺伝子ＧＡＤＤ４５Ａに対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
６９．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６９は遺伝子ＦＳＴＬ１のｃＤＮＡを示す。
７０．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７０は遺伝子ＦＳＴＬ１に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
７１．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７１は遺伝子ＲＨＯＣのｃＤＮＡを示す。
７２．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７２は遺伝子ＲＨＯＣに対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
７３．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７３は遺伝子ＡＥＢＰ１のｃＤＮＡを示す。
７４．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７４は遺伝子ＡＥＢＰ１に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
７５．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７５は遺伝子Ｂ２ＭのｃＤＮＡを示す。
７６．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７６は遺伝子Ｂ２Ｍに対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
７７．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７７は遺伝子ＳＯＤ２のｃＤＮＡを示す。
７８．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７８は遺伝子ＳＯＤ２に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。
７９．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７９は遺伝子ＰＢＥＦ１のｃＤＮＡを示す。
８０．ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８０は遺伝子ＰＢＥＦ１に対して行われる単位複製配列や核酸プローブを示す。]
[0022] サンプルは、被験者の体内から直接採取するのが好ましい。サンプリングに使用する好ましい適切な物質は、脳組織より採取した血液、リンパ液や血漿、脳脊髄液、その他細胞物質の生検サンプルを含む。組織の物質は、組織のサンプル、組織液（リンパ液や血漿）又は細胞溶解液などを含むヒトの組織のいかなるサンプルをも含む。採取できる組織のサンプルは、脳から採取する細胞内物質も含むがこれに限らない。正常な脳細胞、腫瘍細胞、腫瘍近辺の細胞、及び／又は脳内の腫瘍部位から採取した血漿なども含まれる。]
[0023] 本発明の方法によると、組織サンプルは多数の蛋白質種やｍＲＮＡ種を発現し、それぞれ異質の蛋白質及び／又はｍＲＮＡ種であるため、検出可能となる。ここで、サンプルを「得る」「採取する」はほとんど同じ意味で用いられ、組織のサンプルをサンプリングする、切除する、そのまま取り除く、吸引する、受け取る、集める、及び／又は輸送する等の意味を含む。更に、濃縮する、堆積する、沈殿する、上澄みをとる、ろ過する、吸引する、及び他のいかなる留出するという意味をも含む。例えば、従来の生検法は組織のサンプルを得る上で有用であり、経皮生検、腹腔鏡生検、外科的切除、組織をかき集め綿球等で採取する生検、ステント、カテーテル、針によるサンプリング、及びその他公知の手段を含む。例えば、被験者の頭蓋骨内からサンプルを得るため、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）−誘導定位固定技術が採用されたが、方法はこれに限らない。サンプルは、被験者の体内から直接取り出した物質から得るか、又は培養したヒトの細胞、無細胞系抽出物やその他検査サンプルなど被験者の体内から間接的に得る。又、検出方法（例えば、核酸増幅分析及び／又は免疫化学的検出）を適用する前に、ジメチル・スルホキシド（ＤＭＳＯ）、トレハロース、グリセロール、又はプロパンジオール−スクロースなどの抗凍結剤の存在下で急速凍結又は制御された凍結養生法などの、検出可能、及び／又は分析可能に核酸や蛋白質を保存する公知の手段によりサンプルを保存してもよい。又、前記分析及び検出に供する遺伝子に特異な核酸を増幅する目的で、又は各タンパク質を検出する目的で、サンプルを保存前か後に貯蔵してもよい。]
[0024] サンプルは、即座に使用してもよいし、一晩冷蔵又は冷凍したり、希薄化したり、フェノール-クロロホルムを抽出したり、その他の手段により任意に前処理して使用し、様々な増幅反応を妨げる要素を取り除く。それから、前記蛋白質やそのメッセンジャー、リボ核酸（ｍＲＮＡ）のサンプル内の発現レベルを定量的に又は半定量的に検出する。
ｍＲＮＡ種を含むこれら遺伝子に特異なポリヌクレオチドは公知のヌクレオチドの配列と類似又は同族の塩基配列によって求められる。同属塩基配列は米国立生物工学情報センター（NCBI; www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）ＧｅｎＢａｎｋデータベース等のゲノムデータベース上で、ＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴ、ＱＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ、ＰＨＩ−ＢＬＡＳＴ、ギャップ又は無ギャップ ＢＬＡＳＴ等のコンピュータアルゴリズムを使用して、又はベイラーカレッジの医薬のサーバー（www.hgsc.bcm.tmc.edu/seq_data）に提供される「配列比較」に基づいて、同族塩基配列を検索することによって求められる（Altchul, et al., 1997; Zhang and Madden, 1997; Madden et al., 1996; Altschul et al., 1990）。]
[0025] ｍＲＮＡ配列を含むこれら遺伝子に特異なポリヌクレオチドは、好ましくは少なくとも連続５〜３０のヌクレオチドの長さであり、より好ましくは少なくとも連続６〜１５のヌクレオチドの長さであり、更に好ましくは少なくとも連続７〜１０のヌクレオチドの長さである。これら各遺伝子に特異なｍＲＮＡは、必ずしもというわけではないが、これら遺伝子の機能的なヴァージョン又はその断片を符号化するヌクレオチドを含むｍＲＮＡ種となることができる。更にこれら遺伝子に特異なｍＲＮＡに含まれるものとして、スプライス変異がある。]
[0026] 本発明の対象とするこれら遺伝子に特異なｍＲＮＡ又は蛋白質のレベルは、定量的又は半定量的に発現を求める公知のいかなる方法を使用しても、定量的に検出することができる。定量的方法とは、絶対的でも相対的でもよい。絶対的定量法は、標準レベルと比較して発現レベルの絶対値を提供する。その量又はレベルとして、規定の蛋白質の質量、核酸の質量、細胞の数又は質量、体重等に正規化したモル、質量、又は活性値などが主に挙げられる。更に、定量値又は絶対値は規定の時間、すなわちスピードとしての発現のレベルに任意に正規化することができる。相対的検出方法は、正常な細胞や選択された「ハウスキーピング」遺伝子の発現等を、コントロールサンプルに対する所定のサンプルにおける発現の割合に換算した遺伝子の量やその発現レベルの単位なしの相対値を求める方法である。その他、当業者に公知の定量的及び半定量的検出方法もある。本発明に係る方法によると、遺伝子により符号化された蛋白質の発現レベルは、酵素結合の免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ），免疫蛍光分析（ＩＦＡ），免疫電気泳動法、クロマトグラフィー分析、免疫組織化学的染色等の免疫化学的手段により（これらに限らないが）、これら遺伝子産物に対する多クローン性又は単クローン性抗体や抗体フラグメントを使用して、任意に検出される。蛋白質を攻撃目標とする抗体や抗体フラグメントは市販されているか又は従来の手段により生産される。]
[0027] 同様に、本発明が対象とする他の蛋白質の発現レベルも前記従来の免疫化学的手段により検出することが出来る。ｍＲＮＡ種の発現レベルは、ＲＮＡやｃＤＮＡの形で核酸の増幅（例えば、特定の核酸セグメントの増幅）を行う非常に多くのいかなる方法によっても定量的又は半定量的に検出することができ、又これが最も好ましい。これらＲＮＡやｃＤＮＡ増幅産物は最終的に増幅後に測定される。最終的なＲＮＡやｃＤＮＡの増幅産物は、濃度測定、蛍光検出（これに限らないが）、又はその他いかなる適切な生化学的、物理学的分析システム等の従来の手段によっても測定できる。増幅前のサンプルにおいて、ＤＮＡゲノムからｍＲＮＡを抽出又は分離してＤＮＡから分離したサンプルのそのフラクションに残留する核酸を増幅して、オリジナルの検査サンプル中の汚染されたＤＮＡゲノムの増幅に起因する誤（ポジティブ）検出を防ぐことが好ましい。]
[0028] 星状細胞腫を含む様々な悪性腫瘍をグレードに分類する組織病理学的手段が知られている（Daumas-Duport et al., 1988）。]
[0029] 本発明に係る方法は星状細胞腫の診断に使用することができ、ここで、高レベルで発現するＲＡＢ１３や低レベルで発現するＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、及びＤＩＲＡＳ２（これらに限らないが）からなる群より選ばれるいかなる遺伝子又はその組み合わせも、星状細胞腫の存在を示唆するものである（図１参照）。]
[0030] 本発明に係る方法は悪性星状細胞腫（ＡＡ、ＧＢＭ）の診断に使用することができ、ここで、高レベルで発現するＩＧＦＢＰ７は悪性星状細胞腫の存在を示唆するものである（図２参照）。] 図２
[0031] 本発明に係る方法は膠芽細胞腫の診断に使用することができる。というのは、ＧＢＭは一般的にＣＯＬ６Ａ１、ＤＣＮ、ＰＬＡＴ、ＬＧＡＬＳ３、ＦＡＢＰ７、ＬＯＸ、ＬＡＭＢ１、ＩＧＦＢＰ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＦＳＴＬ１、ＲＨＯＣ、Ｂ２Ｍ、及びＰＢＥＦ１（これらに限らないが）からなる群より選ばれるいかなる遺伝子又はその組み合わせを過剰発現するからである（図３参照）。原発性及び続発性ＧＢＭは、組織病理学的方法では見分けがつきにくいことが多いが、本発明の方法を使用すると、これらのタイプもすぐに見分けがつく。一般的に原発性ＧＢＭはＡＥＢＰ１及びＳＯＤ２（これらに限らないが）からなる群より選ばれるいかなる遺伝子又はその組み合わせも過剰発現するからである（図４参照）。] 図４
[0032] 本発明の好ましい実施形態によると、前記遺伝子はＥＧＦＲ、ｐ５３、及びＫｉ−６７等の公知のマーカーと組み合わせて使用され、星状細胞腫の存在を決定する。]
[0033] 更に、本発明に係る方法は被験者の膠芽細胞腫の予後に使用することができ、ここで高レベルのＰＢＥＦ１の発現はテストサンプルを得た被験者の生存率が低いことを示唆するものである（図１１参照）。] 図１１
[0034] 前記本発明の方法の記載は例示的なものにすぎず、決して包括的なものではない。本発明のこれら特徴が採用された場合、星状細胞腫や膠芽細胞腫の患者に対する診断治療の決定がより適切に最適化され、その患者の生存率の見通しが高まる。]
[0035] 星状細胞腫のトランスクリプトーム解析
４例のびまん性星状細胞腫（DA;GrII）、５例のＡＡ（Gr.III）、及び１６例のＧＢＭ（GrIV；続発性が６例、原発性は１０例）を含むびまん性浸潤型星状細胞腫２５サンプルに対して、１９ｋｃＤＮＡを使用した１８９８１本のヒト遺伝子の発現プロフィールを分析した。各グレードにおける５０％以上のサンプルに使用可能な１４，９２９本の遺伝子は引き続き分析する必要があると思われた。イメージ分析から得たデータは、さらに検討する前にフィルター解析され、正規化され、ｌｏｇ２変換された。星状細胞腫の異なるグレード間、又は正常なサンプルと星状細胞腫のサンプル間の、調整遺伝子の特異的発現を同定するため、必要に応じて１−クラス及び２−クラスオプションを使用して、データに対してマイクロアレイ有意性解析を行った。]
[0036] ＳＡＭ分析によりグレード特定遺伝子を同定する
ＳＡＭ分析により、２５例の星状細胞腫のサンプルから得た１４，９２９本の遺伝子データを調べたところ、正常脳サンプルに比べて、すべての星状細胞腫において３８５本が上方調整され、９１１本が下方調整された。ＤＡｓ（Ｇｒ．II）は、びまん性浸潤型低グレード星状細胞腫であり、これは５〜１０年（４、５、１２）の期間を経ると、グレードIIIの悪性未分化星状細胞腫やグレードIVの悪性ＧＢＭに進行する。ＡＡｓ（Ｇｒ．III）はＧＢＭより悪性度が低く、平均生存率が（３、５、１３、１４）未満のＧＢＭ患者と比べて、ＡＡ患者の平均生存率は２〜３年である。ＧＢＭと低グレード星状細胞腫（ＬＧＡ）間，すなわち、ＤＡとＡＡ間で調整遺伝子の特異発現を同定するため、ＤＡ４例とＡＡ５例の９例、及びＧＢＭ１６例（原発性１０例と続発性６例）から得たデータをＳＡＭ分析した結果、ＧＢＭに比べてＬＧＡ（ＤＡ＆ＡＡ）では４１本の遺伝子が上方調整され、ＬＧＡに比べてＧＢＭでは３７本の遺伝子が上方調整されていることがわかった。続発性ＧＢＭは低グレード、すなわちＤＡ又はＡＡから進行するため、ＧＢＭに比べて、これら腫瘍はＤＡ又はＡＡと発現プロフィールを共有しているように思われる。このように、ＧＢＭ（デノボＧＢＭ）に比べて進行性星状細胞腫（ＤＡ、ＡＡ、続発性ＧＢＭ）に特異な発現プロフィールを得るため、進行性星状細胞腫（ＤＡ４例、ＡＡ５例、及び続発性ＧＢＭ６例）に属する１５サンプルから得たデータと、原発性ＧＢＭに属する１０サンプルとが、ＳＡＭ分析により比較された。結果、原発性ＧＢＭに比較して２０本の遺伝子が進行性星状細胞腫内で上方調整され、進行性星状細胞腫に比較して４５本の遺伝子が上方調整されていることがわかった。]
[0037] リアルタイムＳＡＭ同定遺伝子のＲＴ−定量的ＰＣＲ評価
その特異な発現が星状細胞腫、悪性星状細胞腫（ＡＡ、ＧＢＭ）又は原発性膠芽細胞腫を特徴づける遺伝子を同定するため、ＳＡＭ分析より得たデータを綿密に分析し、興味深い遺伝子を選び更に評価した。異なるグレードの星状細胞腫と膠芽細胞腫の１００サンプルセットそれぞれに対して行ったリアルタイムＲＴ−定量的ＰＣＲ評価により、選ばれた遺伝子の発現パターンを確認した。サンプルセットは、ＤＡ５例、ＡＡ３１例、続発性ＧＢＭ２０例、原発性ＧＢＭ３５例、及び正常な脳サンプル９例を含む。発現パターンの統計的有意性を、マン・ホイットニーの検定により調べた。０．０５以下のＰ値が統計的に有意であると思われる。]
[0038] 星状細胞腫における下方又は上方調整された遺伝子の同定
ＳＡＭ分析とその後のＲＴ−ｑＰＣＲ分析の結果、すべてのグレードの星状細胞腫においてＲＡＢ１３が上方調整されているのに対して、遺伝子ＳＹＴ１，ＲＡＢ２６，ＤＩＲＡＳ２が星状細胞腫すべてのグレードにおいて下方調整されていることがわかった。]
[0039] シナプトタグミンＩ（ＳＹＴ１）は、ＤＡs（５／５；１００％）、ＡＡs（２５／３１；８０％）、続発性ＧＢＭs（１７／２０、８５％）、及び原発性ＧＢＭs（３１／３５；８８．５％）において４倍以上下方調整されているが、正常な脳サンプル（０／９；０％）ではその限りではないことがわかった。Ｐ値は、正常（Normal）な脳細胞とあらゆるグレードの星状細胞腫との間、すなわち、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＤＡ（０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＡＡ（＜０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．続発性ＧＢＭ（＜０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．原発性ＧＢＭ（＜０．００１）との間で統計的有意性を示すことがわかった（図１Ａ）。] 図１Ａ
[0040] 又、腫瘍遺伝子のファミリー（ＲＡＢ２６）のメンバーＲＡＳがＤＡｓ（５／５；１００％）、ＡＡｓ（２１／３０；７０％）、続発性ＧＢＭ（１９／２０；９５％）及び原発性ＧＢＭ（３１／３５；８８．５％）において４倍以上下方調整されるが、正常な脳サンプル（０／９；０％）においてはその限りではないことがわかった。Ｐ値は、正常（Normal）な脳細胞とあらゆるグレードの星状細胞腫との間、すなわち、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＤＡ（０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＡＡ（＜０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．続発性ＧＢＭ（＜０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．原発性ＧＢＭ（＜０．００１）との間で統計的有意性を示すことがわかった（図１Ｂ）。] 図１Ｂ
[0041] ＤＩＲＡＳファミリー、ＧＴＰ−結合、ＲＡＳ−類 ２（ＤＩＲＡＳ２）などが、ＤＡｓ（４/５；８０％）、ＡＡｓ（１９／３１；６１．２％）、続発性ＧＢＭ（２０／２０；１００％）及び原発性ＧＢＭ（２９／３５；８２．８％）において４倍以上下方調整されるが、正常な脳サンプル（０／９；０％）においてはその限りではないことがわかった。Ｐ値は、正常（Normal）な脳細胞とあらゆるグレードの星状細胞腫との間、すなわち、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＤＡ（０．００１）、 Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＡＡ（＜０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．続発性ＧＢＭ（＜０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．原発性ＧＢＭ（＜０．００１）との間で統計的有意性を示すことがわかった（図１Ｃ）。] 図１Ｃ
[0042] ＲＡＢ１３，腫瘍遺伝子のファミリー（ＲＡＢ１３）のメンバーＲＡＳがＤＡｓ（４／５；８０％）、ＡＡｓ（２４／３０；８０％）、続発性ＧＢＭ（１７／２０；８５％）及び原発性ＧＢＭ（３４／３５；９７．１％）の大部分で４倍以上下方調整されるが、正常な脳サンプル（１／９；１１．１％）においてはその限りではないことがわかった。Ｐ値は、正常（Normal）な脳細胞とあらゆるグレードの星状細胞腫との間、すなわち、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＤＡ（０．０５９）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＡＡ（＜０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．続発性ＧＢＭ （＜０．００１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．原発性ＧＢＭ（＜０．００１）との間で統計的有意性を示すことがわかった（図１Ｄ）。] 図１Ｄ
[0043] 悪性星状細胞腫（ＡＡ＆ＧＢＭ）における上方調整された遺伝子の同定
インシュリン様成長因子結合蛋白質７（ＩＧＦＢＰ７）は主に悪性星状細胞腫（ＡＡ、ＧＢＭ）において上方調整されることがわかった。コントロールサンプルと比べて悪性星状細胞腫における過剰発現は、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＡＡ（Ｐ＝０．００２）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．続発性ＧＢＭ（Ｐ＝０．０１）、Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．原発性ＧＢＭ（＜０．００１）との間で統計的有意性を示すことがわかったが、良性星状細胞腫（Ｎｏｒｍａｌ ｖｓ．ＤＡ（Ｐ＝０．２９７）においてはその限りでないことがわかった。ＩＧＦＢＰ７は、ＡＡｓ（２５／３１；８０％），続発性ＧＢＭ（１４／２０；７０％）、及び原発性 ＧＢＭ（３２／３５；９１％）の大部分で４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（２／９；２２％）及びＤＡ（３／５；６０％）においてはその限りでないことがわかった（図２）。] 図２
[0044] 更に、ＩＧＦＢＰ７の蛋白質発現パターンを免疫組織化学的に分析した。正常な脳においては、ニューロンやグリア細胞はＩＧＦＢＰ７に関してネガティブだった。わずかな染色が柔組織や軟髄膜の血管（図示せず）に見られた。腫瘍細胞質のポジティブ染色はＤＡｓの１／９、ＡＡの４０％（４／１０）例にしか見られなかった。ＧＢＭの中で、続発性ＧＢＭの８０％（１２／１５）及び原発性ＧＢＭの１００％（１９／１９）が、腫瘍細胞におけるＩＧＦＢＰ７に対してポジティブ染色を示した（図５）。] 図５
[0045] ＧＢＭ特異遺伝子の同定
ＳＡＭ分析とその後のＲＴ−ｑＰＣＲ分析の結果、遺伝子ＣＯＬ６Ａ１、ＤＣＮ、ＰＬＡＴ、ＬＧＡＬＳ３、ＦＡＢＰ７、ＬＯＸ、ＬＡＭＢ１、ＩＧＦＢＰ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＦＳＴＬ１、ＲＨＯＣ、Ｂ２Ｍは、主にＧＢＭにおいて過剰発現であることがわかった。コントロールサンプルに比べてこれらの遺伝子のＧＢＭにおける過剰発現は、ＤＡやＡＡのような低グレードサンプル（ＬＧＡ）と同様に、統計的に有意であることがわかった。]
[0046] Ｃｏｌｌａｇｅｎ、ｔｙｐｅＶＩ、ａｌｐｈａ １（ＣＯＬ６Ａ１）は、ＧＢＭの大部分（３１／５５；５４．５％）において３倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（１／９；１１％）やＬＧＡｓ（１１／３６；３０．５％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、＜０．００１であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では０．００９であった（図３Ａ）。] 図３Ａ
[0047] デコリン（ＤＣＮ）は、ＧＢＭの大部分（４３／５４、７９．６％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（４／９；４４％）やＬＧＡｓ（１４／３６；３８．９％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、＜０．００３であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｂ）。] 図３Ｂ
[0048] 組織（型）プラスミノーゲン活性化因子は、ＧＢＭの約半分（２８／５４；５１．８％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプルにおいては全く上方調整されず（０／９；０％）、ＬＧＡｓ（４／３６；１１．１％）においても少ししか上方調整されない。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、０．００１であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｃ）。] 図３Ｃ
[0049] 水溶性ガラクトシド結合レクチン３（ＬＧＡＬＳ３）は、ＧＢＭの大部分（３７／５５、６７．２％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（１／９；１１％）やＬＧＡｓ（６／３６；１６．７％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、０．００１であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｄ）。] 図３Ｄ
[0050] 脳細胞型脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ７）は、ＧＢＭの大部分（３５／５５；６３．６％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（１／９；１１％）においては少なく、ＬＧＡｓ（０／３６；０％）においては全く上方調整されないことがわかった。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、０．０４であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｅ）。] 図３Ｅ
[0051] リシルオキシダーゼ（ＬＯＸ）は、ＧＢＭの大部分（３４／５５、６１．８％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（２／９；２２％）やＬＧＡｓ（１０／３６；２７．８％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、０．０３であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｆ）。] 図３Ｆ
[0052] ラミニン（β）１（ＬＡＭＢ１）は、ＧＢＭの大部分（４６／５５、８３．６％）において２倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（１／９；１１％）やＬＧＡｓ（５／３６；１３．９％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、＜０．００１であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｇ）。] 図３Ｇ
[0053] インシュリン様成長因子結合蛋白質３（ＩＧＦＢＰ３）は、ＧＢＭの大部分（３４／５５、６１．８％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（０／９；０％）やＬＧＡｓ（８／３６；２２．２％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、＜０．００１であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｈ）。これに加えて、ＩＧＦＢＰ-３の蛋白質発現パターンが免疫組織化学により分析された。正常な脳細胞においては、ＩＧＦＢＰ-３において、ニューロン細胞が淡く標識化（１+）された。星状細胞腫、乏突起膠細胞、及び血管は標識化されなかった（データを示さず）。星状細胞腫の中で、ＤＡｓの３３．３３％（３／９）及びＡＡｓの８０．０％（８／１０）がポジティブ染色を示した。ＧＢＭの中で続発性ＧＢＭの８６．６６％（１３／１５）及び原発性ＧＢＭの１００％（１９／１９）がＩＧＦＢＰ-３に対してポジティブ染色を示した（図６）。] 図３Ｈ 図６
[0054] 増殖停止とＤＮＡ損傷誘導、α（ＧＡＤＤ４５Ａ）は、ＧＢＭの大部分（３２／５５、５８．２％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（０／９；０％）やＬＧＡｓ（８／３６；２２．２％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、＜０．００１であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｉ）。又、免疫組織化学的染色によりＧＡＤＤ４５Ａの発現パターンを分析した（図７）。テストした原発性及び続発性ＧＢＭサンプルのうち、５８．０％（７／１２）及び５０．０％（３／６）がＧＡＤＤ４５Ａに対する細胞染色においてそれぞれ強いポジティブ染色を示した。ＡＡ（Ｇｒ．ＩＩＩ）及びＤＡ（Ｇｒ．ＩＩ）におけるＧＡＤＤ４５Ａのポジティブ染色の割合は、それぞれ１４．０％（１／７）及び０．０％（０／３）であることがわかった。ポジティブ腫瘍細胞の平均パーセンテージは原発性ＧＢＭサンプルでは高く（３０．０％）、ＧＢＭ及びＡＡではそれぞれ２５．０％及び２０．０％であることがわかった。正常な脳細胞のサンプル５個を分析したところ、グリア細胞はネガティブのＧＡＤＤ４５Ａ染色を示すことがわかった。] 図３Ｉ 図７
[0055] ホリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）は、ＧＢＭの大部分（３９／５５、７０．９％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（０／９；０％）やＬＧＡｓ（４／３６；１１．１％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、＜０．００１であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では＜０．００１であった（図３Ｊ）。免疫組織化学分析により、原発性及び続発性ＧＢＭの８５．０％（１８／２１）及び８６．０％（９／１５）はそれぞれポジティブのＦＳＴＬ１蛋白質染色を示すことがわかった（図８）。予想通り、ＡＡ（３０．０％；３／１０）及びＤＡ（０．０％；０／１０）においてポジティブの割合が少ないことがわかった。正常な脳細胞において、グリア細胞はネガティブのＦＳＴＬ１染色を示すことがわかった。ポジティブ腫瘍細胞の平均パーセンテージは、ＡＡの１３．０％に対して原発性ＧＢＭと続発性ＧＢＭで高く（それぞれ３１．０と２４％）、これはＧＢＭにおいてＦＳＴＬ１が非常に高レベルの発現を示す事実を示唆するものである。] 図３Ｊ 図８
[0056] ラスホモログ遺伝子ファミリーのメンバーＣ（ＲＨＯＣ）は、ＧＢＭの大部分（３７／５５、６７．３％）において２倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（１／９；１１．１％）やＬＧＡｓ（１６／３６；４４．４％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、＜０．００１であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では０．０２１であった（図３Ｋ）。] 図３Ｋ
[0057] βミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）は、ＧＢＭの大部分（３４／５５、６１．８％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（１／９；１１．１％）やＬＧＡｓ（１７／３６；４７．２％）ではそれより少ない調整である。マン・ホイットニーＵ検定より得たＰ値はＧＢＭ ｖｓ．Ｎｏｒｍａｌの比較では、０．００４であり、ＧＢＭ ｖｓ．ＬＧＡの比較では０．０２２であった（図３Ｌ）。Ｂ２Ｍの発現に対する免疫組織化学的染色により、ｍＲＮＡ発現パターンが確認された（図９）。テストしたほとんどのＧＢＭサンプルが強力なポジティブの細胞膜染色（８２．３％；１４／１７）を示したが、未分化星状細胞腫の２８．５７％（２／７）しかポジティブ染色を示さず、又びまん性星細胞主のサンプルのいずれも（０／３）ポジティブ染色を示さなかった。] 図３Ｌ 図９
[0058] ＰＢＥＦ１転写レベルは、ＡＡｓ（９．６０％；３／３１発現比を対数変換した平均指標log2ratio： ０．４４）、ＤＡｓ（０．００％；０／５ 発現比を対数変換した平均指標log2ratio：０．５０）、及びＧＢＭの大部分において、Ｐ値＜０．００１を満たす正常な脳サンプル（０．００％；０／９）に比べて３倍以上上方調整されていることがわかった（Log2ratio=1.585）（図３Ｍ）。統計的有意性はグラフパッドプリズムソフトを使用してマン・ホイットニーＵ検定より評価した。ＰＢＥＦ１の染色パターンは、一般的に粒状びまん性細胞質であることがわかった。更にＧＢＭの広範にわたり（７２．２２％；２６／３６）ポジティブのＰＢＥＲ１染色であることがわかった（図１０Ｅ、Ｆ）。予想通り、ＡＡｓ（４０．００％；４／１０）及びＤＡｓ（２０．００％；２／１０）サンプルにおいてＰＢＥＦ１ポジティブ染色を示す割合が少ないことがわかった（図１０Ｂ、Ｃ）。更に、ポジティブ腫瘍細胞の平均パーセンテージは、ＡＡｓとＤＡｓ２２．００％と８．５０％に対してＧＢＭで高く（３７．５０％）、これはＧＢＭにおいてＰＢＥＦ１が非常に高レベルの発現を示す事実を示唆するものである。正常な脳細胞のグリア細胞はネガティブのＰＢＥＦ１染色を示すことがわかった（図１０Ａ）。] 図１０Ａ 図１０Ｂ 図１０Ｅ 図３Ｍ
[0059] 原発性ＧＢＭの特定遺伝子
ＳＡＭ分析及び続発性ＲＴ−ｑＰＣＲ分析を使用して、２本の遺伝子、すなわち、過剰発現が原発性ＧＢＭに特徴的であるＡＥＢＰ１及びＳＯＤ２を発見した。]
[0060] ＡＥ結合蛋白質１（ＡＥＢＰ１）は、原発性ＧＢＭの大部分（２９／３５、８２．８％）において２倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（１／９；１１．１％）、ＤＡｓ（２／５；４０％）、ＡＡｓ（９／３１；２９％）及び続発性ＧＢＭ（９／２０；４５％）ではそれより少ない調整である。原発性ＧＢＭと他のすべてのグループとの間の転写レベルの違いは統計的に有意性がある：原発性ＧＢＭ vs コントロールサンプル（Ｐ＝０．００２）；原発性ＧＢＭ vs ＤＡｓ（Ｐ＝０．０４３）；原発性ＧＢＭ vs ＡＡｓ（Ｐ＜０．００１）及び原発性ＧＢＭ vs 続発性ＧＢＭ（Ｐ＝０．０２７）（図４Ａ）。] 図４Ａ
[0061] スーパーオキシドディスムターゼ２、ミトコンドリア（ＳＯＤ２）は、原発性ＧＢＭの大部分（２５／３５、７１．４％）において４倍以上上方調整されるが、コントロールサンプル（０／９；０％）、ＤＡｓ（０／５；４０％），ＡＡｓ（５／３１；１６．１％）及び続発性ＧＢＭ（４／２０；２０％）ではそれより少ない調整である。原発性ＧＢＭと他のすべてのグループとの間の転写レベルの違いは統計的に有意性がある：原発性ＧＢＭ vs コントロールサンプル（Ｐ＝０．００１）；原発性ＧＢＭ vs ＤＡｓ（Ｐ＝０．０１２）；原発性ＧＢＭ vs ＡＡｓ（Ｐ<０．００１）及び原発性ＧＢＭ vs 続発性ＧＢＭ（Ｐ＝０．００１）（図４Ｂ）。] 図４Ｂ
[0062] ＰＢＥＦ１の生存率
ＰＢＥＦ１の生存率を分析するため、追跡調査が可能なＧＢＭの過去に遡った５１例に対し、ＰＢＥＦ１の発現を調べた。ＧＢＭ患者において、生存率を予測するにあたって臨床的変数の予後有意性は明確に定義されている一方、ｐ５３の過剰発現やＥＧＦＲ発現のような腫瘍内に見られる公知の遺伝子変異等の蛋白質発現の変化は、個々に明確な予後有意性を示すことができず、それぞれの研究において交絡因子を抱える。よって、多変数分析をするために、ｐ５３とＥＧＦＲの発現を調べる免疫染色の区分解析を行って、患者の生存率に関してＰＢＥＦ１との同時発現の有意性を分析した。]
[0063] ＰＢＥＦ１の発現をＧＢＭ患者の生存率と相互に関連付けて単変量解析を行った結果、統計的有意性がないにもかかわらず、ＰＢＥＦ１がポジティブであるグループの平均生存率はＰＢＥＦ１がネガティブであるグループのそれより低いことがわかった（それぞれ１２ヶ月 vs １６ヶ月 ｐ＝０．１６；図１１Ａ）。多変量解析の場合、ＰＢＥＦ１発現自体は生存率と関連がなかったが、ｐ５３との同時発現は更に低い生存率を示唆する傾向がある。両マーカー共又はどちらかがネガティブのグループの平均生存率は１４ヶ月（緑線）であるのに対し、両マーカー共ポジティブであるグループの平均生存率は８ヶ月（赤線）であった（Ｐ＝０．０８、図１１Ｂ）。又、放射線治療、ＫＰＳの診察、及びｐ５３の発現などが多変量解析（データを示さず）におけるあらゆるステップの生存率の有意な独立予測因子であることがわかった。データをまとめると、ＰＢＥＦ１は、特にｐ５３の異常発現を併発したＧＢＭ患者における潜在的予後マーカーであることを示唆する。] 図１１Ａ 図１１Ｂ
[0064] 従って本発明は、被験者から得た脳組織のテストサンプルや正常な脳細胞のコントロールサンプルにおけるＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、ＤＩＲＡＳ２、及びＲＡＢ１３からなるグループより選ばれた単一又は組み合わせ遺伝子の発現レベルの同定であって、コントロールサンプルと比べてテストサンプルにおいてＲＡＢ１３の高い発現レベル、又はテストサンプルにおいてＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、ＤＩＲＡＤ２の低い発現レベルは、テストサンプルを得た被験者において星状細胞腫が存在することを示唆するものである。]
[0065] 又、本発明の実施の形態によると、in situハイブリダイゼーションやＲＴ-ＰＣＲ分析等の核酸ベースの検出方法におけるオリゴヌクレオチドを採用することによって遺伝子のＲＮＡ転写のレベルをチェックしてこれら遺伝子の発現レベルを同定する。もしくは、免疫組織化学やウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡなどの蛋白質ベースの検出方法における抗体を採用してこれら遺伝子がつくる蛋白質レベルをそれぞれチェックすることによって適宜同定する。]
[0066] 従って、本発明は被験者の星状細胞腫を特徴づけるキットを提供するものであって、該キットは、
ａ）ＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、ＤＩＲＡＳ２、及びＲＡＢ１３等の単一又は組み合わせ遺伝子の有無を具体的に検出することができる試薬
ｂ）前記被験者における星状細胞腫の存在を検出するための前記キットを使用するための指示書
を備えることを特徴とする。]
[0067] 他の実施の形態によると、被験者における星状細胞腫の存在を検出するためのキットであって、該キットは、
[ａ] ＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、ＤＩＲＡＳ２、及びＲＡＢ１３からなるグループより選択された遺伝子の単一又は組み合わせの発現レベルを具体的に検出することができる試薬[ｂ] 前記被験者における星状細胞腫の存在を検出するための前記キットを使用するための指示書であり、これらキットに使用される試薬は、好ましくはＳＥＱＩＤＮｏ．４２、４４、４６、４８で表される単位複製配列や核酸のプローブを含む
とを備えることを特徴とする。]
[0068] 他の実施の形態によると、本発明は被験者の悪性星状細胞腫（ＡＡ，ＧＢＭ）を同定するキットを提供し、前記キットは
ａ）ＩＧＦＢＰ７遺伝子の発現レベルを具体的に検出することができる試薬と、
ｂ）被験者の悪性星状細胞腫（ＡＡ，ＧＢＭ）を同定する前記キットを使用するための指示書、
とを備えることを特徴とする。これらキットに使用される試薬は、好ましくはＳＥＱＩＤＮｏ．５０で表される単位複製配列や核酸のプローブを含む。]
[0069] 更に本発明は被験者の悪性星状細胞腫を同定するキットを提供し、前記キットは
ａ）前記遺伝子により符号化される蛋白質と特に結合する抗体を含む試薬、と
ｂ）当該被験者の星状細胞腫を特徴づける前記キットを使用するための指示書、
とを備えることを特徴とする。]
[0070] 更に他の実施の形態によると、本発明は被験者の膠芽細胞腫（ＧＢＭ）の存在を検出するキットを提供し、前記キットは、
ａ）ＣＯＬ６Ａ１、ＤＣＮ、ＰＬＡＴ、ＬＧＡＬＳ３、ＦＡＢＰ７、ＬＯＸ、ＬＡＭＢ１、ＩＧＦＢＰ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＦＳＴＬ１、ＲＨＯＣ、Ｂ２Ｍ、及びＰＢＥＦ１等の単一又は組み合わせ遺伝子の発現レベルを具体的に検出することができる試薬、と
ｂ）被験者の膠芽細胞腫の存在を検出するための前記キットを使用するための指示書、
とを備えることを特徴とする。これらキットに使用される試薬は、好ましくはＳＥＱＩＤＮｏ．５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７６、及び８０で表される単位複製配列や核酸のプローブを含む。]
[0071] 更に本発明は被験者の膠芽細胞腫の存在を検出するキットを提供し、前記キットは、
ａ）前記遺伝子により符号化される蛋白質と特に結合する抗体を含む試薬、と
ｂ）当該被験者の星状細胞腫を特徴づける前記キットを使用するための指示書、
とを備えることを特徴とする。]
[0072] 更に他の実施の形態によると、本発明は被験者の膠芽細胞腫のタイプを同定するキットを提供し、前記キットは、
ａ）ＡＥＢＰ１、ＳＯＤ２等の単一又は組み合わせ遺伝子の発現レベルを具体的に検出することができる試薬、と
ｂ）被験者の膠芽細胞腫の存在を検出するための前記キットを使用するための指示書、
とを備えることを特徴とする。これらキットに使用される試薬は、好ましくはＳＥＱＩＤＮｏ．７４及び７８で表される単位複製配列や核酸のプローブを含む。]
[0073] 更に本発明は被験者の膠芽細胞腫の存在を検出するキットを提供し、前記キットは、
ａ）前記遺伝子により符号化される蛋白質と特に結合する抗体を含む試薬、と
ｂ）当該被験者の星状細胞腫を特徴づける前記キットを使用するための指示書、
とを備えることを特徴とする。]
[0074] 本発明は被験者の膠芽細胞腫の予後を決定するキットを提供し、前記キットは、
ａ）ＰＢＥＦ１の有無を具体的に検出することができる試薬、と
ｂ）前記被験者の膠芽細胞腫の予後を決定する前期キットを使用するための指示書、
とを備えることを特徴とする。]
[0075] 更に、本発明は被験者の膠芽細胞腫の予後を決定するためのキットを提供し、前記キットは、
ａ）ＰＢＥＦ１遺伝子の発現レベルを具体的に検出することができる試薬、と
ｂ）被験者の膠芽細胞腫の予後を決定するための前記キットを使用するための指示書、
とを備えることを特徴とする。これらキットに使用される試薬は、好ましくはＳＥＱＩＤＮｏ．８０で表される単位複製配列や核酸のプローブを含む。]
[0076] 以下に示す実施例は例示であって、よって本発明がこれによって制限されると解釈してはならない。]
[0077] 実施例１：細胞採取
星状細胞腫のサンプルが、Sri Satya Sai Institute of Higher Medical Sciences and Manipal Hospital, Bangalore, Indiaにて外科手術を受けた患者より採取された。コントロールサンプルには、難知性のてんかん手術を受けた患者から採取した非腫瘍脳組織（側頭葉）が含まれる。グレードの違う合計３７個の星状細胞腫のサンプルが検討に供された。細胞は２等分され、その一方は液化窒素中で急冷凍結され、ＲＮＡが分離されるまで-８０°Ｃで保存された。もう一方は、ホルマリン中に固定されパラフィン切片に加工さ
れ、組織病理学的グレード及び星状細胞腫のタイプを同定するために使用された。]
[0078] 実施例２：ＲＮＡ分離
ＲＮＡのトータルがＴＲＩｚｏｌ ｍｅｔｈｏｄ（Invitrogen, USA）とＲＮｅａｓｙ Ｍｉｄｉ ｋｉｔ（Qiagen）の組み合わせにより、製造者の指示の下、凍結細胞から抽出された。ＲＮＡのサンプルは分光光度計を使用して吸収度を測定することにより定量化され、ゲル化したＭＯＰＳ−ホルムアルデヒド上で視覚化し、量と質を確認した。]
[0079] 実施例３：定量的ＲＴ-ＰＣＲ
選ばれた遺伝子の発現レベルの相対定量を、２段階戦略を使用して実施した：一段階において、高容量のｃＤＮＡアーカイブキット（ＡＢＩＰＲＩＳＭ）を使用して、ｃＤＮＡが異なる細胞サンプルから抽出したＲＮＡより発生したことがわかった。続いて、ｃＤＮＡを以下に示す遺伝子特異的なプライマーセット及びＤｙＮＡｍｏ ＨＳ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ｋｉｔ（Finnzymes, Finland）を使用したテンプレートとして、定量的ＰＣＲをリアルタイムで実施した：使用したプライマーはすべて、アプライドバイオシステム株式会社製Ｐｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０．０を使用して設計された。]
[0080] 配列リスト]
[0081] ＡＢＩＰＲＩＳＭ７９００（アプライドバイオシステム社製）配列検索システムにおいて、ｃＤＮＡを以下に示す遺伝子特異的なプライマーセット及びＤｙｎａｍｏ ｋｉｔ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎ ｄｙｅ（Finnzyme, Finland）を使用したテンプレートとして、定量的ＰＣＲをリアルタイムで実施した。測定はすべて３回行われた。遺伝子、ＲＰＬ３５Ａ（リボソームタンパク質Ｌ３５ａ）、ＡＧＰＡＴ１（１−アシルグリセロール-リン酸塩Ｏ−アシルトランスフェラーゼ１）、ＡＴＰ５Ｇ１（ＡＴＰシンテターゼ、Ｈ+輸送、ミトコンドリアＦ０錯体、亜粒子Ｃ１（亜粒子９）及びＧＡＲＳ（グリシル-ｔＲＮＡシンテターゼ）等がその発現レベルにマイクロアレイ実験において変化がないためインターナルコントロールサンプルとして使用された。９例の異なるてんかん患者から採取した正常な脳組織のサンプルが基準として使用された。そして遺伝子発現における倍率変化が、正常な脳サンプルにおける平均発現率に対して計算された。そして統計的有意性がマン・ホイットニーのＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ（登録商標）ソフトを使用してテストされた。各遺伝子に対して、その発現レベルに応じた適切な倍率変化の閾値を使用して規制サンプルの比率を計算した。]
[0082] 実施例４：病理組織学的及び免疫組織学的（ＩＨＣ）
正常な脳細胞と腫瘍細胞の組織学的切片を、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）製剤を使用して光学顕微鏡検査により調べた。びまん性浸潤型星状細胞腫の腫瘍切片に対し、ＷＨＯのグレーディングシステム（１１）を使用してランク付けした。ＩＨＣ染色用に、腫瘍細胞より採取したパラフィン切片（４μｍ）とコントロールサンプルをシラン被覆のスライド上に採取した。使用した一次抗体は次の通りである。１．ＩＧＦＢＰ７（H-102, SC-3095, 1:25に希釈）; ２．ＩＧＦＢＰ３（H-98, SC-9028, 1:50に希釈）; ３．ＧＡＤＤ４５Ａ（Santa cruz, clone C-20,ウサギ多クローン抗体-1:50 に希釈）; ４．ＦＳＴＬ１（精製GST-FSTL1に対するウサギ多クローン抗体,1:100 に希釈）; ５．Ｂ２Ｍ（Santa cruz,マウス単クローン抗体, 1:50 に希釈）; ６．ＰＢＥＦ１（精製GST-PBEF1に対するウサギ多クローン抗体; 1:1000 に希釈）。マイクロ波抗原回復が１０ｍＭクエン酸塩緩衝剤中、ｐＨ６．０、１８分間４００wattで行われた。主にＧＢＭ症例を分類する目的で使用された抗体は、ｐ５３（単クローン抗体：ＤＯ-７，Ｂｉｏｇｅｎｉｘ-ＵＳＡ，１：２００に希釈）及びＥＧＦＲ（単クローン抗体：Biogenix-USA, 1:50に希釈）であった。ｐ５３に対しては、マイクロ波オーブンで２５〜３５分間、７００Ｗでクエン酸塩緩衝剤中（１０ｍＭ、Ｐｈ６．０）において、脱パラフィン化切片の熱処理を行うことにより抗原回復がなされた。ＥＧＦＲ染色に対しては、切片にＴｒｉｓ-ＥＤＴＡで，ｐＨ９．０、６００Ｗにて３０分間前処理を施した。すべての切片は更にメタノール及び５％の過酸化水素で処理して内因性のペルオキシダーゼを阻止し、続いてＰＢＳバッファ（ｐＨ７．６）で洗浄した。脱脂粉乳（５％）を使用してバックグラウンド染色を４５分間阻止した。そして切片を一次抗体で一晩４°Ｃにて培養した。続いて、高感度のビオチン化していないＨＲＰ検出システム（QD440-XAK, Biogenex）で培養した。“3,3'-ジアミノベンジジン（Sigma）”が発色物質として使用された。]
[0083] ｐ５３及びＥＧＦＲの過剰発現を特徴づけられた脳腫瘍細胞をポジティブコントロールサンプルとして使用した。ｐ５３及びＥＧＦＲの免疫反応性はポジティブに染色した２０％の腫瘍細胞よりポジティブであると考えられた（核及び膜それぞれの細胞質の標識化）。ＧＢＭは、患者の臨床プロフィールやＥＧＦＲ、ｐ５３（５）の発現等を考慮して、原発性と続発性とに分類される。原発性ＧＢＭの患者の平均年齢は、５０．６歳であり、症状の平均持続期間は２．７ヶ月であった。ＥＧＦＲの均一な染色はすべての症例で明らかであり、５例において更なるｐ５３の発現が明らかになった。続発性ＧＢＭの中で、患者の平均年齢は３３．８歳であり、症状の平均持続期間は５．３ヶ月であった。ｐ５３の免疫反応性はすべての症例で均一に明らかであり、２例において更なるＥＧＦＲの発現が明らかになった。]
実施例

[0084] [引用文献]
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权利要求:

請求項1
星状細胞腫、そのグレード、及び膠芽細胞腫の予後を同定する新規なプライマーであって、前記プライマーはＳＥＱＩＤＮｏ．１乃至４０で表されることを特徴とするプライマー。ＳＥＱＩＤＮｏ．１は遺伝子ＳＹＴ１の順方向プライマーである: 5’GGTTGGCTGTTTCCCAGTAAAAC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２は遺伝子ＳＹＴ１の逆方向プライマーである: 5’TTTTAAGAAGTACGGACCATCGG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３は遺伝子ＲＡＢ２６の順方向プライマー である: 5’GTCTGCTGGTGCGATTCAAG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．４は遺伝子ＲＡＢ２６の逆方向プライマーである: 5’GCATGGGTAACACTGCGGA 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．５は遺伝子ＤＩＲＡＳ２の順方向プライマーである: 5’CTGGTGTTGAGGTTTGTGAAAGG 3’ＳＥＱＩＤＮＯ．６は遺伝子ＤＩＲＡＳ２の逆方向プライマーである: 5’CCGTCGTGTCGGTGATCTG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．７は遺伝子ＲＡＢ１３の順方向プライマーである: 5’ATAACTACTGCCTACTACCGTGG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．８は遺伝子ＲＡＢ１３の逆方向プライマーである: 5’CCATGTCACATTTGTTCCCCAG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．９は遺伝子ＩＧＦＢＰ７の順方向プライマーである: 5’GGTCCTTCCATAGTGACGCC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ.１０は遺伝子ＩＧＦＢＰ７の逆方向プライマーである: 5’TCTGAATGGCCAGGTTGTCC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．１１は遺伝子ＣＯＬ６Ａ１の順方向プライマーである: 5’ACAGTGACGAGGTGGAGATCA 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．１２は遺伝子ＣＯＬ６Ａ１の逆方向プライマーである: 5’GATAGCGCAGTCGGTGTAGG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．１３は遺伝子ＤＣＮの順方向プライマーである: 5’AGTTGGAACGACTTTATCTGTCC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．１４は遺伝子ＤＣＮの逆方向プライマーである: 5’GTGCCCAGTTCTATGACAATCA 3’ＳＥＱＩＤＮｏ.１５は遺伝子ＰＬＡＴの順方向プライマーである: 5’ACTGCCGGAATCCTGATGG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ.１６は遺伝子ＰＡＬＴの逆方向プライマーである: 5’TGTGCTTGGCAAAGATGGC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．１７は遺伝子ＬＧＡＬＳ３の順方向プライマーである: 5’TGCTGATAACAATTCTGGGCAC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．１８は遺伝子ＬＧＡＬＳ３の逆方向プライマーである: 5’TGAAGCGTGGGTTAAAGTGGA 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．１９は遺伝子ＦＡＢＰ７の順方向プライマーである: 5’CTCTCAGCACATTCAAGAACACG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２０は遺伝子ＦＡＢＰ７の逆方向プライマーである: 5’GCGAACAGCAACCACATCAC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２１遺伝子ＬＯＸの順方向プライマーである: 5’CAGGGTGCTGCTCAGATTTCC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２２は遺伝子ＬＯＸの逆方向プライマーである: 5’GGTAATGTTGATGACAACTGTGC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２３は遺伝子ＬＡＭＢ１の順方向プライマーである: 5’ACAAGCCCGAACCCTACTGTA 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２４は遺伝子ＬＡＭＢ１の逆方向プライマーである: 5’GACCACATTTTCAATGAGATGGC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２５は遺伝子ＩＧＦＢＰ３の順方向プライマーである: 5’AGAGCACAGATACCCAGAACT 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２６は遺伝子ＩＧＦＢＰ３の逆方向プライマーである: 5’TGAGGAACTTCAGGTGATTCAGT 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２７は遺伝子ＧＡＤＤ４５Ａの順方向プライマーである: 5’GAGAGCAGAAGACCGAAAGGA 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２８は遺伝子ＧＡＤＤ４５Ａの逆方向プライマーである: 5’CACAACACCACGTTATCGGG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．２９は遺伝子ＦＳＴＬ１の順方向プライマーである: 5’CAACCACTGTGAACTGCATCG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３０は遺伝子ＦＳＴＬ１逆方向プライマーである: 5’CCTTTAGAGAACCAGCCATCTG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３１は遺伝子ＲＨＯＣの順方向プライマーである: 5’CCTGCCTCCTCATCGTCTTC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３２は遺伝子ＲＨＯＣの逆方向プライマーである: 5’AGCACATGAGGATGACATCAGTG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３３は遺伝子ＡＥＢＰ１の順方向プライマーである: 5’AAAGGGCGAGGAGTTGGAG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３４は遺伝子ＡＥＢＰ１の逆方向プライマーである: 5’GAGGCTCGGATCTGGTTGT 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３５は遺伝子Ｂ２Ｍの順方向プライマーである: 5’AGGCTATCCAGCGTACTCCAA 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３６は遺伝子Ｂ２Ｍの逆方向プライマーである: 5’AATGCGGCATCTTCAAACC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３７は遺伝子ＳＯＤ２の順方向プライマーである: 5’AACCTCAGCCCTAACGGTG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３８は遺伝子ＳＯＤ２の逆方向プライマーである: 5’AGCAGCAATTTGTAAGTGTCCC 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．３９は遺伝子ＰＢＥＦ１の順方向プライマーである: 5’ATTGCCTTCGGTTCTGGTGG 3’ＳＥＱＩＤＮｏ．４０は遺伝子ＰＢＥＦ１の逆方向プライマーである: 5’CGGCCCTTTTTGGACCTTTTG 3’
請求項2
請求項１に記載のプライマーを使用して被験者の星状細胞腫の存在を診断する方法であって、当該被験者から得た脳組織細胞のテストサンプル、及び正常な脳組織細胞のコントロールサンプルにおけるＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、ＤＩＲＡＳ２、及びＲＡＢ１３からなるグループより選択された遺伝子の単一もしくは組み合わせの発現レベルを決定するステップを含み、コントロールサンプルに比べてテストサンプルにおけるＲＡＢ１３の発現レベルが高い場合、又はＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、ＤＩＲＡＳ２の発現レベルが低い場合は、テストサンプルを得た被験者の星状細胞腫の存在を示唆することを特徴とする方法。
請求項3
請求項１に記載のプライマーを使用して被験者の悪性星状細胞腫（ＡＡ、ＧＢＭ）の存在を診断する方法であって、当該被験者から得た脳組織細胞のテストサンプル、及び正常な脳組織細胞のコントロールサンプルにおける遺伝子ＩＧＦＢＰ７の発現レベルを決定するステップを含み、コントロールサンプルに比べてテストサンプルにおけるＩＧＦＢＰ７の発現レベルが高い場合は、テストサンプルを得た被験者の悪性星状細胞腫（ＡＡ、ＧＢＭ）の存在を示唆することを特徴とする方法。
請求項4
請求項１に記載のプライマーを使用して被験者の膠芽細胞腫の存在を診断する方法であって、当該被験者から得た脳組織細胞のテストサンプル、及び正常な脳組織細胞のコントロールサンプルにおけるＣＯＬ６Ａ１、ＤＣＮ、ＰＬＡＴ、ＬＧＡＬＳ３、ＦＡＢＰ７、ＬＯＸ、ＬＡＭＢ１、ＩＧＦＢＰ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＦＳＴＬ１、ＲＨＯＣ、Ｂ２Ｍ及びＰＢＥＦ１からなるグループより選択された遺伝子の単一もしくは組み合わせの発現レベルを決定するステップを含み、コントロールサンプルに比べてテストサンプルにおけるＣＯＬ６Ａ１、ＤＣＮ、ＰＬＡＴ、ＬＧＡＬＳ３、ＦＡＢＰ７、ＬＯＸ、ＬＡＭＢ１、ＩＧＦＢＰ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＦＳＴＬ１、ＲＨＯＣ、Ｂ２Ｍの発現レベルが高い場合は、テストサンプルを得た被験者の膠芽細胞腫の存在を示唆することを特徴とする方法。
請求項5
請求項１に記載のプライマーを使用して被験者の膠芽細胞腫のタイプを同定する方法であって、当該被験者から得た脳組織細胞のテストサンプル、及び正常な脳組織細胞のコントロールサンプルにおけるＡＥＢＰ１及びＳＯＤ２からなるグループより選択された遺伝子の単一もしくは組み合わせの発現レベルを決定するステップを含み、コントロールサンプルに比べてテストサンプルにおけるＡＥＢＰ１及びＳＯＤ２の発現レベルが高い場合は、テストサンプルを得た被験者の原発性膠芽細胞腫の存在を示唆することを特徴とする方法。
請求項6
請求項１に記載のプライマーを使用して被験者の膠芽細胞腫の予後を決定する方法であって、当該被験者から得た脳組織細胞のテストサンプル、及び正常な脳組織細胞のコントロールサンプルにおける遺伝子ＰＢＥＦ１の発現レベルを決定するステップを含み、コントロールサンプルに比べてテストサンプルにおけるＰＢＥＦ１の発現レベルが高い場合は、テストサンプルを得た被験者の生存率が低いことを示唆することを特徴とする方法。
請求項7
請求項２乃至６に記載のいずれかの方法であって、前記遺伝子の発現レベルを決定するステップはｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーションやＲＴ-ＰＣＲ分析等の核酸ベースの検出方法におけるオリゴヌクレオチドを採用することによって遺伝子のＲＮＡ転写のレベルを決定するステップ、もしくは免疫組織化学又はウエスタンブロッティング分析等の蛋白質ベースの検出方法における抗体を採用してこれら遺伝子が作る蛋白質レベルをそれぞれ任意に決定するステップを含む方法。
請求項8
請求項２、３、４、５、又は６に記載の方法であって、前記遺伝子は、星状細胞腫の存在を決定するためＥＧＦＲ、ｐ５３、及びＫｉ-６７等の公知のマーカーと組み合わせて使用される方法。
請求項9
被験者の星状細胞腫の存在を検出するキットであって、前記キットは、[ａ]特にＳＹＴ１、ＲＡＢ２６、ＤＩＲＡＳ２及びＲＡＢ１３からなるグループより選択された遺伝子の単一又は組み合わせの発現レベルを検出することができる試薬[ｂ]被験者の星状細胞腫を特徴づける前記キットを使用するための指示書とを備えることを特徴とするキット。
請求項10
請求項９に記載のキットであって、前記試薬はＳＥＱＩＤＮｏ．４２、４４、４６及び４８で表される単位複製配列又は核酸プローブを有することを特徴とするキット。
請求項11
被験者の悪性星状細胞腫の存在を検出するキットであって、前記キットは、[ａ]特に遺伝子ＩＧＦＢＰ７の発現レベルを検出することができる試薬[ｂ]被験者の星状細胞腫を特徴づける前記キットを使用するための指示書とを備えることを特徴とするキット。
請求項12
請求項１１に記載のキットであって、前記試薬はＳＥＱＩＤＮＯ．５０で表される単位複製配列又は核酸プローブを有することを特徴とするキット。
請求項13
被験者の膠芽細胞腫の存在を検出するキットであって、前記キットは、[ａ]特にＣＯＬ６Ａ１、ＤＣＮ、ＰＬＡＴ、ＬＧＡＬＳ３、ＦＡＢＰ７、ＬＯＸ、ＬＡＭＢ１、ＩＧＦＢＰ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＦＳＴＬ１、ＲＨＯＣ、Ｂ２Ｍ及びＰＢＥＦ１からなるグループより選択された遺伝子の単一又は組み合わせの発現レベルを検出することができる試薬[ｂ]被験者の星状細胞腫を特徴づける前記キットを使用するための指示書とを備えることを特徴とするキット。
請求項14
請求項１３に記載のキットであって、前記試薬はＳＥＱＩＤＮｏ．５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７６、及び８０で表される単位複製配列又は核酸プローブを有することを特徴とするキット。
請求項15
被験者の膠芽細胞腫のタイプを同定するキットであって、前記キットは、[ａ]特にＡＥＢＰ１及びＳＯＤ２からなるグループより選択された遺伝子の単一又は組み合わせの発現レベルを検出することができる試薬[ｂ]被験者の星状細胞腫を特徴づける前記キットを使用するための指示書とを備えることを特徴とするキット。
請求項16
請求項１５に記載のキットであって、前記試薬はＳＥＱＩＤＮｏ．７４及び７８で表される単位複製配列又は核酸プローブを有することを特徴とするキット。
請求項17
被験者の膠芽細胞腫の予後を決定するキットであって、前記キットは、[ａ]特に遺伝子ＰＢＥＦ１の発現レベルを検出することができる試薬[ｂ]被験者の星状細胞腫を特徴づける前記キットを使用するための指示書とを備えることを特徴とするキット。
請求項18
請求項１８に記載のキットであって、前記試薬はＳＥＱＩＤＮｏ．８０で表される単位複製配列又は核酸プローブを有することを特徴とするキット。
請求項19
請求項９、１１、１３、１５、及び１７のいずれかに記載のキットであって、前記試薬は、特に前記遺伝子により符号化されるタンパク質と結合する抗体を有することを特徴とするキット。